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Embrapa Caprinos e Ovinos

Revisão técnica: Lilian Giotto Zaros

Tradução do Capítulo 22: Luiz Eduardo Laguna

Fotos da Capa: Ana Carolina de Souza Chagas, Andréa Caetano da Silva, Valdomiro Bellato, Jerônimo Lopes Ruas

Unidade responsável pela edição (e-book)

Embrapa Informação Tecnológica

Coordenação editorial: Fernando do Amaral Pereira, Lucilene Maria de Andrade, Juliana Meireles Fortaleza

Revisão de texto: Josmária Madalena Lopes

Normalização bibliográfica: Celina Tomaz de Carvalho

Capa: Carlos Eduardo Felice Barbeiro

Revisão do e-book: Jane Baptistone de Araújo

Tratamento editorial do e-book: Alexandre Abrantes Cotta de Mello

Conversão e editoração do e-book: WOC Tecnologia da Informação Ltda

1ª edição

1ª impressão (2009): 2.000 exemplares

2ª edição

E-book (2012)

Todos os direitos reservados

Para uso exclusivo de Embrapa Caprinos. A reprodução não autorizada desta publicação, no todo ou em parte, constitui violação dos direitos autorais (Lei nº 9.610).

Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP)

Embrapa Informação Tecnológica

Doenças parasitárias de caprinos e ovinos: epidemiologia e controle / Antonio Cézar Rocha Cavalcante, Luiz da Silva Vieira, Ana Carolina de Souza Chagas, Marcelo Beltrão Molento, editores técnicos. – 2. ed. – Brasília, DF : Embrapa, 2012.

E-book, no formato ePub, convertido do livro impresso.

ISBN 978-85-7035-040-4

1. Caprino. 2. Ovino. 3. Doença animal. 4. Parasito de animal. 5. Epidemiologia. 6. Controle biológico. 7. Fitoterapia. I. Cavalcante, Antonio Cézar Rocha. II. Vieira, Luiz da Silva. III. Chagas, Ana Carolina de Souza. IV. Molento, Marcelo Beltrão. V. Embrapa Caprinos e Ovinos.

CDD 631.5233

© Embrapa 2012

Autores

Adrián Luiz Lifschitz

Médico-veterinário, doutor em Ciência Animal, professor da Faculdad de Ciencias Veterinárias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Tandil, Argentina
adrianl@vet.unicen.edu.ar

Alessandro Francisco Talamini Amarante

Médico-veterinário, doutor em Medicina Veterinária, professor da Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP
amarante@ibb.unesp.br

Ana Carolina de Aguiar Vasconcelos Carneiro

Bióloga, mestre em Parasitologia, doutoranda do Departamento de Parasitologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG
anacarolina_avc@yahoo.com.br

Ana Carolina de Souza Chagas

Bióloga, doutora em Ciência Animal, pesquisadora da Embrapa Pecuária Sudeste, São Carlos, SP
carolina@cppse.embrapa.br

Ana Célia Rodrigues Athayde

Médica-veterinária, doutora em Ciências Biológicas, professora da Universidade Federal de Campina Grande, Campina Grande, PB
athayde@cstr.ufcg.edu.br

Ana Lourdes Fernandes Camurça-Vasconcelos

Médica-veterinária, doutora em Ciências Veterinárias, professora da Faculdades Nordeste, Fortaleza, CE
anacamurca@bol.com.br

Antônio Cézar Rocha Cavalcante

Médico-veterinário, doutor em Ciências, pesquisador da Embrapa Caprinos e Ovinos, Sobral, CE
cesar@cnpc.embrapa.br

Antonio Pereira de Souza

Médico-veterinário, doutor em Ciências Veterinárias, professor da Universidade do Estado de Santa Catarina, Florianópolis, SC
apereira@uol.com.br

Carlos Edmundo Lanusse

Médico-veterinário, Ph.D. em Ciência Animal, professor da Faculdad de Ciencias Veterinárias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Tandil, Argentina
clanusse@vet.unicen.edu.ar

Charles Ferreira Martins

Médico-veterinário, doutor em Medicina Veterinária, professor da Universidade para o Desenvolvimento do Estado e da Região do Pantanal, Campo Grande, MS
martinscf68@yahoo.com.br

Cícero Temístocles Coutinho Costa

Médico-veterinário, doutor em Ciências Veterinárias, fiscal federal agropecuário do Laboratório Nacional Agropecuário no Pará (Lanagro), Belém, PA
temístoclescosta@bol.com.br

Cláudia Maria Leal Beviláqua

Médica-veterinária, doutora em Ciências Biológicas, professora da Universidade Estadual do Ceará, Fortaleza, CE
claudiam@fortalnet.com.br

Cláudio Roberto Madruga

Médico-veterinário, doutor em Parasitologia Veterinária, professor da Universidade Federal da Bahia, Salvador, BA
crmadruga@ufba.br

Deborah Aparecida Negrão-Corrêa

Bióloga, doutora em Imunologia, professora da Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG
denegrão@icb.ufmg.br

Jackson Victor de Araújo

Médico-veterinário, doutor em Parasitologia, professor da Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG
jvictor@ufv.br

Jeronimo Lopes Ruas

Médico-veterinário, doutor em Ciências Veterinárias, professor da Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, RS
ruas@ufpel.tche.br

João Luiz Horácio Faccini

Médico-veterinário, doutor em Entomologia, professor do Departamento de Parasitologia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ
faccini@ufrrj.br

Luana Paula Haubold Neis Veiga

Médica-veterinária, mestre em Ciências Veterinárias, médica-veterinária da Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina, Florianópolis, SC
a8lpv@cav.udesc.br

Luís Ignácio Alvarez

Médico-veterinário, doutor em Ciência Animal, professor da Faculdad de Ciencias Veterinárias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Tandil, Argentina
lalvarez@vet.unicen.edu.ar

Luiz da Silva Vieira

Médico-veterinário, doutor em Ciências, pesquisador da Embrapa Caprinos e Ovinos, Sobral, CE
lvieira@cnpc.embrapa.br

Magda Vieira Benavides

Zootecnista, doutora em Ciência da Lã, pesquisadora da Embrapa Pecuária Sul, Bagé, RS
magdabenavides@hotmail.com

Marcelo Beltrão Molento

Médico-veterinário, doutor em Parasitologia, professor da Universidade Federal do Paraná, Curitiba, PR
molento@ufpr.br

Márcia Benedita Oliveira Silva

Médica-veterinária, doutora em Ciências, professora do Departamento de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, MG
mbosilva@yahoo.com.br

Maria Elisabeth Aires Berne

Médica-veterinária, doutora em Ciências, professora da Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, RS
bernemea@ufpel.tche.br

Mauro Martins Teixeira

Médico, doutor em Imunofarmacologia, professor da Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG
mmtexi@icb.ufmg.br

Michelline do Vale Maciel

Médica-veterinária, doutora em Ciências Veterinárias, médica-veterinária autônoma, Fortaleza, CE
michellinevet@gmail.com

Neila Cilene Medeiros de Morais

Médica-veterinária, mestre em Ciências Veterinárias, médica-veterinária autônoma
neilamorais@gmail.com

Onaldo Guedes Rodrigues

Médico-veterinário, doutor em Ciências Biológicas, professor da Universidade Federal de Campina Grande, Campina Grande, PB
onaldo@cstr.ufcg.edu.br

Ricardo Wagner de Almeida Vitor

Farmacêutico, doutor em Ciências, professor da Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG
ricardovitor@icb.ufmg.br

Sandra Batista dos Santos

Médica-veterinária, doutora em Ciências Veterinárias, médica-veterinária autônoma
sanbsantos@ufrrj.br

Sandra Mayumi Nishi

Médica-veterinária, pós-doutora em Medicina Veterinária, médica-veterinária autônoma
sandra@msn.com.br

Solange Maria Gennari

Médica-veterinária, doutora em Tecnologia Nuclear, professora da Universidade de São Paulo, São Paulo, SP
sgennari@usp.br

Tiago Gallina Corrêa

Médico-veterinário, mestre em Parasitologia, doutorando em Veterinária da Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, RS
tiagogallina@gmail.com

Valdomiro Bellato

Médico-veterinário, doutor em Medicina Veterinária, professor da Universidade do Estado de Santa Catarina, Florianópolis, SC
a2vb@cav.udesc.br

Wilson Wouflan Silva

Médico-veterinário, doutor em Ciências, professor da Universidade Federal de Campina Grande, Campina Grande, PB
wouflan@hotmail.com

Apresentação

A importância da caprinocultura e da ovinocultura no cenário internacional aumenta a demanda por conhecimentos e tecnologias que contribuam para a eficiência dessas atividades. As práticas de manejo zootécnico de forma intensiva favorecem o aparecimento de uma gama de enfermidades. Nesse contexto, as doenças parasitárias, principalmente as ocasionadas por nematoides gastrintestinais e pulmonares, figuram entre as maiores preocupações de produtores e técnicos do setor.

As endoparasitoses, em especial, limitam os níveis produtivos da caprinocultura e da ovinocultura em todo o mundo, e diferentes métodos têm sido utilizados no intuito de minimizar o impacto negativo dessas doenças para a produção desses pequenos ruminantes. O emprego de um método isolado nem sempre apresenta resultados satisfatórios; assim, os produtores veem-se obrigados a reduzir o tamanho dos rebanhos ou, em situações extremas, a desistir da atividade. A forte resistência desenvolvida por helmintos parasitas de caprinos e ovinos contra a maioria das drogas comercializadas no Brasil tornou-se um problema de segurança alimentar, sobretudo se for considerada a progressiva importância do leite de cabra para populações carentes do Brasil.

A partir da década de 1980, a Embrapa Caprinos e Ovinos iniciou estudos a respeito de aspectos epidemiológicos da nematodeose gastrintestinal, de resistência genética, de imunologia, e de prevalência e medidas de controle de ectoparasitos. Esses trabalhos geraram informações que permitiram a ampliação dos conhecimentos sobre essas enfermidades em caprinos e ovinos. Tais estudos resultaram no esquema de vermifugação estratégica para regiões semiáridas, até hoje utilizado por produtores de todos os níveis tecnológicos, apesar das restrições relacionadas à resistência parasitária.

Na década de 1990, considerando o crescente estímulo ao consumo de carne, leite e derivados de caprinos e ovinos e os possíveis riscos à saúde humana, decorrentes do emprego de medicamentos veterinários em animais de produção; a Embrapa Caprinos e Ovinos incluiu, em sua programação de pesquisa, estudos que contribuíssem para a redução do uso de quimioterápicos no controle das nematodioses e ectoparasitoses. Desse modo, passou a gerar informações técnicas capazes de promover a descontaminação das pastagens mediante alternativas não químicas de controle.

Este livro, pelo seu conteúdo, é, assim, de grande valor para a exploração racional de pequenos ruminantes. A obra é fruto de persistente trabalho e de parcerias de pesquisadores experientes e compromissados, pertencentes a várias instituições brasileiras de diversas regiões do País. Ao empenho deles, soma-se a contribuição de pesquisadores da Faculdad de Ciencias Veterinarias da Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires (UNCPBA), Tandil, Argentina.

Evandro Vasconcelos Holanda Júnior
Chefe-Geral
Embrapa Caprinos e Ovinos

Mauricio Mello de Alencar
Chefe-Geral
Embrapa Pecuária Sudeste

Prefácio

Pela primeira vez no Brasil, foram reunidos, em um único livro, textos que abordam as principais parasitoses que acometem pequenos ruminantes. Esta obra resultou da iniciativa de três pesquisadores da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa) – em seu Centro Nacional de Pesquisa de Caprinos e Ovinos, localizado em Sobral, CE –, Dr. Antônio Cézar Rocha Cavalcante, Dr. Luiz da Silva Vieira e Dra. Ana Carolina de Souza Chagas, atualmente lotada na Embrapa Pecuária Sudeste. Juntaram-se a eles especialistas das mais diferentes áreas, 32 brasileiros e 3 argentinos, para escreverem os 22 capítulos que compõem este livro. Aos três editores técnicos, uniu-se, em uma etapa posterior, o Dr. Marcelo Beltrão Molento, professor da Universidade Federal do Paraná.

O livro “Doenças Parasitárias de Caprinos e Ovinos: epidemiologia e Controle” tem o objetivo de divulgar os resultados obtidos em pesquisas realizadas em diferentes instituições de ensino e pesquisa, bem como de repassar informações acadêmicas para técnicos, estudantes e produtores.

As parasitoses nas criações de animais domésticos em nosso País, onde predomina o clima tropical ou subtropical, produzem considerável prejuízo econômico. Os rebanhos de ovinos e caprinos são acometidos por grande número de espécies de parasitas, que causam redução acentuada na produtividade, geram despesas com mão de obra e medicamentos e, em alguns casos extremos, levam os animais à morte. Neste livro, a importância econômica, a epidemiologia e a profilaxia das principais espécies de helmintos, protozoários e artrópodes que parasitam pequenos ruminantes no Brasil são abordadas detalhadamente. Além disso, alguns capítulos destinam-se à discussão sobre os anti-helmínticos e o grave problema relacionado ao surgimento de parasitas com resistência a tais produtos. Por essa razão, também são apresentados métodos alternativos de profilaxia, como o controle biológico e o uso de fitoterápicos. Dois capítulos tratam, exclusivamente, da resposta imunológica dos animais contra os parasitas e dos mecanismos genéticos relacionados à eficiência dessa resposta.

Nesta obra, portanto, o leitor terá acesso aos avanços mais recentes da pesquisa científica sobre a epidemiologia e a profilaxia das enfermidades parasitárias de ovinos e de caprinos.

Alessandro Francisco Talamini Amarante
Professor da Universidade Estadual Paulista

Capítulo 1
Nematoides gastrintestinais em ovinos

Alessandro Francisco Talamini Amarante

Introdução

A verminose é causada por várias espécies de helmintos que parasitam o trato gastrintestinal dos ovinos. Vários aspectos influenciam a epidemiologia dessa enfermidade, tais como: capacidade do hospedeiro de desenvolver imunidade contra as infecções parasitárias, condições climáticas e manejo dos animais.

Praticamente todos os animais criados a campo albergam uma ou mais espécies de helmintos. O parasitismo, entretanto, não é sinônimo de doença, pois, geralmente, os animais de um rebanho encontram-se em boas condições de saúde, ou pelo menos, a maioria deles. Isso decorre do fato de os hospedeiros terem mecanismos imunológicos que possibilitam, na maioria das vezes, manter a população de endoparasitas sob controle. Quando isso ocorre, pode-se afirmar que a relação parasita-hospedeiro está em equilíbrio (AMARANTE, 2001).

Contudo, essa situação de equilíbrio pode ser alterada por diversos fatores como o manejo, a condição nutricional, a idade e o estado fisiológico dos animais. O rompimento desse equilíbrio é, muitas vezes, produzido inadvertidamente pela ação do próprio homem. Exemplos de atuação desfavorável são fartos, entre os quais se pode destacar a superlotação da pastagem, que resulta em elevada contaminação ambiental com os estádios de vida livre dos parasitas. Esse é o caso de pastagens formadas com forrageiras, que apresentam elevada produtividade e permitem a manutenção de número elevado de animais por hectare. Situação ainda pior ocorre quando os animais são mantidos, em grande número, em áreas que não comportam alta lotação. Nesse caso, além da elevada contaminação, os animais sofrerão com a subnutrição, o que comprometerá o seu desempenho produtivo e a resposta imunológica contra os parasitas.

Os animais expostos a altas cargas de parasitas podem sucumbir, especialmente, os mais jovens, que são os mais susceptíveis. Outro problema frequente está relacionado à introdução de animais de raças provenientes de regiões de clima temperado, os quais não apresentam resistência contra algumas espécies de parasitas abundantes em regiões tropicais (AMARANTE et al., 2004). Esses animais, por serem considerados de alta produtividade, acabam, muitas vezes, substituindo raças adaptadas às condições de criação dos trópicos.

Epidemiologia

O conhecimento da epidemiologia da verminose é de fundamental importância para o estabelecimento de medidas adequadas de profilaxia. A seguir, serão abordados aspectos relacionados com a epidemiologia, e a forma como tais conhecimentos podem ser utilizados na elaboração de estratégias de controle.

Principais espécies de helmintos gastrintestinais parasitas de ovinos no Brasil

Os ovinos podem ser parasitados simultaneamente por várias espécies de nematoides gastrintestinais. Algumas das que parasitam ovinos criados no Brasil estão listadas na Tabela 1. A diversidade de espécies que parasitam os animais é influenciada pela frequência de tratamentos com anti-helmíntico, pelo manejo e pelas condições ambientais. No Sul do Brasil, por exemplo, as temperaturas baixas do inverno favorecem a ocorrência de Ostertagia spp., gênero que não tem sido registrado em ovinos criados em outras regiões do País (Tabela 1).

Tabela 1. Prevalência (%) e intensidade média da infecção (dados entre parênteses) por nematoides gastrintestinais em ovinos criados em seis estados brasileiros.

Espécie

Estado

RS(1)

SC(2)

SP(3)

MG(4)

CE(5)

BA(6)

Haemonchus contortus

88 (88)

100

100 (3.265)

85,3 (1.487)

71 (491)

60 (162)

Trichostrongylus axei

54 (67)

98,7

8 (2)

77,3 (367)

27,1 (207)

27 (183)

Ostertagia circumcincta

92 (130)

100

–

–

–

–

Ostertagia ostertagi

70 (31)

100

–

–

–

–

Ostertagia trifurcata

54 (22)

–

–

–

–

–

Ostertagia lyrata

30 (8)

–

–

–

–

–

Trichostrongylus colubriformis

58 (101)

100

85 (2.154)

94,7 (4.872)

1 (8)

40 (652)

Cooperia spp.

–

–

–

–

0,04 (0,3)

–

Cooperia curticei

4 (0,6)

6,9

73 (169)

–

–

20 (465)

Cooperia oncophora

44 (29)

4,8

–

–

–

–

Cooperia punctata

42 (16)

69,1

50 (34)

96 (964)

–

2 (20)

Cooperia pectinata

–

18,4

12 (13)

–

–

–

Cooperia mcmasteri

10 (2)

–

–

–

–

–

Cooperia spatulata

–

0,8

–

–

–

–

Bunostomum trigonocephalum

–

–

3,8 (1)

68 (18)

0,02 (0,2)

6 (33)

Nematodirus spatigher

78 (130)

100

–

–

–

–

Strongyloides papillosus

16 (13)

–

19 (22)

13,3 (3)

0,02 (0,2)

40 (652)

Oesophagostomum columbianum

18 (1)

–

69 (125)

78,7 (52)

0,6 (5)

46 (18)

Oesophagostomum venulosum

72 (9)

100

–

–

–

2 (55)

Trichuris spp.

–

–

–

–

0,1 (0,8)

–

Trichuris ovis

88 (5)

100

3,8 (1)

–

–

3 (6)

Trichuris globulosa

60 (3)

–

–

–

–

47 (5)

Trichuris discolor

–

–

–

4 (0,5)

–

–

Skrjabinema ovis

–

–

–

–

–

25 (27)

Fonte: (1)Vieira et al. (1989); (2)Ramos et al. (2004); (3)Vasconcelos et al. (1985); (4)Guimarães et al. (1976); (5)Arosemena et al. (1999); (6)Lopes et al. (1975).

Quando os animais são tratados com anti-helmíntico, algumas espécies desaparecem e apenas aquelas com maior potencial biótico permanecem parasitando o rebanho. Os parasitas pulmonares de ovinos são exemplos de nematoides que deixaram de ser registrados (RAMOS et al., 2004). Por sua vez, a diversidade de espécies de nematoides é maior quando os ovinos compartilham pastagens com bovinos (GIUDICI et al., 1999).

A importância relativa das diferentes espécies varia em função da combinação de três fatores: intensidade da infecção, prevalência e patogenicidade do parasita. Com base nesses fatores, pode-se afirmar que Haemonchus contortus é a principal espécie que parasita ovinos no Brasil (AMARANTE et al., 2004; AROSEMENA et al., 1999; RAMOS et al., 2004). Além disso, as populações dessa espécie são, normalmente, resistentes aos anti-helmínticos, o que dificulta o seu controle.

A segunda espécie em ordem de importância é Trichostrongylus colubriformis (AMARANTE et al., 2004). Esse parasita é muito comum e também apresenta resistência aos anti-helmínticos. No Sul do Brasil, a espécie Trichostrongylus axei também é relevante em ovinos (RAMOS et al., 2004; SANTIAGO et al., 1976).

Oesophagostomum columbianum é outra espécie merecedora de destaque em virtude da sua grande patogenicidade, e mais, está presente com relativa frequência nos rebanhos de ovinos (AMARANTE et al., 2004; LOPES et al., 1975; SANTIAGO et al., 1976). Outras espécies de nematoides, tais como Cooperia curticei, Cooperia punctata, Strongyloides papillosus e Trichuris ovis, também foram registradas em ovinos (AMARANTE et al., 1997; RAMOS et al., 2004; SANTIAGO et al., 1976). Na região Sul do Brasil ainda é comum o parasitismo por Ostertagia (=Teladorsagia) circumcincta, Nematodirus spp. e Oesophagostomum venulosum (RAMOS et al., 2004; SANTIAGO et al., 1975).

Biologia dos estádios de vida livre dos nematoides

As condições climáticas e o microclima da pastagem têm grande influência no desenvolvimento e na sobrevivência dos estádios de vida livre no ambiente, e podem favorecer ou não a migração das larvas infectantes (L3) das fezes para o capim. O microclima na pastagem varia em função do porte e da morfologia das diferentes espécies forrageiras.

Medidas de manejo podem ser adotadas visando limitar o contato entre as larvas infectantes dos parasitas e o seu hospedeiro. Por essa razão, é imprescindível conhecer o desenvolvimento, a sobrevivência e a dispersão no ambiente das fases de vida livre dos parasitas.

Existem diferenças na resistência dos diversos estádios no ambiente. O estádio mais resistente é o de larva infectante, seguido do de ovos larvados e, por último, o de ovos que ainda não se desenvolveram (na fase de mórula) e de larvas de primeiro e segundo estádio (LEVINE; TODD JUNIOR, 1975). A rápida dessecação das cíbalas fecais resulta na destruição dos ovos dos nematoides, a menos que eles estejam larvados. Nesse estádio, os ovos de H. contortus são bastante resistentes e mantêm-se viáveis em condições secas por mais de seis semanas (SILVERMAN; CAMPBELL, 1959). Da mesma forma, ovos larvados e larvas infectantes (L3) de T. colubriformis são altamente resistentes à dessecação. Por sua vez, ovos que ainda não se desenvolveram são pouco resistentes, enquanto larvas de primeiro e segundo estádios são completamente vulneráveis à dessecação (ANDERSEN; LEVINE, 1968).

Temperaturas amenas aumentam o tempo de sobrevivência das larvas infectantes; e temperaturas elevadas reduzem esse período. Em experimento in vitro, em que larvas infectantes de T. colubriformis foram mantidas na água, observou-se que, após 32 dias de estocagem em temperaturas que variaram de 4 °C a 25 °C, a sobrevivência das larvas foi superior a 98%. Em temperaturas mais elevadas, o tempo de sobrevivência foi menor: 95% a 30 °C; 73% a 35 °C, e as larvas mantidas durante 32 dias a 40 °C não sobreviveram (ANDERSEN et al., 1966).

O desenvolvimento dos ovos e a eclosão de larvas de primeiro estádio de T. colubriformis foram praticamente nulos a 4 ºC. Ovos mantidos nas temperaturas de 10 ºC, 20 ºC e 30 ºC propiciaram a eclosão de larvas em, respectivamente, 11,2 dias; 42 h e 17 h, e a formação de larvas infectantes em 39,5 dias; 9,7 dias e 4,3 dias. O maior percentual de desenvolvimento até o terceiro estádio ocorreu na temperatura de 20 ºC. Ao contrário da temperatura, a umidade teve pouca influência na sobrevivência das larvas infectantes. Larvas mantidas em umidade relativa de 33%, 56% e 97% sobreviveram por aproximadamente 90 dias quando mantidas em temperatura de 20 °C, e por 35 a 40 dias em temperatura de 30 °C (BEVERIDGE et al., 1989).

Há, ainda, diferenças entre as espécies de nematoides gastrintestinais. Larvas infectantes de H. contortus sobrevivem melhor a repetidas dessecações do que larvas infectantes de T. colubriformis (LEVINE; TODD JUNIOR, 1975). Em contraste, os estádios de vida livre de H. contortus são menos resistentes a temperaturas extremas do que os de T. colubriformis (LEVINE et al., 1974).

Enquanto intactas, as cíbalas fecais dos ovinos podem se constituir em reservatório de larvas infectantes (ALMEIDA et al., 2005; CARRATORE, 2004; ROCHA, 2006). Excetuando-se a época chuvosa e quente do ano, a degradação das fezes dos ovinos no ambiente é muito lenta. Em Botucatu, SP, fezes depositadas na pastagem no outono e no inverno ainda estavam intactas 16 semanas após a sua inoculação no ambiente (ROCHA, 2006).

Mais de 50% dos ovos de H. contortus presentes nas fezes deram origem a larvas infectantes, quando cíbalas fecais intactas foram mantidas dentro de placas de Petri, em estufa a 25 ºC. Por sua vez, quando amostras similares foram colocadas sobre a pastagem, com 30 cm de altura, o percentual de recuperação de larvas infectantes das fezes e da pastagem foi bastante baixo, geralmente inferior a 1%. Já em pastagens baixas, com 5 cm de altura, por causa da incidência direta do sol sobre as fezes, a recuperação de larvas infectantes de H. contortus foi ainda menor. (CARRATORE, 2004).

Migração e recuperação de larvas da pastagem

A fim de que sejam ingeridas pelo hospedeiro, as larvas infectantes dos estrongilídeos devem abandonar as fezes e migrar para a pastagem. A migração é influenciada pela intensidade e frequência das chuvas, pela temperatura e pela morfologia das forrageiras (CARRATORE, 2004; ROCHA, 2006). Em Botucatu, as maiores quantidades de larvas infectantes de H. contortus foram recuperadas quando as fezes foram depositadas em capim aruana (Panicum maximum), e não em capim coast-cross (Cynodon dactylon) ou braquiária (Brachiaria decumbens) (CARRATORE, 2004). Além disso, larvas infectantes foram recuperadas em menor tempo quando a contaminação da pastagem foi realizada nos meses quentes do ano (novembro e fevereiro – estação das águas). Temperaturas amenas, em torno de 17 ºC, associadas com precipitações reduzidas propiciaram a recuperação por mais tempo de larvas do ambiente. No início de setembro, 16 semanas após a contaminação da pastagem com fezes, realizada em maio, larvas infectantes ainda foram recuperadas da pastagem.

No Paraná, em condições de clima temperado, não foi observada influência da espécie do capim na recuperação de larvas infectantes. Nesse experimento, avaliaram-se as gramíneas tifton (Cynodon sp.) e paspalum (Paspalum paniculatum) no verão, e azevém (Lolium multiflorum) e aveia (Avena strigosa) no inverno (DITTRICH et al., 2004).

A distribuição vertical das larvas no capim é influenciada pelos mesmos fatores. Observou-se que, no outono, grande número de larvas infectantes de T. colubriformis conseguiu migrar até as partes mais altas do capim aruana, enquanto em capim braquiária, elas foram encontradas em maior número na base da pastagem. Já, na primavera, a distribuição das larvas foi similar nas duas forrageiras (ROCHA et al., 2007). Em estudo sobre a sobrevivência e a distribuição de larvas de Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp. em Paspalum notatum (gramínea), no Rio de Janeiro, durante o período seco do ano, verificou-se que a maioria das larvas oriundas das fezes de ovinos encontravam-se na metade superior da forrageira e à distância de até 15 cm das fezes (ALMEIDA et al., 2005). Já, no Paraná, constatou-se que, tanto no verão como no inverno, a maior quantidade de larvas estava localizada no estrato inferior das forrageiras avaliadas (DITTRICH et al., 2004).

Os estudos citados chamam a atenção para as diferenças entre os resultados obtidos nas diversas regiões brasileiras, enfatizando a necessidade de realização de estudos regionais detalhados, com a finalidade de elucidar o desenvolvimento dos estádios de vida livre até a formação das larvas infectantes, bem como determinar o período de sobrevivência e a dinâmica de dispersão das larvas no ambiente.

Epidemiologia da verminose em algumas regiões do Brasil

A epidemiologia dos parasitas sob os hospedeiros sofre influência direta das condições ambientais e, em consequência, pode causar maior ou menor transmissão da verminose.

Região Nordeste

No Semiárido nordestino, a transmissão dos parasitas é praticamente nula durante os períodos de estiagem prolongada. Nos Inhamuns, região Semiárida do Ceará, as maiores precipitações pluviométricas ocorrem de janeiro a maio e a estação seca de junho a dezembro. Os estudos nessa região indicaram que as maiores cargas parasitárias nos ovinos ocorrem entre abril e julho, e a população de parasitas se mantém, de uma estação favorável até a outra, graças à sobrevivência dos nematoides adultos no hospedeiro (AROSEMENA et al., 1999).

Da mesma forma, em Petrolina, PE, a falta de umidade é o fator limitante à transmissão dos nematoides. Nessa região, a precipitação anual é muito baixa (350 mm/ano a 400 mm/ano) e distribui-se irregularmente de novembro a abril. Nos meses secos, a transmissão dos nematoides é inexpressiva (CHARLES, 1989). Em ovinos, as maiores cargas parasitárias também foram registradas na estação chuvosa. H. contortus foi o parasita com maior prevalência, o qual apresentou número elevado de larvas inibidas (L4) tanto na estação chuvosa quanto na seca (CHARLES, 1995), o que sugere que esse mecanismo também é importante na estratégia de sobrevivência do parasita às condições ambientais adversas.

Região Sudeste

Embora com variações sazonais, em São Paulo observa-se a presença de larvas infectantes na pastagem ao longo de todo o ano (AMARANTE; BARBOSA, 1995, 1998; AMARANTE et al., 1996; FERNANDES et al., 2004). Em Botucatu, o máximo da infecção por H. contortus em cordeiros traçadores ocorreu no mês de julho (AMARANTE; BARBOSA, 1998). Da mesma forma, em estudo realizado ao longo de 3 anos, a maior quantidade de larvas infectantes foi recuperada da pastagem no período do inverno, Figuras 1 e 2, (AMARANTE; BARBOSA, 1995). Nesse mesmo local, verificou-se que as temperaturas mais altas e as precipitações elevadas, que ocorrem na chamada “estação das águas”, reduziram o tempo de recuperação de larvas infectantes do ambiente. E, ao contrário, as condições climáticas que mais favoreceram o desenvolvimento e a sobrevivência das larvas nas fezes, bem como a sobrevivência e a manutenção das larvas no capim, foram aquelas com temperaturas médias mais baixas, em torno de 17 °C a 18 ºC, acompanhadas de baixas precipitações pluviométricas (CARRATORE, 2004).

Figura 1. Contagem de ovos por grama de fezes (OPG) em exames coprológicos de ovelhas e de larvas infectantes de Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp., por quilograma de matéria seca (MS) de pastagem (L3/kg MS). Valores médios mensais obtidos de janeiro de 1989 a dezembro de 1991.

Fonte: Amarante e Barbosa (1996).

Figura 2. Valores médios mensais de precipitação pluviométrica (A), temperatura e umidade relativa do ar (B) obtidos em Botucatu, SP, de janeiro de 1989 a dezembro de 1991.

Fonte: Amarante e Barbosa (1996).

Em Ilha Solteira, na região noroeste do Estado de São Paulo, que apresenta temperaturas mais elevadas, número expressivo de larvas infectantes foi encontrado na pastagem durante a estação seca (FERNANDES et al., 2004). Já, em Tupi Paulista, as maiores concentrações de larvas infectantes na pastagem foram registradas no verão durante a “estação das águas” (ROCHA et al., 2008).

Vale lembrar que no Estado de São Paulo, mesmo durante a chamada “estação seca”, é comum a ocorrência de chuvas leves e a umidade relativa do ar mensal média é geralmente superior a 50% (AMARANTE; BARBOSA, 1995; FERNANDES et al., 2004). Nessas condições, embora ocorram variações sazonais no número de larvas na pastagem, a transmissão dos parasitas ocorre ao longo de todo o ano.

Do mesmo modo, no período seco (outono/inverno) da Baixada Fluminense, RJ, apesar de os índices mensais de precipitação pluvial apresentarem-se usualmente abaixo de 50 mm, as temperaturas relativamente amenas associadas à umidade relativa média do ar – acima de 60% – favoreceram a sobrevivência das larvas de nematoides gastrintestinais de ruminantes na pastagem. Larvas infectantes de parasitas de ovinos sobreviveram por até 77 dias em fezes depositadas em meio à gramínea, com altura média de 33,7 cm, no final do outono, estação seca. Durante o período de observação, as massas fecais permaneceram íntegras, o que favoreceu seu potencial como reservatório de larvas. Uma leve precipitação pluviométrica ocorrida durante o experimento, de 27,9 mm, possibilitou a migração de larvas das fezes para a pastagem. (ALMEIDA et al., 2005).

Região Sul

Em Itaqui, RS, os parasitas mais importantes em ovinos são H. contortus, T. axei, T. colubriformis e O. columbianum (SANTIAGO et al., 1976). H. contortus ocorre em todos os meses do ano, porém com as maiores cargas parasitárias no verão e no outono. Da mesma forma, T. axei parasita os ovinos em todos os meses do ano, mas em grande número no inverno e na primavera. T. colubriformis aparece principalmente no inverno e apresenta um leve aumento no final de verão. Esses ápices de infecção coincidem com os meses de menor precipitação. Nesse município, os ovinos são parasitados por O. columbianum e raramente por O. venulosum. De modo geral, a infecção por Oesophagostomum spp. inicia-se em princípios do outono, é máxima no inverno e diminui ao fim da primavera (SANTIAGO et al., 1976).

Em relação aos principais nematoides parasitas de ovinos criados em Santa Catarina, H. contortus predomina do final da primavera até o início do inverno, com maiores cargas parasitárias no verão, associadas às temperaturas médias superiores a 15 ºC e precipitações pluviométricas superiores a 50 mm. As espécies T. axei e T. colubriformis prevalecem do outono até o final do inverno, em virtude da sua adaptação a baixas temperaturas (RAMOS et al., 2004).

Controle da verminose

O controle dos nematoides deve ter o objetivo de assegurar que a população de parasitas não exceda níveis prejudiciais à produtividade dos animais e, por consequência, não inviabilize a atividade econômica. O controle parasitário, em regra, é baseado quase que exclusivamente na utilização regular de anti-helmínticos. Apesar de conferir proteção contra enfermidade grave e mortalidade, tais tratamentos são frequentemente ineficazes na prevenção de animais expostos a pastagem com nível elevado de contaminação por larvas infectantes. Por isso, ocorrem reduções na produtividade, como resultado de reinfecções no intervalo entre os tratamentos (BRUSNSDON, 1980). Associado a isso ainda há o sério problema da resistência anti-helmíntica.

Em contraste, programas de controle preventivo contra as helmintoses enfatizam que a profilaxia eficiente deve ter como base medidas destinadas a prevenir ou limitar o contato entre o parasita e o hospedeiro. As estratégias desse controle preventivo são: a) prevenir o aumento acentuado do número de larvas infectantes na pastagem; e b) antecipar-se aos prováveis períodos de elevação pesada da contaminação de uma pastagem retirando dela os animais susceptíveis (BRUNSDON, 1980).

O controle adequado pode ser alcançado por meio de várias medidas, que incluem, por exemplo, o manejo de pastagens, a utilização de anti-helmínticos, o pastoreio com animais resistentes e o confinamento de animais susceptíveis. Obviamente, o controle pode ser mais eficiente quando várias dessas medidas são utilizadas de maneira integrada.

Manejo

Na sequência, serão apresentadas as vantagens e desvantagens de algumas técnicas de manejo que podem ser adotadas com o objetivo de limitar a infecção dos animais pelos nematoides gastrintestinais.

Descontaminação após o descanso da pastagem

Como visto, o desenvolvimento e a sobrevivência dos estádios de vida livre são influenciados pelo clima. Logicamente, com o decorrer do tempo, as larvas infectantes morrem.

Em Porto Alegre, RS, observou-se que, no verão, pode ocorrer a descontaminação de pastagem utilizada por ovinos após 2 meses de descanso. A redução acentuada da contaminação da pastagem, nessa época do ano, foi atribuída às temperaturas elevadas, associadas aos baixos índices de precipitação e de umidade relativa do ar (GONÇALVES; VIEIRA, 1963). Em Lages, SC, para que houvesse redução apreciável do número de larvas infectantes em pastagens, previamente contaminadas por ovinos parasitados, foram necessários períodos de descanso de 42 a 56 dias na primavera, de 70 a 84 no verão, de 112 a 126 no outono e de 98 a 112 no inverno (SOUZA et al., 2000).

Como discutido, a mortalidade das larvas após o descanso prolongado da pastagem pode resultar em descontaminação ambiental. Porém, essa prática na maioria das vezes é inviável, pois usualmente é incompatível com o manejo adequado das forrageiras, que visa ao aumento qualitativo e quantitativo da produção. Ao final de 80 dias de descanso, por exemplo, a qualidade e a produtividade de uma pastagem poderão estar comprometidas. Por essa razão, várias estratégias de manejo, como o pastejo rotacionado de piquetes e o pastoreio misto ou alternado entre diferentes espécies de herbívoros, têm sido preconizadas.

Sistema rotacionado de pastagens

A rotação da pastagem é uma prática extremamente interessante do ponto de vista agrostológico e zootécnico, pois permite otimizar as áreas destinadas ao pastejo dos animais. Além disso, é frequentemente citada como uma forma de diminuir as populações de larvas de nematoides nas pastagens, o que nem sempre é verdade. As pastagens utilizadas em esquema de rotação, geralmente, permanecem em descanso, sem animais, por períodos que variam de 30 a 40 dias. Esse período de descanso, em muitas situações, é curto para possibilitar redução significativa da contaminação da pastagem, já que os parasitas necessitam de vários dias para desenvolverem-se no ambiente (de ovo até larva infectante). Ademais, as larvas infectantes podem sobreviver no ambiente durante várias semanas ou até mesmo vários meses (CARRATORE, 2004; ROCHA, 2006; SOUZA et al., 2000). Por isso, a rotação de pastagens, com frequência, resulta no contrário do que se esperaria em termos de descontaminação. Como ela permite aumentar o número de animais em uma área, pode ocorrer, de fato, aumento da contaminação.

Em Ilha Solteira, SP, observou-se a ineficiência, para o controle da verminose ovina, de um sistema rotacionado, em que os ovinos pastejaram oito piquetes, com permanência de 5 dias em cada um deles, totalizando, 36 dias de descanso de pastagem (FERNANDES et al., 2004).

Portanto, o benefício da rotação da pastagem sobre o controle dos parasitas é praticamente nulo em locais com clima similar ao do Estado de São Paulo. Nesse caso, para que houvesse redução significativa da contaminação da pastagem, seria necessário que os piquetes fossem deixados em descanso por prolongado período de tempo, o que resultaria em prejuízo (produtivo, econômico e vegetal) ao aproveitamento adequado da pastagem.

Descontaminação da pastagem pelo uso de animais resistentes ou de diferentes espécies de herbívoros

Uma alternativa que pode ser adotada com a finalidade de reduzir a contaminação da pastagem é o consórcio de animais de diferentes espécies. A eficiência desse método depende, entre outros, da especificidade dos parasitas. As larvas de parasitas com alta especificidade parasitária são destruídas ao serem ingeridas por um animal de outra espécie. Além do mais, a integração de diferentes espécies animais tem o objetivo de permitir uma “diluição” no número de formas infectantes de determinado parasita na pastagem. Em uma pastagem que comporta 100 ovelhas, por exemplo, se forem colocados bovinos na mesma proporção, em unidade animal, tem de se reduzir o número de ovelhas para 50 animais e então acrescentar os bovinos. Portanto, a contaminação da pastagem, com fezes de ovinos, cairá pela metade e, consequentemente, a contaminação com larvas infectantes de parasitas desses hospedeiros. Existe, ainda, a possibilidade de as larvas das espécies que parasitam os ovinos serem ingeridas pelos bovinos e neste hospedeiro serem destruídas (AMARANTE, 2004).

O pastoreio envolvendo diferentes espécies de herbívoros pode ser misto ou alternado. Bons resultados no pastoreio misto podem ser obtidos quando animais susceptíveis compartilham a pastagem com animais resistentes da mesma ou de outras espécies (BARGER, 1997). Já no caso do pastoreio alternado, além do efeito de “diluição”, há a possibilidade de promover a “limpeza” de uma pastagem contaminada somente com parasitas de ovinos. Essa contaminação poderia ser reduzida e eventualmente eliminada algum tempo depois da retirada dos ovinos e da colocação de animais de outra espécie. É importante ressaltar que ovinos e caprinos são parasitados pelas mesmas espécies de helmintos. Assim, não é possível utilizar manejo integrado de ovinos em alternância com caprinos no intuito de descontaminar pastagens.

Especificidade parasitária e eficiência do manejo integrado de diferentes espécies de herbívoros

Em ovinos e bovinos submetidos a pastoreio misto na região de Santa Maria, RS, não foram observadas infecções cruzadas por espécies dos gêneros Haemonchus, Oesophagostomum, Nematodirus e Bunostomum. Além disso, T. colubriformis mostrou marcada preferência por ovinos, enquanto Ostertagia ostertagi e Ostertagia lyrata revelaram-se mais adaptadas a bovinos e O. circumcincta a ovinos. Cooperia spp. e T. axei mostraram-se aptas a parasitarem os dois hospedeiros (SANTIAGO et al., 1975).

Já em Bagé, RS, verificaram-se resultados insatisfatórios, em relação ao controle da verminose, quando bezerros foram submetidos a pastoreio misto com cordeiros, em razão das infecções cruzadas envolvendo as espécies Haemonchus placei e H. contortus (PINHEIRO, 1983). Por sua vez, resultados favoráveis, em relação ao controle de parasitas, foram observados quando os cordeiros compartilharam pastagens com bovinos adultos (PINHEIRO et al., 1987).

No Estado de São Paulo, constatou-se a possibilidade de ocorrer infecção cruzada entre H. contortus, parasita de ovinos, e H. placei, parasita de bovinos, o que não aconteceu com Haemonchus similis, espécie adaptada ao parasitismo apenas em bovinos. Outras espécies de parasitas, como T. axei, C. punctata, Cooperia spatulata, Bunostomum phlebotomum, Mammomonogamus laryngeus, apresentaram marcante adaptação aos bovinos, enquanto T. colubriformis e C. curticei mostraram-se adaptadas aos ovinos. No caso de infecções cruzadas, com o passar do tempo os animais desenvolvem resistência e eliminam naturalmente as espécies que não estejam bem adaptadas a eles, permitindo assim o emprego do pastoreio integrado de ovinos e bovinos para a descontaminação de pastagens (AMARANTE et al., 1997).

A espécie T. axei tem sido descrita parasitando não apenas ruminantes, mas também equinos. Na Holanda, equinos transferidos para pastagens de ovinos adquiriram grau elevado de infecção por T. axei (EYSKER et al., 1986). Em uma propriedade do Estado de São Paulo, porém, em um sistema integrado de criação de ovinos e equinos, a espécie T. axei não foi encontrada. Nessa propriedade, os principais parasitas encontrados foram H. contortus e T. colubriformis nos ovinos e ciatostomíneos nos equinos. Diante disso, considerou-se bastante segura a utilização de equinos para descontaminar as pastagens de ovinos e vice-versa (BAGNOLA JUNIOR et al., 1996). Embora T. axei não seja importante em ovinos criados no Estado de São Paulo (AMARANTE et al., 1997), vale ressaltar a importância dessa espécie em ovinos criados no Sul do Brasil (RAMOS et al., 2004; SANTIAGO et al., 1976).

Na Nova Zelândia, onde outras espécies de nematoides são importantes, observou-se redução na contaminação da pastagem quando ovinos e bovinos pastejaram alternadamente piquetes (MOSS et al., 1998). Entretanto, a carga parasitária dos cordeiros que pastejaram os piquetes com menor contaminação foi similar à daqueles que não compartilharam pastagens com bovinos. Curiosamente, os cordeiros que pastaram alternadamente com bovinos apresentaram maior produtividade, a qual foi atribuída à melhora quantitativa e qualitativa da pastagem também utilizada pelos bovinos (MOSS et al., 1998). Da mesma forma, no Caribe, cordeiros e novilhas mantidos em pastoreio misto apresentaram ganho de peso superior ao dos grupos das diferentes espécies de animais mantidas separadamente. O aumento da produtividade foi atribuído não apenas à baixa taxa de infecção dos ovinos por H. contortus, mas também à melhora na qualidade da pastagem (MAHIEU et al., 1997).

Bons resultados em relação à produtividade e ao grau de infecção de cordeiros foram obtidos na Escócia, quando esses animais foram submetidos a tratamento mensal com anti-helmíntico associado com o pastoreio de piquetes previamente pastejados por bovinos (MARLEY et al., 2006).

Em experimento realizado em Ilha Solteira, avaliou-se a rotação de pastagem associada com o pastoreio alternado de bovinos adultos e ovelhas, em dois módulos de pastagens, os quais eram constituídos de oito piquetes cada. Os animais permaneciam em cada piquete por 5 dias, totalizando 40 dias de permanência em cada módulo. Ao final desse período, as ovelhas eram transferidas para o módulo onde estavam os bovinos, e estes, por sua vez, eram deslocados para o módulo onde estavam os ovinos, e assim sucessivamente. Um grupo controle de ovelhas foi mantido também, em sistema rotacionado, em um outro módulo (também com oito piquetes), mas sem compartilhar a pastagem com bovinos. Os animais que compartilharam a pastagem com os bovinos apresentaram grau de infecção inferior, que se traduziu em menor necessidade de tratamentos com anti-helmínticos (FERNANDES et al., 2004).

Portanto, os estudos indicam benefícios da integração do pastoreio de ovinos, bovinos e equinos. Porém, vários fatores influenciam o sucesso de sistemas integrados de controle, os quais incluem tanto a especificidade parasitária quanto o impacto da consorciação na qualidade e na produtividade das forrageiras. No caso da utilização de bovinos para descontaminar pastagens utilizadas por ovinos, recomenda-se o pastoreio com animais adultos para que sejam minimizados os riscos de infecções cruzadas.

Anti-helmínticos

A maioria dos anti-helmínticos disponíveis no mercado foi desenvolvida a partir da década de 1960. Existem apenas três grupos de anti-helmínticos de amplo espectro (benzimidazóis, imidazotiazóis e lactonas macrocíclicas) e dois grupos de curto espectro (salicilanilidas/fenóis substituídos e organofosforados), estes últimos utilizados especialmente para o controle de Haemonchus spp.

A utilização dos anti-helmínticos propiciou aumento na produtividade dos rebanhos. Entretanto, o seu uso contínuo teve como consequência a seleção de populações de helmintos com resistência aos diferentes grupos químicos utilizados no tratamento dos animais. Por essa razão, os anti-helmínticos devem ser usados de maneira bastante criteriosa. Como poderá ser observado a seguir, existem muitas controvérsias em relação à melhor forma de utilização desse vermífugo.

Os ovinos devem ser tratados com anti-helmíntico antes de serem colocados em uma pastagem “limpa”?

A aplicação de um anti-helmíntico resulta na eliminação dos parasitas susceptíveis presentes nos animais tratados. Se o tratamento for realizado antes da transferência dos animais para uma área limpa, é de se esperar que a pastagem seja contaminada apenas com os parasitas que sobreviveram ao tratamento, ou seja, os descendentes dos nematoides resistentes. Essa prática, em teoria, pode acelerar o aparecimento de populações de helmintos resistentes.

Por isso, alguns pesquisadores têm preconizado o tratamento dos animais apenas após a colocação deles na área limpa. Dessa forma, haverá a possibilidade de a pastagem ser inicialmente contaminada por parasitas susceptíveis, o que reduziria a pressão de seleção para a resistência (MOLENTO et al., 2004).

Porém, a questão que se coloca é a seguinte: os esforços para descontaminar uma pastagem ainda são justificáveis uma vez que nela serão colocados animais parasitados que promoverão a sua imediata contaminação? No Estado de São Paulo, percebeu-se que, quando ovelhas eram colocadas, sem tratamento anti-helmíntico prévio, em pastagens descontaminadas, havia rápida contaminação dos piquetes com larvas infectantes, o que tornava o esforço para descontaminar a pastagem praticamente inútil do ponto de vista do controle da verminose (ROCHA et al., 2008).

Existem algumas evidências a favor do tratamento dos ovinos antes de colocá-los em pastagens “limpas”. Estudos com modelos matemáticos indicaram que, por um lado, a utilização de pastagens permanentes em associação com tratamentos frequentes do rebanho acelera o desenvolvimento da resistência; por outro lado, a baixa frequência de tratamentos combinada com a transferência dos animais para pastagens “limpas” reduz o risco de seleção de resistência (GETTINBY et al., 1989). Em um experimento realizado ao longo de 5 anos na Austrália, não foram observadas evidências de que tratamentos anti-helmínticos de ovinos, combinados com a transferência dos animais para pastagem com baixa contaminação, tenham acelerado o desenvolvimento da resistência anti-helmíntica em comparação com os resultados obtidos em ovinos tratados e mantidos na mesma pastagem (WALLER et al., 1989). No Brasil, pode-se afirmar com relativa segurança que, na maioria das criações de ovinos que apresentam problema de resistência anti-helmíntica, predomina o binômio grande frequência de tratamentos com pastoreio contínuo de pastagens.

Em conclusão, os trabalhos citados mostram que mais importante do que o tipo de manejo adotado é a frequência com que os anti-helmínticos são utilizados. Portanto, deve-se minimizar ao máximo a utilização dessas drogas, a fim de que se retarde o aparecimento de populações resistentes e, nesse caso, práticas de descontaminação de pastagem podem ser úteis para reduzir a frequência no uso dos anti-helmínticos.

Tratamentos estratégicos ou tratamentos seletivos?

Os tratamentos estratégicos com anti-helmínticos são preconizados com o objetivo de diminuir, ao máximo, a carga de vermes nos animais durante a fase menos favorável à sobrevivência dos estádios de vida livre dos nematoides no ambiente, o que acontece, por exemplo, no Semiárido nordestino durante a estação seca. O tratamento dos animais reduziria a eliminação de ovos de nematoides no meio ambiente com consequente diminuição na contaminação das pastagens. Quando as condições ambientais fossem novamente favoráveis ao desenvolvimento dos estádios de vida livre, ocorreria menos contaminação dos animais e aumento da produtividade.

Esse tipo de controle tem sido questionado, pois pode aumentar a velocidade da seleção de parasitas resistentes, visto que os nematoides sobreviventes ao tratamento, ou seja, os resistentes, serão os responsáveis pela recontaminação da pastagem no momento em que as condições ambientais se tornarem novamente favoráveis (MARTIN et al., 1981; MOLENTO et al., 2004; PAPADOPOULOS et al., 2001).

Com o intuito de retardar a seleção de parasitas com resistência aos anti-helmínticos, vários pesquisadores têm sugerido a utilização de tratamentos curativos ou seletivos. Esse é o caso do método Famacha, no qual se recomenda o tratamento apenas dos ovinos anêmicos (VAN WYK; BATH, 2002). Esse método será abordado detalhadamente em um outro capítulo deste livro (ver Capítulo 16).

De qualquer forma, os anti-helmínticos devem ser utilizados apenas de maneira complementar em esquemas de manejo que visem tanto minimizar a sua utilização como maximizar a produtividade do rebanho.

Confinamento de ovinos

Animais mantidos confinados, desde que alimentados com ração livre de contaminação, estarão menos expostos às infecções por nematoides. Strongyloides papillosus é uma exceção, pois infecta os animais ativamente ao atravessar a pele e pode ser transmitido por via transmamária para os recém-nascidos (OLIVEIRA-SERQUEIRA; AMARANTE, 2001).

Em um estudo comparativo da recria de cordeiros, comprovou-se que os cordeiros confinados apresentaram produtividade muito superior a de animais mantidos a pasto (SIQUEIRA et al., 1993). Alguns ovinocultores também têm obtido bons resultados com o confinamento das ovelhas no final da gestação. As fêmeas permanecem confinadas com os cordeiros até a desmama, quando então retornam para a pastagem. A vantagem adicional é a adaptação dos cordeiros às condições de confinamento por ocasião da desmama. O tratamento das matrizes com um anti-helmíntico eficaz, por causa de sua colocação no confinamento, praticamente elimina os problemas ocasionados pela verminose.

No entanto, o confinamento dos animais resulta em aumento no custo de produção, o que muitas vezes torna essa prática inviável economicamente. Além disso, os cordeiros criados desse modo tornam-se mais expostos a outros problemas sanitários como, por exemplo, a coccidiose (AMARANTE et al., 1993). Neste caso, faz-se necessária a adoção de medidas sanitárias que previnam a sua ocorrência (ver Capítulo 5).

Fatores que afetam a resposta imunológica dos animais e a sua influência no controle da verminose

Os animais expostos aos parasitas têm a capacidade de desenvolver imunidade contra as infecções por nematoides. A resposta imunológica dá-se contra as formas imaturas e adultas dos parasitas. Nos estádios imaturos em ruminantes, a imunidade provoca falha no estabelecimento das larvas infectantes nos tecidos do hospedeiro com a consequente eliminação do parasita. Essa é a principal manifestação da imunidade em ruminantes (BALIC et al., 2000). A imunidade também pode provocar a inibição do desenvolvimento das larvas de quarto estádios na mucosa do trato gastrintestinal (hipobiose1). Já contra os parasitas adultos, a imunidade promove: a) expulsão da população; b) alterações na morfologia dos parasitas; c) redução na fecundidade das fêmeas (BALIC et al., 2000).

No entanto, a eficiência da resposta imunológica varia em função de vários fatores que serão abordados na sequência.

Idade

A susceptibilidade à verminose é muito maior nos animais jovens do que nos adultos. A menor resistência dos ruminantes jovens às infecções helmínticas parece ser em razão, principalmente, da fraca resposta imunológica específica contra os parasitas, e não da simples falta de exposição aos patógenos que induzem o desenvolvimento de imunidade ativa (COLDITZ et al., 1996). A influência da idade na resistência às infecções helmínticas foi demonstrada em ovinos Romney, criados livres de infecções até 4, 16 ou 28 meses de idade. Esses animais adquiriram cargas parasitárias similares após permanecerem por quatro semanas em uma pastagem contaminada. Entretanto, os animais mais velhos (16 e 28 meses de idade) expressaram com maior rapidez a resposta por mastócitos e leucócitos globulares na mucosa do trato gastrintestinal e a redução nos valores de ovos de nematoides por grama de fezes (OPG) (DOUCH; MORUM, 1993).

Porém, existem evidências de que mesmo nos primeiros dias de vida os animais são capazes de apresentar resposta imunológica contra os parasitas. A infecção de cordeiros Merino com T. colubriformis, no período neonatal, induziu a produção de IL-5 pelos linfonodos mesentéricos e de IgG1 (EMERY et al., 1999). A infecção dos cordeiros com H. contortus a partir do dia do nascimento levou-os a apresentarem redução expressiva da carga parasitária após o desafio com larvas (EMERY et al., 2000). Ovinos de algumas raças desenvolvem precocemente resistência contra H. contortus (AMARANTE et al., 1999a; BAHIRATHAN et al., 1996; COURTNEY et al., 1985; GAMBLE; ZAJAC, 1992). Os ovinos da raça Gulf Coast Native, por exemplo, desenvolvem resistência contra H. contortus antes da desmama, durante sua primeira exposição à infecção (BAHIRATHAN et al., 1996). Em cordeiros com menos de 60 dias de idade, as consequências das infecções por nematoides gastrintestinais foram menos acentuadas em animais da raça Santa Inês do que da Ile de France (ROCHA et al., 2005).

Independentemente do nível do desafio, cordeiros da raça Clun Forest são incapazes de regular a carga de Trichostrongylus spp. até, pelo menos, os 5 meses de idade. Quando a ingestão de larvas infectantes é elevada, a resistência ao estabelecimento dos parasitas ocorre aproximadamente aos 6 meses de vida (WALLER; THOMAS, 1981). Nos cordeiros jovens, os vermes acumulam-se até que haja exposição suficiente para estimular a resistência ao estabelecimento larval e finalmente expulsar os parasitas adultos (WALLER; THOMAS, 1981). Esses achados foram reforçados por estudos sobre a dinâmica populacional de T. colubriformis em ovinos, em que se constatou a existência de um limite a partir do qual se iniciaria o desenvolvimento da resistência contra T. colubriformis. Estima-se que esse limite consista de, aproximadamente, 3.532 vermes adultos presentes no intestino delgado (DOBSON et al., 1990b, 1990c).

A resistência contra T. colubriformis em fêmeas Merino, infectadas naturalmente, começa a se expressar na idade que varia de 20 a 35 semanas (DOBSON et al., 1990a). Aos 9 meses de idade, aproximadamente, elas já apresentam alto grau de resistência contra essa espécie de nematoide (DOBSON et al., 1990a). De acordo com Barger (1988), em cordeiros Merinos, a resistência às infecções por O. circumcincta e T. colubriformis não se desenvolve até que os animais atinjam 8 meses de idade. Cordeiros mantidos sem tratamento anti-helmíntico adquirem resistência considerável contra H. contortus aos 4 meses de vida. Por sua vez, um ou mais tratamentos interferem no desenvolvimento da imunidade contra esse parasita (BARGER, 1988).

De forma geral, os animais até a puberdade apresentam susceptibilidade à verminose. O grau de infecção dos cordeiros varia conforme as condições de manejo e o grau de contaminação das pastagens. Em algumas criações de ovinos, são observadas contagens elevadas de OPG em cordeiros, mesmo antes da desmama, ou seja, em animais com menos de 2 meses de idade (ROCHA et al., 2005). Medidas efetivas de controle de verminose são indispensáveis na recria dos animais jovens. Caso elas não sejam eficazes, a mortalidade e a redução no ganho de peso dos animais podem causar prejuízos bastante sérios aos criadores de ovinos.

Estado nutricional

A alimentação é outro fator que tem grande influência na relação parasita-hospedeiro. Em primeiro lugar, animais que recebem alimentação de boa qualidade podem apresentar aumento na habilidade para enfrentar as consequências adversas do parasitismo. Em segundo lugar, podem apresentar aumento na resistência, limitando o estabelecimento de larvas infectantes, e o desenvolvimento e fecundidade dos nematoides ou, até mesmo, causando a eliminação dos parasitas já estabelecidos no trato gastrintestinal (COOP; KYRIAZAKIS, 2001). Por último, o alimento, por conter compostos antiparasitários, pode afetar diretamente os helmintos, o que ocorre, por exemplo, com plantas ricas em taninos condensados (COOP; KYRIAZAKIS, 2001).

Em comparação com animais livres de infecção, ovinos parasitados requerem quantidade extra de proteína metabolizável para reparar ou substituir os tecidos lesados, bem como para expressar uma resposta imunológica. Estima-se que as necessidades de proteína metabolizável de cordeiros em crescimento e de ovelhas no periparto aumentem entre 20% a 25% quando os animais são expostos às infecções. (KYRIAZAKIS; HOUDIJK, 2006).

As dietas com nível elevado de proteína melhoram a resposta imunológica, especialmente daquelas raças que já são naturalmente mais resistentes à hemoncose. Esse fato foi observado em um experimento realizado com cordeiros Santa Inês e Ile de France submetidos a dietas isoenergéticas com teor alto, 129 g/kg, ou médio, 75 g/kg/MS, de proteína metabolizável (BRICARELLO et al., 2005). Os cordeiros Santa Inês que receberam dieta com alto teor apresentaram maior resistência às infecções artificiais por H. contortus, em comparação com os outros grupos. Da mesma forma, observou-se que a suplementação proteica propiciou redução no grau de infecção por helmintos e melhora no desempenho de cordeiros Santa Inês mantidos a pasto (LOUVANDINI et al., 2006).

Fenômeno do periparto

No período do periparto, as ovelhas tornam-se mais susceptíveis às infecções por nematoides gastrintestinais, o que provoca aumento no número de ovos eliminados nas fezes e, consequentemente, aumento da contaminação da pastagem. O fenômeno do periparto deve-se à elevação na fecundidade dos vermes adultos, à retomada do desenvolvimento de larvas hipobióticas e ao estabelecimento de novas larvas infectantes, e os dois últimos acarretam marcado aumento na carga parasitária de helmintos adultos (O’SULLIVAN; DONALD, 1970). Após a desmama dos cordeiros, a resposta imunológica restabelece-se, provocando redução acentuada nas contagens de OPG (AMARANTE et al., 1992). É interessante salientar que o fenômeno do periparto apresenta intensidade variável conforme a raça ovina. Nas raças ovinas que apresentam resistência aos nematoides, o fenômeno do periparto, quando ocorre, é mais discreto do que em raças ovinas susceptíveis (AMARANTE et al., 1999b; COURTNEY et al., 1984; ROCHA et al., 2004a; WANYANGU et al., 1997).

As ovelhas requerem elevada quantidade de proteína metabolizável (PM) no final da gestação e durante a lactação. As proteínas podem ser consideradas um nutriente escasso e o seu consumo geralmente é insuficiente para atender a demanda do animal nesse período (COOP; KYRIAZAKIS, 2001). Vários experimentos realizados na Escócia demonstraram os benefícios da suplementação proteica para a resistência às infecções artificiais por Teladorsagia circumcincta em ovelhas no periparto. Em um deles, duas dietas isoenergéticas, formuladas para atender 85% e 130% dos requerimentos de PM foram avaliadas. A dieta com alto teor de proteína favoreceu a expressão de imunidade contra T. circumcincta, com redução na amplitude do fenômeno do periparto (HOUDIJK et al., 2000). Além disso, os efeitos da suplementação proteica foram mais pronunciados em ovelhas com gêmeos do que em ovelhas com um único cordeiro (HOUDIJK et al., 2001a).

As reservas proteicas corporais também afetam a expressão de imunidade no periparto, o que não acontece com as reservas de gordura. A magnitude da resposta à suplementação proteica é maior em ovelhas que têm menor quantidade de reserva proteica corporal (HOUDIJK et al., 2001b).

Ao avaliar dietas com diferentes teores de PM, Houdijk et al. (2003) observaram que os primeiros incrementos em PM resultaram em aumento na produção de leite. Apenas o último incremento, que foi de 1,25 vez as necessidades de PM, resultou em redução da carga parasitária, quando a produção de leite já havia atingido o máximo. Essa suplementação também propiciou elevação nos níveis de IgA plasmática anti-L3 de T. circumcincta.

A suplementação proteica, embora tenha um custo relativamente elevado, possibilita que as fêmeas suplementadas aumentem a produção de leite, o que resulta em maior ganho de peso dos cordeiros. Em virtude da redução provocada na eliminação de ovos de nematoides pelas ovelhas, há diminuição na contaminação ambiental por larvas infectantes, o que é benéfico para os cordeiros (HOUDIJK et al., 2003). Desse modo, a suplementação proteica de ovelhas no periparto pode ser utilizada como uma medida para reduzir a dependência do uso de anti-helmínticos no controle da verminose.

Resistência genética às infecções por nematoides

A capacidade de os ovinos adquirirem e expressarem imunidade contra os nematoides gastrintestinais é controlada geneticamente e varia substancialmente entre as diferentes raças ovinas, bem como entre os indivíduos de uma mesma raça (STEAR; MURRAY, 1994).

Os helmintos não se distribuem de maneira uniforme em um rebanho ovino, mesmo que os animais sejam de mesma raça e idade. O número de parasitas nos animais geralmente apresenta distribuição binomial negativa, ou seja, a maioria dos hospedeiros alberga poucos parasitas, enquanto uns poucos animais pesadamente infectados hospedam a maior proporção da população total de parasitas (AMARANTE et al., 1998; STEAR et al., 1998). Isso decorre do fato de a resposta imunológica não ser uniforme nos animais de um rebanho.

Animais resistentes e/ou tolerantes eliminam menor número de ovos de nematoides do que os suscetíveis, o que reduz a contaminação da pastagem por larvas infectantes e, em consequência, a exposição do rebanho aos parasitas (BISHOP; STEAR, 2003). Portanto, a seleção de animais resistentes pode ser utilizada como uma ferramenta na profilaxia da verminose ovina.

Raças resistentes

No passado, por causa da ausência de anti-helmínticos eficazes, os ovinos foram submetidos a um processo de seleção natural para resistirem às infecções helmínticas. Isso ocorreu especialmente com os ovinos criados em regiões úmidas, favoráveis à transmissão dos parasitas. Esse é o caso de raças de ovinos criadas em regiões tropicais ou subtropicais, que experimentalmente se mostraram resistentes às infecções por H. contortus. Entre elas, destacam-se as raças Florida Native, Gulf Coast Native, Saint Croix, Barbados Blackbelly e Red Massai (AMARANTE, A.; AMARANTE, M., 2003).

No Brasil duas raças consideradas nativas, Crioula Lanada e Santa Inês, têm sido estudadas. Em estudo realizado no Rio Grande do Sul, demonstrou-se que a resistência à infecção por H. contortus é muito superior em cordeiros da raça Crioula Lanada do que da raça Corriedale (BRICARELLO et al., 2004). No Paraná, ovelhas da raça Santa Inês mostraram-se mais resistentes à infecção natural por tricostrongilídeos do que as da raça Suffolk (MORAES et al., 2000). Resultados similares foram observados no Estado de São Paulo, onde ovelhas Santa Inês apresentaram resistência superior à de ovelhas Suffolk, Ile de France e Poll Dorset (BUENO et al., 2002; ROCHA et al., 2004a). Estudos realizados com cordeiros infectados naturalmente (AMARANTE et al., 2004) ou artificialmente com nematoides gastrintestinais (BRICARELLO et al., 2005) demonstraram maior resistência de animais Santa Inês, quando comparados, respectivamente, a cordeiros Suffolk e Ile de France (Figura 3) ou a Ile de France apenas.

Figura 3. Número médio de Haemonchus contortus em cordeiros das raças Santa Inês, Suffolk e Ile de France, naturalmente infectados por nematoides gastrintestinais.

Fonte: Amarante et al. (2004).

Um dos problemas em relação às raças resistentes é que elas podem apresentar produtividade inferior à das raças susceptíveis. Cordeiros da raça Santa Inês, por exemplo, produzem carcaça de qualidade inferior à de animais Suffolk ou Ile de France. Porém, deve-se ressaltar que, quando expostos a infecções parasitárias, rebanhos de raças resistentes costumam apresentar produtividade superior à de rebanhos de raças consideradas altamente produtivas, mas que são susceptíveis. Essa ocorrência foi relatada por Mugambi et al. (2003), na África, onde foi observada a produtividade superior de ovinos Red Maasai em comparação com ovinos Dorper. Da mesma forma, em Botucatu, Rocha et al. (2004b) determinaram que, quando expostos à infecção, cordeiros Ile de France foram os que apresentaram maior redução no potencial de ganho de peso antes da desmama em comparação com cordeiros Santa Inês (Tabela 2).

Tabela 2. Desempenho comparativo de cordeiros das raças Santa Inês e Ile de France mantidos com as mães, a pasto ou confinados do nascimento até a desmama (60 dias de vida).

Sistema de criação

Peso médio na desmama

Santa Inês

Ile de France

Confinamento

18,8 kg

22,8 kg

Pastagem

15,7 kg

13,5 kg

Diferença no peso

3,1 kg

9,3 kg

Fonte: Rocha et al. (2004b).

Uma alternativa para minimizar esse problema seria o cruzamento de matrizes de uma raça mais resistente com reprodutores de uma raça mais produtiva. Animais F1 oriundos do cruzamento de ovinos Rambouillet (raça susceptível) e ovinos Florida Native (raça resistente) mostraram-se susceptíveis quando jovens, mas altamente resistentes na idade adulta (AMARANTE et al., 1999a, 1999b).

Seleção de animais resistentes

Mesmo as raças que têm alta produtividade e são consideradas susceptíveis apresentam variabilidade genética em relação à resposta imunológica contra os parasitas. De acordo com Gray (1987), a herdabilidade da resistência a hemoncose é média, e há trabalhos que evidenciam correlação de 30% a 60% entre resistência à verminose e produtividade dos animais. Portanto, é possível incluir a resistência à verminose como um dos critérios de seleção dos animais. Os trabalhos de seleção estão mais avançados na Austrália e na Nova Zelândia.

Na Nova Zelândia existe o programa de seleção denominado WormFEC (McEWAN et al., 2005). Nesse programa, a seleção de cordeiros resistentes tem por base duas contagens de OPG. Inicialmente os cordeiros são desmamados e tratados com anti-helmíntico, em seguida são mantidos em pastagem contaminada por 6 a 8 semanas. Ao final desse período é realizada a primeira contagem de OPG. Os animais são novamente tratados e mantidos em pastagem contaminada por mais 6 a 8 semanas quando então é realizada a segunda contagem. Outras características relacionadas à produtividade também são avaliadas. Dessa forma, a combinação das diferentes características, que incluem as contagens de OPG, permite a seleção dos animais mais resistentes e produtivos.

Como não existem evidências de que os parasitas sejam capazes de se adaptar aos ovinos selecionados para resistência (WOOLASTON et al., 1992), a seleção de animais resistentes poderá se constituir em um dos fatores mais importantes na profilaxia das infecções por nematoides gastrintestinais.

Seleção para resistência ou tolerância (resiliência)?

Em resposta às infecções por nematoides gastrintestinais, os ovinos podem apresentar resistência ou tolerância (resiliência). No caso da resistência, a resposta imunológica limita o estabelecimento do parasita. No caso da tolerância, os animais são capazes de permanecer com o parasita, havendo redução mínima da produtividade (ALBERS et al., 1987). Por causa das grandes perdas de sangue que ocorrem nas infecções por H. contortus, supõe-se que nem mesmo o mais tolerante animal seja capaz de sobreviver por muito tempo quando exposto a infecções pesadas com esse parasita. Assim, não há dúvidas de que nesse caso, a resistência é a característica mais importante do ponto de vista zootécnico, pois impõe limites ao estabelecimento do parasita. Conforme afirmou Le Jambre (1995), selecionar ovinos tolerantes no caso das infecções por H. contortus seria o mesmo que separar animais capazes de viver com hemorragia crônica, o que não faz nenhum sentido em produção animal.

Isso também vale para as infecções por Oesophagostomum columbianum. Nesse caso, a resposta imunológica do hospedeiro, ao impedir o estabelecimento das larvas infectantes na mucosa intestinal, preveniria a formação de nódulos intestinais, os quais se constituem na principal alteração patológica causada por essa espécie (AMARANTE et al., 2004). Por sua vez, na infecção causada por alguns parasitas, tais como Trichostrongylus e Ostertagia, parte da síndrome da doença pode ser atribuída à hipersensibilidade provocada pelas larvas infectantes. Nessa infecção, os hospedeiros mais tolerantes apresentarão uma resposta inferior e serão menos propensos a terem a doença (LE JAMBRE, 1995).

Estudos realizados em ovinos Romney selecionados para contagens elevadas ou baixas de OPG, na Nova Zelândia, demonstraram que o rebanho escolhido para resistência não apresentou produtividade superior à dos animais susceptíveis. Na realidade, os resistentes apresentaram ganho de peso menor, menor produção de lã e maior quantidade de fezes aderida à região posterior do que ovinos da linhagem susceptível. É importante ressaltar que os animais estavam infectados majoritariamente por T. colubriformis, Trichostrongylus vitrinus e O. circumcincta (MORRIS et al., 2000). Já na Austrália, estudos recentes indicaram que a seleção de ovinos da raça Rylington Merino para a resistência não causou qualquer prejuízo na conversão alimentar e na produtividade (ganho de peso e produção de lã) em comparação com ovinos não selecionados (LIU et al., 2005).

Como H. contortus é o principal nematoide parasita de ovinos nas condições ambientais brasileiras, sugere-se que os esforços de seleção de ovinos sejam direcionados, prioritariamente, contra essa espécie e que essa seleção seja orientada para a resistência, e não para a tolerância. Além disso, é importante que a seleção para a resistência não seja realizada apenas com base na redução dos valores de OPG, mas também que leve em consideração características relacionadas com a produtividade dos animais. Morris et al. (2000) recomenda que, em locais onde os parasitas intestinais sejam muito importantes, se avalie escores relacionados à diarreia.

Considerações Finais

A criação de ovinos resistentes aos parasitas, associada com a suplementação de alimento de qualidade (com nível elevado de proteína), especialmente para os cordeiros e as ovelhas no periparto, poderá contribuir significativamente para reduzir a dependência atual da utilização de anti-helmínticos para o controle da verminose. Vale ressaltar que pouco adianta, do ponto de vista da profilaxia da verminose, criar animais resistentes se eles forem mantidos em condições nutricionais precárias ou fornecer alimento rico em proteína para animais geneticamente susceptíveis.

A principal consequência da criação de ovinos resistentes é verificada na epidemiologia das infecções por nematoides gastrintestinais. A elevação sazonal da carga parasitária dos animais resistentes é grandemente reduzida. Como resultado, ocorre redução ainda mais acentuada da contaminação das pastagens por larvas infectantes (BISHOP; STEAR, 1999; BISSET et al., 1997). Com a implantação de programas de nutrição e melhoramento genético, é possível que a ovinocultura brasileira se torne progressivamente menos dependente da utilização de drogas antiparasitárias para o controle das infecções helmínticas.

De maneira complementar, práticas de manejo que minimizem a exposição dos animais às larvas infectantes, presentes no ambiente, podem ser adotadas. Nesse contexto, destaca-se a possibilidade de integrar a ovinocultura com a criação de outras espécies de herbívoros, ou mesmo, o confinamento das categorias mais susceptíveis.

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Capítulo 2
Nematoides gastrintestinais e pulmonares de caprinos

Luiz da Silva Vieira
Ana Carolina de Souza Chagas
Marcelo Beltrão Molento

Introdução

A demanda mundial por fontes proteicas de origem animal está crescendo rapidamente, e os produtos oriundos de pequenos ruminantes podem ter notável contribuição no atendimento a esse mercado, particularmente se os pequenos produtores dos países em desenvolvimento conseguirem superar as barreiras que existem na produção de caprinos. A expansão da produção de pequenos ruminantes pode ser conseguida não apenas com o aumento numérico dos rebanhos, mas também com a exploração mais eficiente dos animais existentes (KNOX et al., 2006). Dessa forma, pode-se afirmar que, apesar do crescimento da caprinocultura, a criação e a produtividade desses animais ainda está bastante comprometida, por causa dos problemas sanitários, nutricionais e de manejo. Essa é uma realidade não só no Brasil, mas em diversas regiões do mundo, onde diferentes formas de manejo sanitário têm sido propostas, com o objetivo de associar o controle da população parasitária à redução do estabelecimento da resistência parasitária nas propriedades (SISSAY et al., 2006).

As verminoses gastrintestinais e pulmonares ocupam um lugar de destaque, uma vez que são responsáveis por inúmeras perdas econômicas. Elas causam mortalidade e, principalmente, comprometem o processo produtivo, refletindo sobretudo na redução do ganho de peso, na produção de leite e de lã, na qualidade da carcaça, em especial nas situações em que a nutrição é deficiente (GATONGI et al., 1997).

Essas infecções manifestam-se de várias formas, conforme as espécies presentes, a intensidade da infecção e a categoria e/ou estado fisiológico dos animais. As respostas imunológicas contra a infecção desenvolvem-se de forma lenta e incompleta, deixando os rebanhos sujeitos à reincidência das formas clínicas e subclínicas das diferentes parasitoses (PADILHA et al., 2000).

Etiologia

Levantamentos epidemiológicos realizados nos estados da Bahia (MOURA; MOURA, 1974), Ceará (COSTA et al., 1985; AROSEMENA, 1999), Minas Gerais (GUIMARÃES; LIMA, 1987), Pará (FREITAS; COSTA, 1967), Paraíba (SILVA et al., 1998; MARTINS FILHO; MENEZES, 2001), Pernambuco (TORRES, 1945; PEREIRA, 1976; CHARLES, 1989), Piauí (GIRÃO et al., 1992), Rio de Janeiro (BONFIM; LOPES, 1994) e Rio Grande do Sul (CARDOSO, 1993), mostram que os caprinos são parasitados pelos nematoides Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Ostertagia circuncincta, Ostertagia trifurcata, Ostertagia ostertagi e Ostertagia lyrata, que se localizam no abomaso; Trichostrongylus colubriformis, Strongyloides papillosus, Cooperia pectinata, Cooperia curticei, Cooperia punctata, Nematodirus spathiger e Bunostomum trigonocephalum, que parasitam o intestino delgado; Oesophagostomum columbianum, O. velunosum, O. asperum, Chabertia ovina, Trichuris ovis, Trichuris globulosa e Skrjabinema sp., que vivem no intestino grosso; e Dictyocaulus filaria, Muellerius minutissimus e Protostongylus rufescens, que parasitam respectivamente os brônquios, o parênquima pulmonar e os bronquíolos.

H. contortus, T. colubriformis, S. papillosus e O. colubianum são os nematoides que apresentam maior prevalência e maior intensidade de infecção, sendo considerados os mais importantes economicamente para a exploração caprina (VIEIRA et al., 1997). Levantamentos revelam que mais de 80% da carga parasitária de caprinos é composta por H. contortus (COSTA; VIEIRA; 1984; GIRÃO et al., 1992; AROSEMENA et al., 1999). Esse parasita ocorre em locais de verão chuvoso, particularmente em regiões tropicais e subtropicais (BATH; VAN WYK, 2001). É um nematoide de extrema relevância para a criação de pequenos ruminantes, já que é considerado o mais patogênico e o de maior distribuição, principalmente nas áreas tropicais (PAOLINI et al., 2003).

Morfologia e biologia dos parasitas de maior interesse

Superfamília Trichostrongyloidea

São nematoides cilíndricos, delgados e de respiração aeróbica, possuem cavidade bucal reduzida ou ausente, abertura bucal pequena, sem coroa radiada, com três a seis lábios, os quais podem estar ausentes. A bolsa copuladora é bem desenvolvida, com grandes lobos laterais e pequeno lobo dorsal (FREITAS, 1982). Os gêneros mais importantes são Haemonchus (Figura 1), Trichostrongylus, Ostertagia, Cooperia, Nematodirus e Dictyocaulus. Eles alimentam-se de muco, bactérias, células intestinais ou ingerem sangue.

Figura 1. Região anterior de H. contortus adulto (A), seta indica as papilas cervicais; apêndice vulvar da fêmea (B); bolsa copuladora do macho (C).

Foto: Ana Carolina Souza Chagas

O ciclo biológico dos nematoides trichostrongilídeos é direto, com uma fase de vida livre, que ocorre no meio ambiente, e uma parasitária, que se desenvolve no animal (Figura 2). Geralmente ocorrem quatro mudas ou ecdises (ovo, L1, L2, L3 e L4) até alcançar a forma adulta. A primeira ecdise inicia-se com a eliminação de ovos não embrionados nas fezes. No meio ambiente, os ovos tornam-se embrionados, as larvas de estádio 1 (L1) eclodem, sofrem duas mudas e evoluem para L3. Estas últimas possuem cutícula dupla. O período desde a eliminação do ovo até L3 varia consideravelmente entre espécies (5 a 10 dias), dependendo das condições climáticas, principalmente umidade e temperatura. As larvas L3 migram do bolo fecal para a pastagem, onde são ingeridas de forma passiva pelos animais juntamente com a forragem, dando início à fase parasitária. As larvas L3 alcançam o abomaso ou o intestino, migram e invadem a mucosa e evoluem para o quarto estádio larval (L4). Em seguida, atingem o estádio adulto na luz do órgão parasitado. Fêmeas e machos copulam, e começam a ovipostura e o novo ciclo. O tempo gasto para o desenvolvimento desde a infecção até a produção de ovos, chamado período pré-patente, varia entre 14 e 21 dias. O ciclo é bem semelhante para Oesophagostomum (Superfamília Strongyloidea), no entanto as mudas ocorrem dentro da mucosa intestinal, formando nódulos e o período pré-patente é de aproximadamente 45 dias (KASSAY, 1999, TAYLOR et al., 2007).

Figura 2. Ciclo biológico de H. contortus.

Ilustração: Raymundo Rizaldo Pinheiro

Dictyocaulus filaria possui ciclo direto, semelhante aos nematoides gastrintestinais. As fêmeas adultas são parasitas do pulmão e são ovovivíparas, isto é, o ovo já contém a L1 totalmente desenvolvida. As L1 eclodem, migram para a traqueia, são deglutidas e liberadas nas fezes. Em condições favoráveis, atingem o estádio infectante (L3) em aproximadamente 5 dias, abandonando o bolo fecal e migrando para a pastagem por motilidade própria ou por intervenção do fungo do gênero Pilobolus. Podem sobreviver até 9 meses no meio ambiente. As L3, após a ingestão pelo caprino, penetram na mucosa intestinal e passam aos linfonodos, onde sofrem uma muda, passando para L4. Em seguida, vão, via linfática e sanguínea, para os pulmões, onde rompem os capilares e atingem os alvéolos cerca de uma semana após a infecção. A muda final ocorre nos bronquíolos, e os adultos jovens migram para os brônquios, onde amadurecem. O período pré-patente é de aproximadamente cinco semanas (URQUHART et al., 1996).

Superfamília Rhabditoidea

As gerações sexuadas livres de Strongyloides papillosus são muito pequenas, relativamente robustas, com boca provida de dois lábios laterais, vestíbulo curto, esôfago com dois bulbos separados por um istmo e circundado pelo anel nervoso. O macho tem a extremidade posterior curva, e espículos simétricos, robustos, curtos e com gubernáculo. A fêmea anfidelfa possui a extremidade posterior quase reta e a vulva próxima ao meio do corpo (FREITAS, 1982).

O ciclo evolutivo compreende tanto uma etapa parasitária quanto uma de vida livre. A fase parasitária é constituída apenas por fêmeas, que se localizam no intestino delgado e produzem ovos larvados por partenogênese, isto é, desenvolvem-se a partir de um ovo não fertilizado. Após a eclosão, as larvas podem desenvolver-se, por meio de quatro estádios larvais, em machos e fêmeas adultos de vida livre. Acredita-se que, em determinadas condições, especialmente de temperatura e de umidade, as larvas L3 podem tornar-se parasitas, infectando o hospedeiro, por penetração cutânea ou por ingestão, migrando via sistema venoso, pulmões e traqueia, desenvolvendo-se em fêmeas adultas no intestino delgado. As crias podem apresentar infecção imediatamente após o nascimento, já que larvas inibidas podem ser eliminadas pelo leite. O período pré-patente é de 8 a 14 dias (URQUHART et al., 1996).

Superfamília Metastrongyloidea

Muellerius minutissimus e Protostongylus rufescens são vermes capilares castanhos com 1 cm a 3 cm de comprimento. Possuem ciclo evolutivo indireto e são parasitas pulmonares de pouca importância. Os hospedeiros intermediários de Protostrongylus são moluscos terrestres do gênero Helicella. Já Muellerius, além de Helicella, tem como hospedeiros intermediários outros moluscos terrestres dos gêneros Agriolimax, Arion, Subulima e Helix (FREITAS, 1982).

As fêmeas dos gêneros Muellerius e Protostrongylus eliminam ovos embrionados nos pulmões, onde ocorre a eclosão e a liberação da larva L1. Esta migra ascendentemente pelo trato respiratório e é deglutida e expelida para o meio ambiente junto com as fezes. A L1 deixa o bolo fecal e penetra no molusco terrestre, no qual se desenvolve para L2 e L3 num período mínimo de 14 a 21 dias. Os caprinos infectam-se com a L3 pela ingestão do molusco junto com a forragem. A larva segue para os pulmões pela via linfático-vascular, ocorrendo mudas nos linfonodos mesentéricos e nos pulmões. O período pré-patente de Muellerius varia de 6 a 10 semanas e o de Protostrongylus, de 5 a 6 semanas (TAYLOR et al., 2007).

Superfamília Trichuroidea

É bastante comum em caprinos a detecção de Trichuris no ceco intestinal. Esses vermes medem de 4 cm a 6 cm, e a extremidade posterior é espessa, afilando-se rapidamente em uma longa extremidade anterior. A cauda do macho é enrolada e possui um único espículo em uma bainha, enquanto a cauda da fêmea tem curvatura simples. A infecção ocorre pela ingestão de ovos com L1, que, após sair do ovo pelo opérculo, penetra nas glândulas da mucosa cecal, onde sofre quatro mudas. Os adultos ficam com a extremidade anterior encravada na mucosa, copulam e os ovos são eliminados pelas fezes. Após aproximadamente 1 ou 2 meses, a larva desenvolve-se dentro do ovo e transforma-se em L1 infectante. O período pré-patente varia de 6 a 12 semanas (TAYLOR et al., 2007).

Epidemiologia

A epidemiologia é o estudo dos fatores que, inter-relacionados, levam ao aparecimento de doenças numa população. No caso de nematoides gastrintestinais, em que a presença do parasita não significa necessariamente a presença da doença, a epidemiologia pode ser melhor definida como o “estudo dos fatores que determinam a intensidade de infecção adquirida no rebanho” (COSTA, 1982, p. 85). Os principais fatores que interferem na epidemiologia dos nematoides gastrintestinais são:

Fatores ambientais

Segundo Waller et al. (2004), H. contortus possui considerável plasticidade biológica e ecológica para sobreviver às condições desfavoráveis, tanto no ambiente externo quanto dentro do hospedeiro. Dessa forma, esse nematoide tem apresentado importância crescente em países da Europa, o que pode ser uma consequência da sua adaptação não somente à seleção anti-helmíntica, mas também às condições desfavoráveis de clima temperado, experimentadas pelos estádios de vida livre e pelos estádios parasitários.

A precipitação é o fator climático mais relevante no aparecimento das infecções por nematoides gastrintestinais no rebanho caprino. Estudos epidemiológicos desenvolvidos no Nordeste do Brasil têm mostrado que os caprinos em pastejo permanente, sem tratamento anti-helmíntico, ficam parasitados durante todo o ano. Entretanto, a introdução de caprinos traçadores (animais livres de infecção) demonstrou que os caprinos se infectam apenas de meados do período chuvoso ao início do período seco (fevereiro a junho), quando as pastagens estão altamente contaminadas por larvas infectantes (COSTA; VIEIRA, 1984). Essa dinâmica populacional também pode ser observada em caprinos de outros países. Em estudos realizados no Zimbabué, observou-se que, após necropsia de 32 caprinos, a mais baixa população parasitária foi detectada no final da estação seca e aumentou gradualmente ao longo da estação chuvosa, atingindo o máximo no final dessa estação. H. contortus, T. axei, T. colubriformis e O. columbianum estavam presentes em 88% a 97% dos animais (PANDEY et al., 1994).

Embora a precipitação seja um fator muito importante, sua escassez não chega a restringir o desenvolvimento, a sobrevivência e a dinâmica da dispersão larval na pastagem, conforme Amarante et al. (1996) em precipitação de apenas 2,5 mm3; Niezen et al. (1998) em precipitação inferior a 12 mm3; e Yamamoto et al. (2004) em precipitação média de 7,35 mm3 durante o verão e de 2,05 mm3 no inverno.

O manejo da pastagem visando ao aumento da capacidade de suporte, pelo uso de gramíneas com maior taxa de crescimento e menor variação estacional, permite o consequente aumento da concentração de animais (BRÂNCIO et al., 2003). Segundo Sotomaior e Thomaz-Soccol (2001), altas taxas de lotação de pastagem, associadas com temperaturas elevadas e pluviosidade regular, propiciam maior produção animal por área, contudo, também possibilitam altas taxas de contaminação das pastagens pelos estádios de vida livre dos parasitas, acarretando reinfecção rápida do rebanho e queda na produtividade.

Enquanto os caprinos preferem alimentar-se de espécies lenhosas em condições naturais, os ovinos optam por gramíneas e acabam causando maior degradação da pastagem, em razão do pastejo contínuo do extrato herbáceo, o que resulta em maior exposição do solo (BELLUZO et al., 2001). As condições e a espécie da gramínea influenciam diretamente o grau de parasitismo dos animais. Em estudo realizado com caprinos e ovinos criados em pastagem no Estado da Bahia, observou-se que o percentual de nematoides gastrintestinais encontrados nos capins examinados, nos estratos de 0 cm a 15 cm, de 15 cm a 30 cm e acima de 30 cm de altura, foi em média de 31%, 53% e 16%, respectivamente. Os autores concluíram que os capins Tanzânia e Andropogon acima de 30 cm disponibilizaram uma forragem com pequena concentração de larvas infectantes para os animais. Já o capim Estrela Africana disponibilizou um número maior de larvas infectantes, demonstrando relação entre o manejo da pastagem e a probabilidade de ingestão das larvas em caprinos. Os principais gêneros de helmintos identificados foram Haemonchus, Tricostrongylus e Cooperia (QUADROS et al., 2004a, b). Segundo Vieira et al. (1997), apesar de os caprinos preferirem alimentar-se de vegetação mais alta, o melhor aproveitamento das áreas de pastagem, com o emprego de técnicas, como raleamento da caatinga natural, tem proporcionado maior produção de extrato herbáceo e, consequentemente, aumento da taxa de lotação. Isso força os animais ao pastejo mais próximo do solo, favorecendo a ingestão de maior quantidade de larvas infectantes.

Com relação a D. filaria, o animal portador provavelmente é a principal fonte de contaminação do pasto. Surtos em cabritos podem ocorrer após um período de chuvas prolongado ou próximo ao desmame dos animais jovens. Os caprinos parecem ser mais suscetíveis à infecção do que os ovinos e a criação consorciada de ambos pode ser um problema em determinadas regiões (KASSAY, 1999, TAYLOR et al., 2007). Em estudo de prevalência realizado com 5.554 caprinos na Índia, na região dos Himalaias, os cabritos mostraram-se mais susceptíveis do que os adultos, assim como os caprinos em relação aos ovinos em estudos experimentais (SHARMA, 1994). No México, pesquisas demonstraram que a maior prevalência de D. filaria em ovelhas no verão (34,6% ± 16,3%) ocorreu em virtude da elevada precipitação e, no inverno (23,1% ± 12,6%), principalmente por causa da alimentação inadequada, além de outros fatores, como baixas temperaturas e estresse na gestação ou lactação (NAHED-TORAL et al., 2003).

Fatores do hospedeiro

Os animais jovens, com menos de 1 ano de idade, são mais suscetíveis do que os adultos às infecções por nematoides gastrintestinais e adquirem gradativamente resistência às reinfecções. Entretanto, essa resposta imunológica aparece mais tardiamente e com menor intensidade em caprinos do que em ovinos (VLASSOF et al., 1999; MANDONNET et al., 2001). Sob determinadas condições, os adultos podem adquirir infecções graves, especialmente em situações de estresse, como manejo inadequado, prenhez, lactação, subnutrição e estresse térmico, que levam a uma queda de imunidade e consequente inabilidade de resistência à maioria das parasitoses (HASSUM; MENEZES, 2005). Hoste et al. (2002a) comentam que a situação é ainda mais grave em cabras lactantes, já que elas não são capazes de desenvolver uma forte defesa imunológica contra a infecção por nematoides gastrintestinais. A escolha das classes de anti-helmínticos é bastante restrita durante a fase de produção láctea, em razão dos resíduos e do uso inadequado de doses específicas para ovinos em caprinos, ocorrendo normalmente subdosagem e ineficiência tóxica dos produtos em consequência de diferenças no metabolismo das drogas para os caprinos.

A imunossupressão hormonal relacionada ao período gestacional pode ser em virtude do efeito de esteroides, que inibem a atividade dos mastócitos e dos eosinófilos no abomaso (HERD et al., 1983). A hiperplasia e a hipertrofia do abomaso previnem o estabelecimento de nematoides adultos e retêm a fase larval no estado de hipobiose, causando supressão do seu metabolismo (NAHED-TORAL et al., 2003). Consequentemente, provocam aumento no estabelecimento das larvas infectantes ingeridas, retomada do desenvolvimento de larvas em hipobiose (larvas com desenvolvimento interrompido temporariamente no hospedeiro), incapacidade de os animais eliminarem as infecções pré-existentes e aumento da ovipostura dos nematoides adultos já presentes no animal (BAKER, 1975; ARMOUR, 1980). Segundo Costa (1983), estudos desenvolvidos no Nordeste do Brasil mostraram que o aumento do número de ovos de nematoides nas fezes de cabras lactantes, no início e meados da estação seca, está relacionado à maturação de larvas hipobióticas de H. contortus. Essa condição fisiológica é um fator de extrema importância na contaminação ambiental e na transmissão dos nematoides gastrintestinais, uma vez que esse aumento ocorre exatamente em um momento no qual o rebanho está mais suscetível ao parasitismo (matrizes prenhes, lactantes e animais jovens) (COSTA, 1983).

Animais que recebem alimentação de baixa qualidade nutricional, especialmente de proteína bruta, são mais vulneráveis ao parasitismo por não terem condições de desenvolver uma resposta imunológica. Dessa forma, ao se preconizar práticas de controle parasitário, o manejo nutricional do rebanho deve ser considerado, enfatizando a necessidade de suplementação alimentar no período de escassez de forragem de boa qualidade (VIEIRA et al., 1997).

Veloso et al. (2004) observaram que, na estação chuvosa, a pastagem composta por Andropogon gaiannus apresentou teor proteico mais favorável ao desempenho do rebanho ovino, enquanto, na seca, se tornou insuficiente à produção animal, pelo elevado percentual de matéria seca associado ao baixo teor de proteína. Nesse experimento, ovinos que receberam alto nível de proteína (AP) apresentaram valores de ovos por grama de fezes inferiores ao do grupo de baixa proteína (BP) (P<0,05). Na necropsia, os animais submetidos à dieta AP apresentaram menor número total geral de vermes no trato gastrintestinal (P<0,01) do que o grupo BP. Comparando-se os resultados dos grupos AP e BP que receberam tratamento, AP continuou com número total de vermes menor que BP (P<0,05), o que demonstra que o manejo baseado apenas no controle químico tem efeito temporário e limitado, mostrando ser essencial uma alimentação adequada do hospedeiro para se obter melhor efeito com o tratamento anti-helmíntico.

Na prática, percebe-se que o oposto também ocorre, o fator nutricional isolado não impede que os caprinos, nos períodos com grande quantidade de larvas nas pastagens e mantidos em boas condições nutricionais, adquiram altos níveis de infecção, com altas taxas de morbidade e mortalidade. Veloso et al. (2004) justificam que a maior necessidade de proteína que ocorre em animais com infecção parasitária deve-se à perda de nitrogênio endógeno dentro do intestino e ao baixo grau da síntese proteica no músculo. Assim, a proteína ingerida promove o restabelecimento das perdas ocorridas nos tecidos.

Foi verificado que cabras com elevada produtividade láctea demonstraram menor resistência e resiliência à infecção por nematoides gastrintestinais do que cabras do mesmo rebanho com menor produção. Provavelmente, isso deve-se à maior demanda nutricional relacionada à maior produtividade (COOP; KYRIAZAKIS, 1999). O mesmo resultado não foi observado em ovelhas produtoras de leite, já que a quantidade de leite excretado foi praticamente a metade das cabras, além disso, os ovinos exibiram melhor resposta imunológica em relação aos caprinos. Para os autores, isso sugere que a demanda nutricional assume um papel ainda mais importante em caprinos do que em ovinos (HOSTE et al., 2006).

A suscetibilidade dos animais às infecções por nematoides gastrintestinais está também relacionada à genética dos indivíduos (ver Capítulo 19), existindo variações entre raças e indivíduos de uma mesma raça (COSTA et al., 2000). Foi realizado estudo no Ceará (COSTA; PANT, 1983), com animais das raças Anglo-Nubiana, Canindé, Bhuj, Marota e Moxotó, infectados naturalmente com Haemonchus sp. e acompanhados mediante determinação de parâmetros parasitológicos e hematológicos. Os resultados indicaram que os animais da raça Bhuj são mais suscetíveis aos parasitas gastrintestinais, enquanto os das raças Anglo-Nubiana e Canindé parecem possuir mecanismos de defesa mais eficientes às infecções.

Efeitos semelhantes foram obtidos por Costa et al. (2000), em que caprinos da raça Anglo-Nubiana, infectados naturalmente por H. contortus, também apresentaram valores superiores de volume globular e hemoglobina, principalmente em relação à raça Canindé (P<0,01). Pralomkarn et al. (1997) constataram que caprinos nativos da raça Thai são mais resistentes às infecções artificiais por H. contortus do que seus cruzamentos com Anglo-Nubiana, de acordo com a contagem de ovos por grama de fezes e de vermes adultos em necropsia, e os parâmetros hematológicos (P<0,05).

Segundo Mandonnet et al. (2001), foi determinado em um experimento realizado com cabritos da raça Crioula, infectados naturalmente por H. contortus e T. colubriformes, que a herdabilidade estimada no desmame, para a contagem transformada de ovos nas fezes, foi de 0,37 ± 0,06; já a herdabilidade relacionada ao hematócrito girou em torno de 0,10 a 0,33. Dessa forma, esses caracteres também podem auxiliar na investigação da resistência individual a nematoides, dentro de uma mesma raça.

Patogenia e patologia

A infecção por nematoides gastrintestinais em caprinos geralmente é mista (poli-infecção), e origina um quadro clínico associado, provocado pela ação patogênica de cada endoparasita presente na infecção. As infecções caracterizam-se por mostrar, em geral, as seguintes alterações: anemia das mucosas e das vísceras, degeneração gordurosa (atrofia gelatinosa), hidrotórax, hidropericárdio, ascite, caquexia e gastrenterite catarral (SANTA ROSA, 1996).

A mucosa do abomaso pode se apresentar espessa, edemaciada, anêmica, brilhante e com pequenas úlceras no local de fixação de H. contortus. Histologicamente observa-se, na hemoncose, edema da mucosa, submucosa e serosa abomasal, descamação de células epiteliais, ulceração e infiltração de leucócitos, com predominância de eosinófilos (SANTA ROSA, 1996).

As larvas infectantes de T. colubriformis formam túneis entre as glândulas epiteliais da mucosa, que, ao se romperem liberando os vermes, causam hemorragia e edema com perda de proteínas plasmáticas. Ocorre enterite, principalmente no duodeno, e as vilosidades tornam-se deformadas e achatadas, reduzindo a área de absorção. Em infecções maciças, a perda de peso é decorrente da diarreia associada à perda de proteína. Em Ostertagia uma diferença é que as larvas penetram dentro das glândulas da mucosa e não entre elas (TAYLOR et al., 2007).

Nas infecções por O. columbianum, as serosas do intestino delgado e grosso mostram formações nodulares de coloração creme, amarela, esverdeada ou acinzentada. As lesões mais recentes são de consistência pastosa e as mais antigas são calcificadas, em decorrência da penetração de larvas na mucosa durante o ciclo evolutivo. Isso provoca uma reação local, caracterizada histologicamente por pequenos grânulos parasitários, constituídos por tecido necrosado, infiltrado por leucócitos e macrófagos. Essa reação transforma-se em nódulos encapsulados, formados por fibroblastos, no interior dos quais se encontram as larvas. Posteriormente os leucócitos desintegram-se, formando uma massa pastosa em tom creme amarelado ou esverdeado (FREITAS, 1982).

As infecções leves por Trichuris são assintomáticas, mas pode ocorrer inflamação diftérica da mucosa cecal em casos raros de infecções maciças (KASSAY, 1999).

Com relação aos nematoides pulmonares, à medida que as larvas de D. filaria se tornam adultos imaturos e migram para os brônquios, observa-se alveolite, seguida por bronquiolite, e bronquite caracterizada por muco. A luz dos bronquíolos pode ser obstruída por infiltrados celulares de neutrófilos, eosinófilos e macrófagos, causando colapso de grupos alveolares e ocasionando os primeiros sinais clínicos. Animais maciçamente infectados podem morrer de insuficiência respiratória seguida de enfisema intersticial e edema pulmonar a partir do 15º dia após a infecção. A pneumonia parasitária, como é conhecida, é caracterizada pela presença de áreas colapsadas vermelho-escuras ao redor dos brônquios infectados, causada pela grande presença de ovos e migração de L1 nos alvéolos. Posteriormente os parasitas adultos são expelidos e, após algumas semanas, é normal o desaparecimento dos sinais clínicos. Pode ocorrer óbito, nessa fase final, em animais que sofreram infecção maciça associada a infecções secundárias (TAYLOR et al., 2007).

Observa-se a formação de nódulos em Muellerius, próximo ou sobre a superfície pulmonar, contendo os nematoides. Já em Protostrongylus, o comprometimento do pulmão abrange uma área maior. A oclusão de um brônquio pelo parasita resulta no preenchimento de seus ramos por ovos, larvas e fragmentos celulares (TAYLOR et al., 2007).

Sinais clínicos

Os sinais clínicos, assim como a patogenia, variam de acordo com a idade do hospedeiro, a imunidade desenvolvida em infecções prévias, o estado nutricional, a intensidade da carga parasitária e as espécies de nematoides presentes na infecção. Quando os animais estão com elevada carga parasitária, verificam-se altas taxas de mortalidade. Entretanto, os prejuízos mais importantes são aqueles resultantes do comprometimento do processo produtivo – causados pela elevada morbidade das nematodioses gastrintestinais (ALBANEZE; SILVA, 2004) –, que, na maioria das vezes, só são percebidos pelo produtor quando o animal se encontra muito debilitado.

Apesar das infecções serem mistas, H. contortus apresenta maior prevalência e intensidade de infecção. Animais infectados por esse nematoide, na fase aguda da parasitose, apresentam perda de peso, desidratação, diarreia, anemia e pelos arrepiados e sem brilho (SANTA ROSA, 1996). Em altas infecções, ainda na fase aguda, a anemia poderá ser intensa, quando facilmente se nota as mucosas ocular, gengival e vulvar extremamente pálidas, podendo haver mortes já nessa fase, o que caracterizará uma infecção hiperaguda. Na fase crônica dessa parasitose, esses sinais intensificam-se, podendo ser observado edema na região submandibular e ventral, em virtude da hiperalbuminemia. Os animais perdem o apetite, mostram-se debilitados, fracos e apáticos. Já nas infecções em que predominam as espécies de Trichostrongylus, a enterite causa aumento do peristaltismo, que é responsável pela má digestão e redução da absorção dos alimentos, levando à hipoproteinemia. A diarreia com fezes escuras ocasiona a desidratação (FREITAS, 1982).

Em infecções causadas por D. filaria, os sinais clínicos mais comuns são tosse e perda de condição corporal. Nos casos mais graves, os animais apresentam dispneia, taquipneia, depressão e corrimento nasal persistente. Já em infecções com Muellerius e Protostrongylus, raramente observam-se sinais pneumônicos, e as infecções geralmente são inaparentes (KASSAY, 1999, TAYLOR et al., 2007).

Diagnóstico

Deve-se primeiramente realizar anamnese, observando algumas particularidades da propriedade, tais como histórico de doenças, estação do ano, pastagem, manejo do rebanho e condição física dos animais. Com essas observações, aliadas aos sinais clínicos, pode-se suspeitar de parasitose causada por nematoides. Contudo, o diagnóstico definitivo somente poderá ser realizado associando-se exames complementares (coprológicos e necropsia).

Exame coprológico para pesquisa de ovos e larvas nas fezes

A pesquisa de ovos nas fezes pode ser realizada pela técnica de Gordon e Whitlock (1939), utilizando-se a câmara McMaster que determina, de forma quantitativa e qualitativa, o número de ovos por grama de fezes (OPG). Os ovos da maioria das espécies da superfamília Trichostrongyloidea são segmentados e medem entre 60 µm e 130 µm. Nematodirus possui ovos maiores de 130 µm, com poucas células escuras centrais. Os ovos de Strongyloides e Skrjabinema são larvados com aproximadamente 60 µm, e os de Trichuris e Capillaria possuem ovos bioperculados de coloração marrom, sendo que Trichuris têm forma de barril, com opérculos transparentes e bem evidentes (HENDRIX; ROBINSON, 2006, TAYLOR et al., 2007). O manual MVPLT (1971) sugere a Técnica de Baermann para recuperação e obtenção, após 12 h de decantação, de larvas de primeiro estádio de D. filaria em material fecal recém-colhido (5 g a 10 g) e livre de contaminação. A estimativa é feita, e cada larva contada representa 0,2 larva/g. Outra técnica para diagnosticar D. filaria é o lavado traqueal, em que são identificados ovos larvados (HENDRIX; ROBINSON, 2006).

Coprocultura para obtenção de larvas

O cultivo de fezes pela técnica de Roberts e O’Sullivan (1950) é utilizado para identificação do gênero das larvas infectantes. Na cultura, aproximadamente 10 g de fezes são maceradas e umedecidas, e colocadas em um frasco de boca larga. Após 7 dias em temperatura aproximada de 27 °C e umidade entre 70% e 80%, as L3 devem ser recuperadas e identificadas. As larvas (L1) de D. filaria podem ser cultivadas para obtenção de formas de terceiro estádio após 7 dias, com auxílio de uma corrente de ar, em frasco de 500 mL contendo larvas e água limpa (MANUAL..., 1971).

A Tabela 1 indica as medidas características das larvas infectantes das principais espécies de interesse, segundo Dickmans e Andrews (1933).

Tabela 1. Medidas de larvas infectantes de nematoides gastrintestinais de pequenos ruminantes.

Espécie

Comprimento total (µm)

Distância entre ânus e ponta da cauda (µm)

Distância entre ponta da cauda da larva e ponta da cauda da bainha (µm)

Strongyloides papillosus

574 – 710

–

–

Bunostomum trigonocephalus

514 – 678

153 – 183

85 – 115

Trichostrongylus colubriformis

674 – 749

86 – 105

25 – 38

Haemonchus contortus

650 – 751

119 – 146

65 – 78

Ostertagia circuncincta

797 – 866

94 – 110

30 – 40

Cooperia oncophora

804 – 924

124 – 150

62 – 82

Oesophagostomum columbianum

771 – 923

193 – 235

125 – 160

Dictyocaulus filaria

550 – 580

–

–

Fonte: Hendrix e Robinson (2006).

Necropsia

A necropsia deverá ser realizada em animal que tenha vindo a óbito recentemente ou animal seriamente acometido e debilitado, o qual poderá ser sacrificado. Na realização de necropsia a campo, deve-se ter o cuidado de colher amostras do material do abomaso, dos intestinos delgado e grosso e dos pulmões. Deve-se acondicionar o material em frascos com gelo ou formol a 10%, para posterior lavagem e visualização em microscópio. Além das lesões já descritas para cada órgão, pode-se observar também alguns vermes a olho nu, como por exemplo Haemonchus adultos de coloração avermelhada sob a mucosa abomasal, Oesophagostomum, Trichuris e Skrjabinema no intestino grosso, e também Dictyocaulus na traqueia e no pulmão (brônquios e bronquíolos) (KASSAY, 1999; TAYLOR et al., 2007).

Controle

Controle estratégico

Estudos epidemiológicos de nematoides gastrintestinais foram realizados nas regiões semiáridas do Nordeste brasileiro (VIEIRA et al.,1997). Com base nesse conhecimento epidemiológico, o controle estratégico foi a principal alternativa recomendada para a verminose gastrintestinal nas explorações caprina e ovina da região Nordeste. O controle consistiu em concentrar a medicação do rebanho na época em que as condições climáticas da região não eram favoráveis ao desenvolvimento e à sobrevivência dos estádios de vida livre no ambiente. Foi recomendada a aplicação dos vermífugos em quatro épocas do ano, distribuída no início, no meio e no fim da estação seca, sendo uma quarta dose aplicada na metade do período chuvoso. A primeira medicação iniciou-se em julho ou agosto, a segunda aproximadamente 60 dias depois da primeira, a terceira em novembro e a quarta em março. O tratamento estratégico foi uma medida preventiva de controle, considerando que as medicações do período seco controlaram os parasitas nos hospedeiros, que são praticamente os únicos locais de sobrevivência dos nematoides nessa época do ano.

Esse procedimento reduziu gradualmente a contaminação das pastagens pelas larvas infectantes e, consequentemente, diminuiu a transmissão dos nematoides no período chuvoso seguinte. O tratamento no período chuvoso teve o objetivo de evitar a ocorrência de possíveis surtos de parasitismo clínico e de mortalidade no rebanho (VIEIRA et al.,1997).

Recentemente muito tem sido discutido a respeito da forte seleção para a resistência parasitária provocada pelo controle estratégico e/ou preventivo em ruminantes. Com base nos dados epidemiológicos acima e também em dados climáticos regionais, Chagas et al. (2005) sugerem a redução da medicação na estação seca, para a região da Zona da Mata de Minas Gerais e região Serrana do Rio de Janeiro. Essas regiões têm produção intensiva de cabras leiteiras, e, em algumas propriedades, os animais têm acesso à pastagem, pelo menos em algum período do ano. Os autores recomendam a aplicação de medicação antiparasitária em maio (início da estação seca), setembro (final da estação seca) e fevereiro (meados da estação chuvosa).

Medicações anti-helmínticas adicionais (tratamento tático) devem ser utilizadas em determinadas circunstâncias, como no período que antecede a estação de monta ou de inseminação artificial, com a finalidade de prevenir o aumento de OPG. Aconselha-se tratar as cabras 30 dias antes do parto com anti-helmínticos que atuem sobre nematoides adultos e larvas hipobióticas e realizar exame de fezes de pelo menos 10 animais por categoria, em intervalos regulares de 30, 60 ou 90 dias (MOLENTO, 2004a; VIEIRA et al., 1997).

Demais estratégias de manejo sanitário

Além da vermifugação estratégica, as seguintes medidas de manejo devem ser implementadas na propriedade: a) limpar e desinfetar as instalações rotineiramente; b) manter as fezes em locais distantes dos animais, utilizando preferencialmente esterqueiras; c) evitar elevada densidade de animais nas pastagens; d) não introduzir no rebanho animais recém-adquiridos sem vermifugação e isolamento prévio (CHAGAS et al., 2005).

É importante destacar que, em sistemas de rotação de pastagem, os animais que serão medicados devem primeiro trocar de área para, a partir de então, receber tratamento. Caso eles sejam tratados e depois transferidos para uma área considerada limpa, levarão consigo vermes que toleraram a exposição química, e a nova área será contaminada somente por ovos de parasitas resistentes (MOLENTO et al., 2004c).

Outra estratégia viável de ser implantada é o jejum de 10 a 12 horas de todo nutriente sólido antes de receber uma medicação oral. Entretanto, deve-se permitir o livre acesso a água. Ali e Hennessy (1995) afirmam que essa estratégia de manejo possibilitou o aumento da eficácia de drogas como o albendazole e oxfendazole em até 50% em ovinos. Lanusse (2006) comenta que esse efeito é possível por causa da modificação do comportamento farmacocinético das drogas, que retarda o trânsito gastrintestinal e prolonga o tempo de absorção e os processos de eliminação biliar e de recirculação êntero-hepática dos compostos anti-helmínticos, resultando em um aumento da biodisponibilidade sistêmica.

O controle dos nematoides também poderá ser realizado associando o tratamento anti-helmíntico a práticas de manejo que visem à descontaminação das pastagens. Elas poderão ser adotadas conforme o tipo de exploração – pastejo associado com diferentes espécies animais, descanso da pastagem e rotação de área de pastejo com restolhos de culturas (KASSAY, 1999).

Ao escolher o anti-helmíntico a ser utilizado no rebanho, deve-se, quando possível, realizar, por meio da avaliação da contagem de OPG, uma investigação sobre a eficácia dos produtos já utilizados. Os principais anti-helmínticos recomendados e disponíveis no mercado estão apresentados na Tabela 2. Segundo Prichard et al. (1980), com o objetivo de prolongar a vida útil dos vermífugos e, em consequência, retardar o aparecimento de resistência, recomenda-se alternar o grupo químico destes anualmente ou enquanto ele estiver sendo eficaz. Deve ser dada muita atenção a essa alternância, para que não ocorra somente a troca do nome comercial do produto. Deve ser verificado se o produto está sendo administrado na dose correta e se a pistola dosificadora está bem calibrada. O uso de doses acima da recomendada pode causar problemas, a exemplo dos produtos pertencentes ao grupo dos organofosforados, que não oferecem boa margem de segurança pelo fato de serem altamente tóxicos.

Tabela 2. Compostos anti-helmínticos utilizados para tratamento de verminose em ruminantes.

Grupo químico

Princípio ativo

Mecanismo de eliminação

Espectro e ação

Imidatiazóis

Lavamisol e tetramisol

Paralisia espástica

Nematódeos gastrointestinais

Pirimidinas

Pamoato de pirantel

Paralisia espástica

Nematódeos e cestódeos gastrointestinais

Salicilanilidas

Closantel e niclosamida

Não esclarecido

Nematodas (closantel) Cestodas (niclosamida)

Organofosforados

Triclorfon

Paralisia espástica

Nematódeos gastrointestinais

Benzimidazóis

Albendazol, mebendazol, oxfendazol e febendazol

Morte de todas as fases do parasita

Nematódeos gastrointestinais
e pulmonares, cestodas e trematodas

Pró-benzimidazóis

Netobimin

Morte de todas as fases do parasita

Nematódeos gastrointestinais e pulmonares, cestodas
e trematodas

Lactonas macrocíclicas

Ivermectina, moxidectina, doramectina, abamectina e eprinomectina

Paralisia flácida

Nematódeos gastrointestinais e pulmonares
e ectoparasitas

Substitutos nitrofenólicos

Disofenol e nitroxinil

Não esclarecido

Nematódeos gastrointestinais
e pulmonares

Fonte: Molento (2004b).

Com relação ao controle de nematoides pulmonares, recomenda-se a utilização de anti-helmínticos dos grupos dos benzimidazóis, imidotiazóis e avermectinas. Como prevenção, deve-se evitar que os animais utilizem pastos úmidos e, quando possível, realizar controle dos moluscos que são hospedeiros intermediários de Muellerius e Protostrongylus (TAYLOR et al., 2007).

É importante ressaltar que a frequência do tratamento anti-helmíntico é altamente responsável pela situação da resistência parasitária na qual se encontra a grande maioria dos nematoides gastrintestinais (SISSAY et al., 2006), especialmente porque os caprinos metabolizam os anti-helmínticos mais rapidamente do que os ovinos (SANGSTER et al., 1991; HENNESSY et al., 1993), o que promove uma seleção mais rápida para a resistência em caprinos (HENNESSY, 1997). Assim, recomenda-se reduzir ao máximo o número de tratamentos químicos por ano, associando o monitoramento dos animais por OPG, escore corporal e sinais clínicos, incluindo o grau de anemia pelo método Famacha.

A administração de medicação para todo o rebanho é, na grande maioria das vezes, desnecessária, e a adoção do tratamento parcial seletivo permite reduzir a pressão de seleção para a resistência. Hoste et al. (2002a) determinaram que, em um mesmo rebanho, cabras primíparas (em primeira lactação) e multíparas de maior produção são as categorias mais receptivas a infecção parasitária. Foram avaliados 11 rebanhos por 2 anos na França. No primeiro ano, todos os animais receberam tratamento sistematicamente e, no segundo, foi adotada a estratégia de tratamento somente das categorias descritas acima. A média anual de produção de leite por ano foi semelhante, assim como a eliminação de ovos.

Esses autores obtiveram resultados semelhantes (OPG e produção de leite) com o tratamento parcial seletivo e com o tratamento de todo o rebanho em 60 animais por grupo. Isso sugere que o tratamento seletivo permite um controle eficiente das infecções e a redução da pressão de seleção (HOSTE et al., 2002b).

Considerações finais

Considerando a importância dos endoparasitas gastrintestinais na produção de caprinos, bem como os problemas discutidos, torna-se necessário investir em pesquisas que visem à busca de alternativas de controle, que sejam de baixo custo e menos nocivas à saúde animal e ao meio ambiente. Entre essas alternativas, consideram-se mais promissoras, portanto merecem maior atenção no que tange ao investimento em pesquisa, a seleção de animais resistentes, a identificação de fitoterápicos com ação anti-helmíntica e a validação de estratégias de manejo, como o método Famacha, nas diferentes raças e condições climáticas do Brasil.

As medidas de longo prazo descritas devem ser associadas à melhora no manejo nutricional. Dessa forma, é extremamente importante a ampla divulgação de boas práticas de manejo para os produtores, para que medidas preventivas simples possam fazer parte da rotina das propriedades e assim minimizar as perdas causadas pelos nematoides gastrintestinais e pulmonares.

O controle parcial seletivo é, possivelmente, mais detalhado e tem maior grau de complexidade do que o tratamento regular de todo o rebanho. Entretanto, sua adoção deve obedecer à demanda de produtores, que necessitam de soluções com custo-benefício atrativas, e de consumidores, que desejam produtos mais sadios e livres de contaminação química e com alto grau de bem-estar. Antes de lançar tal iniciativa, deve-se destacar a importância da formação técnica e do papel da transferência de tecnologia para produtores, de forma clara, objetiva e sustentável do ponto de vista econômico.

Referências

ALBANEZE, R. F. G. N.; SIVA, R. A. M. S. Controle dos helmintos gastrintestinais em ovelhas criadas na parte alta de Corumbá. Corumbá: Embrapa Pantanal, 2004. 3 p. (Embrapa Pantanal. Comunicado Técnico, 44).

ALI, D. N.; HENNESSY, D. R. The effect of reduced feed intake on the efficacy of oxbendazole against benzimidazole resistant Haemonchus contortus and Trichostrongylus colubriformis in sheep. International Journal for Parasitology, Oxford, v. 25, p. 71-74, 1995.

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Capítulo 3
Trematodiose

Valdomiro Bellato
Antonio Pereira de Souza
Luana Paula Haubold Neis Veiga

Fasciolose

Introdução

Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758) causa, nos hospedeiros definitivos, inflamação do fígado e dos canais biliares. Normalmente a doença apresenta-se de forma crônica, podendo manifestar a forma aguda e subaguda em ovinos e caprinos, causando sobretudo uma grande interferência no desempenho dos animais.

Cordero del Campillo (2001), discorrendo sobre a história da Parasitologia, afirmou que os estádios adultos do parasita foram conhecidos a partir de referências feitas por Jehan de Brie no ano de 1379. Diversos pesquisadores trabalharam na descoberta de partes do ciclo biológico, o que permitiu a Leuckart e Thomas, em trabalho independente, publicar o ciclo em 1882. Lutz, entre 1892 e 1893, complementou o ciclo ao demonstrar que os adultos se formavam a partir das metacercárias; e Sinitzin, em 1914, descreveu as vias migratórias intraorgânicas.

F. hepatica é uma doença originalmente de animais da Europa e atualmente tem ampla distribuição mundial. Ela chegou ao Brasil por meio da importação de animais oriundos do Continente Europeu na época da colonização (HONER, 1979), e distribuiu-se principalmente nos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, São Paulo, Rio de Janeiro e Minas Gerais (SERRA-FREIRE et al., 1995).

Essa enfermidade é uma das parasitoses mais graves, pois altera os índices de crescimento, aumenta a conversão alimentar, diminui a produção de leite, de carne e de lã, interfere na fertilidade e na fecundidade dos animais, reduz a imunidade ante outras infecções, determina a condenação de fígados na ocasião do abate e causa mortalidade de animais.

A fasciolose pode apresentar três formas clínicas: aguda, subaguda e crônica, cuja aparição está relacionada à época do ano, à disponibilidade de metacercárias no pasto e ao número de metacercárias ingeridas. Essa classificação baseia-se principalmente nos achados de necropsia e depende do número de parasitas que se encontram no fígado e do seu estádio de desenvolvimento (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001).

Normalmente, o controle dá-se pela utilização correta de anti-helmínticos, o que permite a eliminação do parasita pelo hospedeiro e a diminuição da contaminação ambiental, todavia, deve-se paralelamente reduzir o número de moluscos e evitar o acesso de animais aos locais contaminados pelos moluscos.

Etiologia, morfologia e hospedeiros

F. hepatica, também conhecida como “baratinha do fígado” ou “saguaipé”, é hermafrodita e, segundo a classificação adotada por Manga González (2001), pertence ao filo Platyhelminthes, classe Digenea, superordem Anepitheliocystidia, ordem Echinostomatida, família Fasciolidae. Apresenta corpo foliáceo, com 18 mm a 35 mm de comprimento e 4 mm a 13 mm de largura; coloração castanha; tegumento com espinhos; extremidade anterior prolongada e com formato de cone, onde está situada a ventosa anterior ou oral; ventosa posterior ou acetábulo localizada na região anterior abaixo da ventosa oral; faringe bem desenvolvida; ovário, testículos e cecos intestinais ramificados; ovário e útero situados na frente dos testículos; glândulas vitelogênicas ocupando as margens laterais e posterior do corpo; poro excretor terminal. Os ovos medem de 130 µm a 145 µm x 70 µm a 90 µm e têm um discreto opérculo (Figura 1) (FREITAS, 1982).

Figura 1. F. hepatica: espécime de adulto (A) e ovo (B).

Fotos: Valdomiro Bellato (A) e Antonio Pereira de Sousa (B)

O parasita apresenta ciclo heteroxeno e necessita, como hospe-deiro intermediário, de moluscos da família Lymnaeidae, gênero Lymnaea (Mollusca, Pulmonata). Três espécies foram identificadas no Brasil: Lymnaea viatrix Orbigny, 1835; Lymnaea columella Say, 1817 e Lymnaea cubensis Pfeiffer, 1839. O parasita atinge um grande número de espécies de mamíferos (hospedeiros definitivos), cuja receptividade é variável. Os mamíferos podem ser classificados em três grupos. O primeiro inclui o suíno, o javali, o cão e o gato, que reagem rapidamente ao parasita e evitam o seu desenvolvimento; o segundo engloba bovinos, equídeos e homem, que reagem com atraso ao processo já implantado no fígado; o terceiro abrange mamíferos mais receptivos, em que existe alta produtividade parasitária e uma marcada patogenicidade, como ovinos, caprinos e logomorfos (VÁSQUEZ; PÉREZ, 2001).

Ciclo biológico e morfologia

O parasita adulto pode viver de 8 a 10 anos (REY, 2001) e eliminar de 2.000 a 5.000 ovos/dia, que passam dos canais biliares para o colédoco e intestino, de onde são eliminados juntamente com as fezes. O desenvolvimento dos ovos depende da separação destes da massa fecal, da presença de meio aquoso e da temperatura ambiental. Os limites térmicos que permitem seu desenvolvimento oscilam entre 10 ºC e 30 ºC (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001). Para Soulsby (1987), a variação da temperatura, dos 10 ºC aos 26 ºC, propicia o incremento na taxa de desenvolvimento; a 12 ºC, a eclosão do miracídio ocorre em 60 dias; a 15 ºC, ao redor de 40 dias; e a 26 ºC, em 12 dias. A forma larval, que mede ao redor de 150 µm x 40 µm, sai do ovo estimulada pela luz. O revestimento ciliar do miracídio possibilita o deslocamento em meio líquido, a presença de manchas ocelares que apresentam sensibilidade luminosa e vários fatores ambientais facilitam o encontro com moluscos do gênero Lymnaea, o que deve ocorrer até 24 horas após a eclosão. O miracídio perde os cílios quando penetra no molusco e inicia o desenvolvimento intramolusco, como estádio de esporocisto. Dentro do esporocisto, por reprodução assexuada, originam-se as rédias, com 1 mm a 3 mm de comprimento. Elas saem do esporocisto, deslocando-se para se alimentar de tecidos da glândula digestiva do molusco. Essa geração de rédias poderá formar uma segunda ou diretamente a terceira forma larval no molusco, as cercárias, que apresentam o corpo oval ou arredondado e medem de 0,25 mm a 0,35 mm de comprimento com cauda de aproximadamente 0,5 mm de comprimento. Um esporocisto origina de cinco a oito rédias, e estas até 600 cercárias.

O número de cercárias produzido por molusco pode variar entre 10 a 4.000, sendo em média 100, e o desenvolvimento da F. hepatica, no hospedeiro intermediário, geralmente dura de 8 a 10 semanas. As cercárias saem dos caramujos, encistam-se sobre gramíneas ou plantas aquáticas, perdem a cauda, protegem-se com uma cobertura resistente (secreção das glândulas cistógenas) e, por fim, passam ao estádio de metacercárias (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001).

As metacercárias permanecem viáveis por muitas semanas, dependendo da temperatura. Abaixo de 20 ºC, a sobrevivência é maior; já, em temperaturas altas e dessecação, são destruídas em curto espaço de tempo (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001; ECHEVARRIA, 2004). Ao estudar a epidemiologia da F. hepatica no Vale do Paraíba, SP, durante 3 anos, utilizando ovinos traçadores, Amato et al. (1986) constataram que as metacercárias podem estar presentes durante todo o ano nas pastagens, com incremento de abril a setembro. Algumas são capazes de resistir a temperaturas mais altas de verão, em virtude das elevadas precipitações pluviométricas que compensam o efeito negativo das altas temperaturas. As metacercárias, que têm aproximadamente 0,2 mm de diâmetro, são ingeridas pelo hospedeiro definitivo ao comer capim contaminado. Ao chegar no intestino, desencistam-se, atravessam a parede intestinal, migram para a cavidade abdominal e, em menos de uma semana, alcançam o fígado, penetram a cápsula de Glisson, migram pelo parênquima durante cinco a seis semanas, alimentam-se e desenvolvem-se, alcançando posteriormente os canais biliares, onde se tornam adultas e iniciam a eliminação de ovos. O período pré-patente desse parasita é aproximadamente de 2 a 3 meses (Figura 2).

Figura 2. Ciclo biológico da F. hepatica: (A) ovo; (B) miracídio; (C) esporocisto; (D) rédia; (E) cercária; (F) metacercária.

Ilustração: Luana Paula Haubold Neis Veiga

Espécies de caramujos do gênero Lymnaea, de água doce, hermafroditas, com concha cônica e dextrógira, são os únicos hospedeiros intermediários de F. hepatica. A espécie L. columella foi identificada nos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, São Paulo, Rio de Janeiro e Minas Gerais; L. cubensis, no Rio de janeiro; e L. viatrix, no Rio Grande do Sul. Echevarria (2004) afirma que o gênero Lymnaea pode produzir 3.000 ovos/mês, e a geração de moluscos, de ovo a ovo, pode levar apenas 1 mês quando as condições climáticas são favoráveis. Os moluscos podem sobreviver enterrados sob a lama seca por vários meses e também sobrevivem a baixas temperaturas. Eles produzem ovos que podem eclodir em temperatura acima de 10 ºC. A reprodução aumenta durante as estações chuvosas, mas diminui e até mesmo é interrompida com a chegada do frio e em períodos de seca.

Mattos et al. (1997) constataram, no Município de Camaquã, RS, em habitat natural, o desenvolvimento de uma geração de L. columella/ano e de uma geração de cercárias/ano e observaram que os meses de julho, agosto, setembro, outubro e novembro são propícios à contaminação da pastagem por metacercárias. Müller et al. (1998), no Rio Grande do Sul, em condições de laboratório, verificaram que o ciclo biológico, de ovo a ovo de L. viatrix, tem o intervalo de 45,6 dias, correspondendo a 8 gerações em 12 meses.

Epidemiologia

No estudo epidemiológico da fasciolose, deve-se levar em consideração fatores relacionados ao ciclo biológico do parasita, como densidade populacional, hábitos alimentares, idade e espécies de hospedeiros definitivos, bem como disponibilidade de água e condições favoráveis de temperatura que facilitam a sobrevivência e a reprodução dos hospedeiros intermediários e das formas evolutivas do helminto.

Entre os ruminantes, ovinos e caprinos são considerados os mamíferos mais receptivos, com alta produtividade parasitária e marcada patogenicidade (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001). Os ovinos não desenvolvem imunidade protetora ao parasita e as reinfecções sucessivas são acumulativas. Conforme Echevarria (2004), os bovinos, por exemplo, pastejam áreas de banhados, mananciais e pequenos córregos, habitat preferencial do hospedeiro intermediário, desse modo proporcionam a continuação do ciclo. Já os ovinos preferem pastar áreas não alagadiças. Longos períodos úmidos são geralmente associados a altas infecções por F. hepatica, mas os ovinos infectam-se principalmente após um período de seca, depois de uma estação chuvosa, quando F. hepatica começa a habitar áreas mais úmidas. Assim, os animais ficam expostos à fase de vida livre do parasita.

Ueno (1985) relata que provavelmente existem divisões biológicas na distribuição do hospedeiro intermediário de F. hepatica no Rio Grande do Sul, a qual deve estar relacionada com temperatura, topografia, qualidade da água e do solo, e alimento do molusco, sendo predominante L. columella nas zonas da grande Porto Alegre, Camaquã, Bagé e Dom Pedrito e L. viatrix na fronteira com o Uruguai, principalmente Santa Vitória do Palmar, Jaguarão, Rosário do Sul, Dom Pedrito e Bagé. Além da distribuição no estado, o autor constatou que o habitat natural de L. columella é diferente do de L. viatrix. Os focos de L. columella encontram-se em pequenos açudes com fonte de água e vegetação ou canais com água limpa e correnteza lenta. Normalmente estão sob as plantas, e as folhas e caules de vegetações aquáticas, nas águas rasas e limpas e de pouca correnteza, raramente na lama coberta por vegetação. A distribuição e a densidade de L. columella nas áreas investigadas foram extremamente baixas quando comparadas com L. viatrix. Esta localiza-se, com frequência, em grande quantidade, na lama argilosa e semiargilosa dos canais de irrigação rasos, com pouca quantidade de água, e nos brejos. Também é encontrada algumas vezes junto de L. columella em arroios com correntes mansas e limpas. No Planalto Catarinense, foi identificada L. columella como hospedeiro intermediário, sendo encontrada em arroios com correntes mansas e limpas (BELLATO et al., 1996).

No Vale do Paraíba, SP, Amato et al. (1986) constataram, em estudo epidemiológico, que a densidade populacional de L. columella é cíclica, decresce entre setembro e fevereiro e aumenta entre março e setembro.

Serra-Freire et al. (1995) reinvestigaram a distribuição da F. hepatica no Brasil, no período de maio de 1994 a janeiro de 1995. Esse estudo envolveu a análise de 14.616 bovinos de 904 propriedades, por meio de exames coprológicos. Dessas propriedades, aproximadamente 25% apresentaram animais positivos, notadamente no Rio Grande do Sul (região de fronteira), Santa Catarina (região do litoral e Vale do Itajaí), São Paulo (Vale do Paraíba), Rio de Janeiro (Região dos Lagos) e sul de Minas Gerais. Os autores observaram uma prevalência de 6,3% no Rio Grande do Sul, 15% em Santa Catarina, 6,7% em São Paulo, aproximadamente 13% no Rio de Janeiro, com ênfase na Região dos Lagos, e 2% em Minas Gerais. Eles afirmaram que, mesmo dentro dos estados onde é tradicional a presença da F. hepatica, ela vem se expandindo. Bellato et al. (1996) também perceberam esse fato ao examinar fezes de bovinos autóctones no Planalto Catarinense, Município de Urubici, nos Vales do Rio dos Bugres e do Rio Canoas, com prevalência de 49,1% e 7,92%, respectivamente. O parasita foi também identificado na região do Planalto Catarinense, em abate de bovinos do Município de Capão Alto e de ovinos do Município de Painel. A distribuição é facilitada pelo transporte de animais parasitados, pela presença e dispersão dos moluscos (hospedeiros intermediários) e pelas condições climáticas de um modo geral favoráveis.

Para Ueno (1985), ao contrário do que ocorre com bovinos, o percentual de fasciolose em ovinos é baixo, varia de 1,4% a 7%, oscilando sem significância durante os anos pesquisados (1980, 1981 e 1982). Nas fazendas do Município de Santa Vitória do Palmar, RS, durante o inverno – estação fria e úmida –, de julho a novembro, os ovinos são acometidos de fasciolose aguda acompanhada de alta mortalidade, em torno de 15% a 20%. As amostras de fezes, coletadas de bovinos e ovinos nessas fazendas, apresentavam positividade acima de 80%. O autor, com base em informações dos proprietários, citou que a ocorrência de surto de fasciolose aguda nos rebanhos de ovinos começa em agosto e vai até o final de novembro, que são meses úmidos e chuvosos. Cavagnolli et al. (2007) relataram recentemente um surto de fasciolose em ovinos e caprinos em Almirante Tamandaré, PR, em janeiro de 2007, com alta mortalidade (16%). Os animais recebiam tratamento preventivo com moxidectina, molécula que não tem ação contra trematódeos, em intervalos regulares. A propriedade tinha pastagens com áreas alagadas, permitindo livre acesso dos animais (33 ovinos e 56 caprinos). Foi encontrado o percentual de 81% dos ovinos e 100% dos caprinos com amostras positivas para F. hepatica.

Patogenia e sinais clínicos

A forma aguda da fasciolose em ovinos, segundo Vázquez e Pérez (2001), origina-se pela ingestão de grande quantidade de metacercárias (forma infectante), em curto período de tempo, por cordeiros expostos pela primeira vez ao parasita. O traumatismo pela migração no parênquima hepático da forma jovem provoca um quadro de anemia hemorrágica aguda, que pode evoluir para morte repentina do animal durante o período pré-patente, em razão da enorme perda de sangue e da falência da função hepática.

Soulsby (1987) relatou que na necropsia, no caso da forma aguda, o fígado aparece engrossado, pálido e friável, com trajetos migratórios hemorrágicos sobre a superfície e no parênquima, bem como depósitos de fibrina na superfície hepática e na cavidade peritoneal. Nas formas menos agudas, o fígado está coberto de traços migratórios, com clara infiltração de leucócitos e uma fibrose inicial. Para o autor, esse tipo subagudo pode sobrepor-se a uma infecção crônica preexistente com resposta celular mais marcada.

A sintomatologia clínica da fasciolose aguda caracteriza-se por debilidade, anorexia, palidez das mucosas, taquipneia ou evidente dispneia quando se movimenta o animal e, em alguns casos, hepatomegalia palpável, com dor abdominal e ascite (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001).

Uma complicação frequente da fasciolose aguda ocorre quando as formas jovens, durante a migração hepática, criam um ambiente necrótico anaeróbio que facilita a ativação e proliferação de esporos do Clostridium oedematiens, causador da hepatite necrótica infecciosa, “morte negra” (enterotoxemia).

A fasciolose crônica é a forma clínica mais usual em ovinos e ocorre quando um número reduzido de metacercárias é ingerido diariamente e por um tempo prolongado, com isso, há predominância de parasitas adultos nos canais biliares. Os sinais clínicos mais frequentes são: perda de peso, anemia e hipoalbuminemia. Há perda adicional de proteínas plasmáticas por extravasamento, através da mucosa biliar hiperplásica. Os animais afetados podem frequentemente estar magros e com mucosas pálidas, e apresentar ascite e edema submandibular em virtude da hiperproteinemia.

A patologia no fígado caracteriza-se por fibrose hepática, consequência da fase de migração, e por colangite hiperplásica pela presença de helmintos adultos nos canais biliares e vesícula biliar. Para Urquhart et al. (1990), o primeiro tipo de fibrose que ocorre é a cicatrização pós-necrótica, encontrada principalmente no lobo ventral, associada à resolução de trajetos migratórios. O segundo tipo, usualmente denominado de fibrose isquêmica, é uma sequela de infarto causada por lesão e trombose de grandes vasos. O terceiro é uma fibrose peribiliar, em que os pequenos canais biliares são atingidos pelos parasitas. E o quarto é a fibrose monolobular – os canais biliares tornam-se ligados por estrias de tecido fibroso, que podem ser vistas macroscopicamente como áreas brancas delimitando o lóbulo hepático. A lesão pode ser encontrada em todo o órgão.

Vázquez e Pérez (2001) descreveram a colangite hiperplásica como o resultado do traumatismo originado pelos helmintos adultos na mucosa dos condutos biliares. O parasita, com seus espinhos e ventosas, produz uma intensa irritação das células epiteliais que, como reação defensiva, modificam sua estrutura. Diante da intensa irritação e necrose da mucosa biliar, desenvolve-se uma forte reação inflamatória. A mucosa dos canais biliares, inclusive a não associada diretamente com os helmintos, engrossa e fica hiperplásica. A rápida proliferação celular origina células pouco diferenciadas que cobrem a lâmina própria congestiva e edematosa. Nessas áreas, há também um marcado infiltrado celular composto por células plasmáticas, linfócitos, macrófagos, eosinófilos e mastócitos.

A mucosa biliar hiperplásica é muito permeável às proteínas plasmáticas, sendo responsável tanto pela atividade hematófaga do helminto quanto pela hipoproteinemia, especialmente a hipoalbuminemia, que ocorre na fasciolose crônica. Os ovos do parasita às vezes provocam uma reação semelhante a um granuloma, que pode resultar em obliteração dos canais biliares acometidos. O aminoácido prolina, produzido pelo parasita, estimula a deposição de colágeno e pode contribuir para a hiperplasia biliar e anemia (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001).

Diagnóstico

É indicado relatar o histórico do animal, a época do ano, principalmente quando existem estudos de variação sazonal, mudanças de área de pastejo, dados anteriores de fasciolose na propriedade e presença de hospedeiros intermediários. No caso dos sinais clínicos, deve-se lembrar que infecções por outros parasitas, como Haemonchus contortus, podem apresentar quadro clínico semelhante.

Nos exames laboratoriais, deve-se realizar a pesquisa de ovos nas fezes, principalmente por meio de técnicas que têm por princípio a sedimentação, como o método de Hoffman ou a técnica dos quatro tamises (GIRÃO; UENO, 1985). Numa primeira infecção, durante as fases aguda ou subaguda, pode ocorrer mortalidade dos animais pelas formas imaturas durante o período pré-patente, portanto, o resultado poderá ser falso-negativo.

O aumento de algumas enzimas, como a glutamato desidrogenase (GLDH), enzima mitocondrial hepatocitária, indica um processo agudo recente, cuja atividade é diminuída quando o parasita alcança o estádio adulto e localiza-se nos canais biliares. A presença dos parasitas nos canais biliares eleva os níveis da gama-glutamil transferase (GGT), por causa das lesões das células epiteliais que revestem os canais biliares (VÁZQUEZ; PÉREZ, 2001).

Os achados de necropsia podem revelar lesões e formas jovens no parênquima (0,7 mm a 2 mm de comprimento) e/ou adultos nos canais biliares.

Vázquez e Pérez (2001) determinaram que as técnicas de imunodiagnóstico podem ser de grande valor para detectar a infecção durante o período pré-patente e para fazer estudos epidemiológicos. A técnica mais difundida é o Elisa, que utiliza antígenos somáticos ou de excreção-secreção do parasita.

Tratamento

A rafoxanida é recomendada na dose de 7,5 mg/kg/PV (peso vivo) para ovinos, por via oral (PO = Per Os). Atua sobre adultos da F. hepatica e formas jovens a partir da sexta semana e sobre H. contortus e Oestrus ovis. O período de carência na carne é de 28 dias, não sendo recomendado para animais em lactação. O closantel é recomendado a 10 mg/kg/PV/PO para ovinos. Age sobre adultos de Fasciola e larvas a partir da sexta semana, e sobre Haemonchus, Bunostomum, Cooperia, Oesophagostomum e Chabertia. Na dose de 15,0 mg/kg, atua também sobre Dermatobia, Oestrus e miíases. A eliminação mais rápida do closantel pelos caprinos diminui a sua eficácia. Ele apresenta as mesmas restrições da rafoxanida.

Nitroxinil deve ser usado na dose de 10 mg/kg/PV/SC (via subcutânea). Atua sobre adultos e larvas a partir da sexta semana. O período de carência na carne é de 30 dias, não sendo recomendado para animais em período de lactação. O Albendazole, a 7,5 mg/kg/PV/PO (ovinos), apresenta eficácia de 95% a 100% sobre adultos. O período de carência é de 14 dias na carne e 3 dias no leite. O triclabendazole (10 mg/kg/PV/PO) age de 85% a 95% sobre formas imaturas e entre 95% a 100% sobre adultos. Cavagnolli et al. (2007) descreveram uma população de F. hepatica altamente resistente ao triclabendazole e ao levamisole, que possuíam eficácia de 20% e 65%, respectivamente, em ovinos. O tempo de carência do triclabendazole na carne é de 28 dias, não sendo recomendado para animais em lactação.

Profilaxia e controle

No hospedeiro definitivo, indica-se a realização de exames de fezes periódicos e os tratamentos com comprovação da eficácia dos produtos utilizados. Sugere-se utilizar o controle estratégico (três a quatro aplicações) quando existe conhecimento epidemiológico do parasita na região. Isso permite o controle nos animais e a diminuição da contaminação na pastagem. No Sul do Brasil, onde existem problemas com fasciolose e a ovinocultura tem grande importância econômica, tem sido indicado quatro aplicações de fasciolicidas no outono (maio) e quatro na primavera (setembro).

O controle de formas parasitárias no meio ambiente tem o objetivo de reduzir o número de moluscos, por meio da drenagem de áreas contaminadas, e o contato desses com formas imaturas. O uso de molusquicidas no meio ambiente deve ser desestimulado, pois apresenta eficácia variável e causa impacto ambiental negativo. Entretanto, outras formas de controle devem ser utilizadas, como controle biológico por aves aquáticas, predadoras naturais de caramujos, e rotação de pastagens ou de hospedeiros.

Paranfistomose

Introdução

O gênero Paramphistomum Fischoeder, 1901, apresenta várias espécies parasitando ruminantes domésticos e silvestres. Tem ampla distribuição geográfica e, principalmente, as formas jovens, localizadas no duodeno, são responsáveis por enterite aguda, que leva à diminuição da absorção de nutrientes, ocasionando perda de peso e fraqueza. Isso reflete na produção de carne, leite e lã, bem como na predisposição a outras doenças. A morbidade é alta e a mortalidade pode ocorrer principalmente em animais jovens.

A presença e a distribuição do parasita estão relacionadas sobretudo a condições climáticas e ambientes favoráveis ao desenvolvimento do parasita e do hospedeiro intermediário. Normalmente o controle é realizado por meio da utilização correta de anti-helmínticos, que permite a eliminação do parasita no hospedeiro e a diminuição da contaminação ambiental; todavia, deve-se paralelamente reduzir o número de moluscos, hospedeiros intermediários, e evitar o acesso dos animais aos locais onde esses hospedeiros estão presentes.

Etiologia e morfologia

A espécie Paramphistomum cervi, considerada a mais frequentemente encontrada no mundo, é hermafrodita. Segundo a classificação adotada por Manga González (2001), ela pertence ao filo Platyhelminthes, classe Digenea, superordem Anepitheliocystidia, ordem Echinostomatida e família Paramphistomidae.

Soulsby (1987) relata que os exemplares adultos medem de 5 mm a 13 mm de comprimento por 2 mm a 5 mm de diâmetro; têm corpo cônico, convexo dorsalmente, côncavo ventralmente, mais afilado anteriormente; coloração avermelhada quando recém-coletado; e ventosa ventral no extremo posterior do corpo mais potente que a oral. Não apresenta faringe; cecos intestinais não apresentam ramificações; testículos ligeiramente lobulados, situados na frente do ovário; glândulas vitelogênicas desenvolvidas, distribuídas lateralmente, desde a ventosa anterior até a ventosa posterior; poro genital colocado na linha média, no terço anterior do corpo. Os ovos medem de 114 µm a 176 µm x 73 µm a 100 µm (Figura 3).

Figura 3. Paramphistomum sp.: espécime adulto (A) e ovos (B).

Fotos: Valdomiro Bellato (A) e Antonio Pereira de Souza (B)

P. cervi é parasita de ruminantes. As formas jovens localizam-se principalmente nas primeiras porções do duodeno e, em infecções maciças, no abomaso, e os adultos no rúmen e retículo. Os hospedeiros intermediários são moluscos pulmonados de água doce, pertencentes especialmente às famílias Planorbidae e Lymnaeidae (SANTOS et al., 1995b).

Ciclo biológico

As espécies do gênero Paramphistomum apresentam ciclo biológico heteroxeno, semelhante ao da F. hepatica. Conforme descrição de Santos et al. (1995b), os ovos de Paramphistomum sp. são eliminados nas fezes, chegam ao meio externo onde, sob condições favoráveis, começam a se desenvolver. Em um período médio de 10 a 18 dias, origina-se uma larva piriforme denominada miracídio, que possui reservas energéticas que duram em média 5 horas e necessita de um hospedeiro intermediário como Biomphalaria tenagophila, pertencente à família Planorbidae. A larva localiza-se entre a concha e as partes moles do corpo do caramujo, procurando no epitélio um local de penetração. No hospedeiro intermediário, migra para a cavidade pulmonar, transformando-se, na primeira semana de infecção, em esporocisto. No interior deste, formam-se as rédias. Estas saem do esporocisto e migram para outros órgãos do caramujo, preferencialmente a glândula digestiva, onde, dependendo das condições ambientais, originam várias outras gerações de rédias. Cada rédia filha originará, em média, cinco embriões de cercárias pigmentadas. Estas, ainda imaturas, abandonam as rédias pelo poro de nascimento e situam-se nos tecidos do corpo do caramujo até atingir a maturidade. Em média, atingem seu completo desenvolvimento ao redor de 2 meses, quando abandonam o caramujo com seus movimentos próprios, em busca de luz e temperatura amena. Esse fato explica a elevada emergência de cercárias em dias mais quentes, de agosto a setembro, nas horas de maior incidência solar. Libertadas na água, nadam de um lado para o outro, até fixarem-se na face ventral das folhas de plantas aquáticas e outros materiais. Encistam-se e tornam-se ligeiramente eliptiformes, salientes e opacas, são então denominadas metacercárias. As metacercárias ingeridas pelos ruminantes vão ao rúmen e ao intestino delgado, e no duodeno se encistam, liberando as formas imaturas que migram, agrupam-se e fixam-se na mucosa intestinal, principalmente nos três primeiros metros, onde permanecem por três a cinco semanas. No final desse período, chegam ao rúmen, fixam-se, alimentam-se de infusórios e fibras vegetais, aumentam rapidamente de tamanho e atingem a maturidade sexual. O ciclo nos hospedeiros intermediário e definitivo demora de 2 a 3 meses. Para Urquhart et al. (1990), o período pré-patente é de 7 a 10 semanas. A sobrevivência das metacercárias é de 3 meses.

Epidemiologia

Santos et al. (1995a) afirmaram que no Brasil os planorbídeos são encontrados, principalmente, em cursos d’água de pouca movimentação, como banhados, açudes e áreas irrigadas para cultivo de arroz. Esses autores citaram observações de criadores e veterinários de Uruguaiana e Dom Pedrito, RS, que acreditam que a frequência das infecções por Paramphistomum sp. e F. hepatica aumentaram a partir da expansão do cultivo de arroz irrigado nessas regiões. Os autores constataram surtos de paranfistomose em bovinos em torno de 2 anos de idade, em meados da primavera e durante o verão, quando as águas baixam e os animais ingerem pastagem com metacercárias. Nas colheitas e observações periódicas de moluscos na fazenda Flor do Conde, em Guaíba, RS, verificaram grande número de B. tenagophila no final do inverno e no início da primavera, com muitos caramujos, medindo de 2 mm a 5 mm de largura. Esses planorbídeos crescem e multiplicam-se rapidamente durante a primavera, no mês de novembro foram encontrados moluscos maiores, medindo de 3 mm a 9 mm.

Nascimento et al. (2002) identificaram P. cervi em 14 dos 15 (93,33%) cervos adultos (Blastocerus dichotomus), de ambos os sexos, necropsiados. Eles morreram no processo de captura e/ou quarentena e eram provenientes da bacia de inundação do Rio Paraná (hidrelétrica de Porto Primavera).

Cavalcante et al. (1993) realizaram um estudo sobre a ocorrência de Paramphistomum sp. em caprinos no Município de Sobral, CE, no período de janeiro de 1986 a maio de 1993. Do total de 1.349 animais necropsiados, 83 (6,15%) apresentaram Paramphistomum spp. na forma adulta. Os autores afirmam que, apesar de não ter sido observada sintomatologia clínica nos casos relatados, é possível que essa parasitose venha a ser mais um problema nas criações de caprinos nas regiões semiáridas do Nordeste do Brasil, principalmente no período seco, quando os animais têm acesso às pastagens próximas de áreas alagadas para bebida, onde se encontram os hospedeiros intermediários. Teixeira et al. (2004) registraram a presença de 396 espécimes adultos de Paramphistomum sp. ao examinar macroscopicamente o retículo e o rúmen de um bovino procedente do Município de Matões do Norte, MA.

Em bovinos, desenvolve-se uma boa imunidade, e os surtos em geral restringem-se a animais jovens; entretanto, os adultos continuam a abrigar pequenas cargas de parasitas adultos e são reservatórios importantes de infecção. Por sua vez, ovinos e caprinos são relativamente suscetíveis durante toda a vida (URQUHART et al., 1990).

É imprescindível que sejam obtidos mais dados sobre a ocorrência desse parasita e sejam realizados mais estudos sobre sua epidemiologia, para que se possa estabelecer um controle eficiente dessa parasitose.

Patogenia e sinais clínicos

As formas adultas de Paramphistomum sp. no rúmen ou no retículo, mesmo em altas infecções, com perdas localizadas das papilas ruminais, são consideradas pouco patogênicas. Os estágios imaturos, localizados principalmente no duodeno, são responsáveis por graves alterações patológicas, que começam a se manifestar em ovinos e caprinos do 5º ao 10º dia de infecção. Essas formas estão embebidas na mucosa, que é, em parte, retirada por meio das ventosas, para que se alimentem; assim, provocam, nos animais, necroses, hemorragias, duodenite hemorrágica, lesões que podem alcançar a camada muscular da mucosa. Esses animais apresentam diarreia fluída, fétida e persistente, sede intensa, anorexia, perda de peso, anemia, hipoproteinemia, edema, emagrecimento e, por fim, morrem.

Diagnóstico

É importante fazer um histórico da propriedade sobre a parasitose e a época do ano, principalmente quando existe grande variação sazonal. A diarreia ocorre preferencialmente em animais jovens. Deve-se levar em conta que outras parasitoses podem apresentar quadro clínico semelhante. A técnica de sedimentação deve ser usada para pesquisar ovos nas fezes. Numa primeira infecção pode ocorrer mortalidade dos animais por estádios jovens, e o resultado do exame de fezes pode ser falso-negativo. Nesse caso, segundo Soulsby (1987), pode-se examinar as fezes fluídas para procurar formas jovens do parasita. Na necropsia deve-se observar lesões e formas jovens principalmente no duodeno (3 mm a 4 mm de comprimento) e/ou adultos no rúmen. Alvarez e Martín (2001), com o uso das técnicas de imunofluorescência e Elisa, utilizando como antígenos os extratos de parasitas adultos, oferecem resultados aceitáveis.

Tratamento

A niclosamida deve ser utilizada em 100 mg/kg/PV/PO para ovinos. Tem eficácia de 96% sobre formas imaturas e 18% sobre adultos. O período de carência é de 1,5 dias na carne e de 1 dia no leite. A oxiclozanida (15 mg/kg/PV/PO) atua em adultos e formas imaturas para ovinos. O período de carência é de 14 dias na carne e de 4 dias no leite. O resorantel (65 mg/kg/PV/PO) é indicado para ovinos e caprinos e apresenta toxicidade contra adultos e formas imaturas. O período de carência é de 2 dias na carne e no leite.

Profilaxia e controle

No hospedeiro definitivo, deve-se realizar exames de fezes periódicos e sugerem-se tratamentos para permitir o controle nos animais e a diminuição da contaminação na pastagem. Algumas das medidas de controle ambiental e de redução do hospedeiro intermediário são o isolamento dos nichos com hospedeiros intermediários, a redução do número de moluscos por meio de drenagem – quando possível e/ou permitida – de áreas contaminadas, o uso de molusquicidas, cuja eficácia é variável e o impacto ambiental negativo, e o controle biológico com a introdução de espécies competidoras. A vacinação experimental com metacercárias irradiadas de diversas espécies de Paramphistomum, em hospedeiros naturais, apresentou eficácia significativa diante do desafio em infecções posteriores (ALVAREZ; MARTÍN, 2001).

Euritrematose

Introdução

Espécies do gênero Eurytrema Looss, 1907, parasitam principalmente ruminantes em regiões da Ásia, América do Sul e Europa. A euritrematose, em geral, apresenta-se na forma subclínica, com eventual perda de peso e debilidade, o que reflete em prejuízos econômicos, pela diminuição da produção de carne e leite. A presença e a distribuição desse parasita estão relacionadas sobretudo a condições climáticas e ambientais favoráveis ao desenvolvimento dele e dos hospedeiros intermediários.

Etiologia e morfologia

Normalmente na literatura, para o gênero Eurytrema, são citadas duas espécies: Eurytrema pancreaticum (Janson, 1889) e Eurytrema coelomacticum (Giard e Billet, 1892). Segundo a classificação adotada por Manga González (2001), pertence ao filo Platyhelminthes, classe Digenea, superordem Epitheliocystidia, ordem Plagiorchiida, família Dicrocoeliidae. Tem corpo achatado, alongado e translúcido (Figura 4); ventosas situadas na região anterior do corpo; faringe pequena e esôfago curto; testículos localizados em posição horizontal, ligeiramente abaixo da ventosa ventral; ovário globular, ligeiramente deslocado da linha mediana e abaixo dos testículos; poro genital situado na frente da ventosa ventral; glândulas vitelogênicas localizadas lateralmente, porém na região anterior e média do corpo; e útero com circunvoluções, situado na porção posterior do corpo. Na descrição da espécie E. pancreaticum, Soulsby (1987) relata que as dimensões são de 8 mm a 16 mm de comprimento x 5 mm a 8,5 mm de largura, e se localiza nos condutos pancreáticos e menos frequentemente nos condutos biliares e no duodeno de ovinos, caprinos, bovinos e bubalinos. Os ovos medem de 40 µm a 50 µm x 23 µm a 34 µm.

Figura 4. Eurytrema sp.: espécime adulto (A) e ovo (B).

Fotos: Valdomiro Bellato (A) e Antonio Pereira de Souza (B)

Usualmente são citados, como hospedeiros intermediários, os caracóis terrestres pertencentes ao gênero Bradybaena sp. e os gafanhotos do gênero Conocephalus sp.

Ciclo biológico

No ciclo do E. coelomaticum, que é semelhante ao do E. pancreaticum, Freitas (1982) descreve que os ovos de Eurytrema chegam ao exterior junto com as fezes dos hospedeiros definitivos. Os caracóis dos gêneros Bradybaena e Cathaica, que atuam como primeiro hospedeiro intermediário, infectam-se passivamente, ingerindo os ovos. Nos caracóis ocorrem duas gerações de esporocistos, sendo que a segunda produz cercárias. Essas são liberadas pelo molusco ainda no interior do esporocisto de segunda geração. No ambiente, os esporocistos contendo as cercárias são ingeridos juntamente com a pastagem pelo gafanhoto, Conocephalus maculatus, segundo hospedeiro intermediário. A transformação de cercárias em metacercárias dá-se em 9 dias e, após aproximadamente duas semanas, as metacercárias tornam-se infectantes para os hospedeiros definitivos, os quais se infectam ao comer gafanhotos parasitados. Os parasitas adultos são encontrados nos canais pancreáticos de cabras sete semanas após a infecção.

Epidemiologia

São poucas as informações sobre a epidemiologia desse parasita, e os dados existentes referem-se aos bovinos como hospedeiros definitivos. A doença foi considerada endêmica no Estado de Minas Gerais, onde 17,15% dos bovinos de várias propriedades foram examinados e estavam infectados por Eurytrema sp. (BRANT; COSTA, 1963). No Estado de São Paulo, 80% das propriedades avaliadas tinham animais positivos para a euritrematose bovina (MATTOS JÚNIOR; VIANNA, 1987). No mesmo estado, na região do Vale do Ribeira, Fujii et al. (1997) verificaram 18,33% de amostras de fezes positivas e 57,14% das propriedades com bovinos positivos. Em duas propriedades em que os autores coletaram e examinaram caramujos terrestres, Bradybaena similares, e gafanhotos, Conocephalus spp.; 70% e 20% deles, respectivamente, possuíam formas larvares de E. coelomaticum. Santos et al. (1995a) registraram a ocorrência de Eurytrema sp. em bovinos abatidos, provenientes do Município de Mucuri, BA.

Em estudo retrospectivo, realizado durante o ano de 2000, no abate de bovinos originários de quase todas as localizações geográficas do Estado do Paraná, foi constatado o percentual de 12,1% (12.534) de bovinos parasitados por Eurytrema spp. A prevalência dos animais parasitados na região estudada variou entre 8,3% e 40,5%. A euritrematose bovina foi predominante no mês de março e marcadamente reduzida em maio. Verificou-se uma possível predominância sazonal, uma vez que ocorreram poucos casos durante os meses de abril a agosto, e um pico foi observado entre os meses de dezembro e março. Isso deve estar relacionado ao aumento da temperatura, que favorece a transmissão do trematódeo (AZEVEDO et al., 2004). Para os autores, a prevalência é variável e pode estar diretamente relacionada ao ciclo biológico do trematódeo, às particularidades de cada região e aos fatores ambientais. Ainda nesse estado, Bassani et al. (2004) registraram a frequência de Eurytrema spp. no período de maio de 2003 a abril de 2004, em bovinos abatidos em Campo Mourão. Foi constatada uma prevalência anual de 48% (792/1.648). O mais baixo e o mais alto percentual, 26,9% (46/171) e 86,1% (62/72), foram observados nos meses de novembro de 2003 e abril de 2004, respectivamente. O período de infecção provavelmente ocorreu no verão, por causa da maior disponibilidade de hospedeiros intermediários. Do total de animais parasitados, 59% (468/792) apresentaram mais de 50 parasitas alojados no pâncreas.

Profilaxia e controle

Em razão da falta de medicamentos eficazes, o monitoramento deverá ter por base o controle dos hospedeiros intermediários, evitando o acesso dos animais aos locais contaminados por moluscos.

Referências

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Capítulo 4
Cestodeose

Ana Célia Rodrigues Athayde
Onaldo Guedes Rodrigues
Wilson Wouflan Silva

Introdução

A ovinocaprinocultura do Nordeste brasileiro tem papel relevante na economia do País, pois o Brasil possui o maior rebanho e aproveita os produtos e subprodutos dessa atividade. Atualmente o setor tem despertado grande interesse da política econômica do País, mas poucas são as informações técnicas que chegam aos produtores. Os ovinos e caprinos são utilizados para a produção de alimentos de alto valor nutricional, como carne e leite, e a renda familiar dos produtores é incrementada pela venda de animais vivos, peles e esterco.

As transformações necessárias à prática racional da ovinocaprinocultura tendem a conduzir as criações de forma intensiva e em espaços físicos reduzidos, favorecendo sobremaneira a incidência de doenças parasitárias. Estas ocupam lugar de destaque entre os fatores que limitam a produção, sendo responsáveis por elevadas perdas econômicas em decorrência de crescimento retardado, perda de peso, redução no consumo de alimentos, queda na produção de leite, baixa fertilidade e, nos casos de infecção maciça, altas taxas de mortalidade (PINHEIRO et al., 2000).

Entre os cestódeos parasitas de caprinos e ovinos, objeto de discussão neste capítulo, destacam-se os gêneros Echinococcus e Taenia, pertencentes à família Taeniidae, e o gênero Moniezia, pertencente à família Anoplocephalidae.

Quase todos os animais criados extensivamente albergam uma ou mais espécies de helmintos (Platyhelminthes e Nematoda). O parasitismo, entretanto, não é sinônimo de doença com sintomatologia evidente, pois geralmente os animais de um rebanho encontram-se em boas condições de saúde. Isso decorre do fato de os hospedeiros possuírem mecanismos imunológicos que possibilitam, na maioria das vezes, a manutenção da população de endoparasitas sob controle. Quando isso ocorre, pode-se afirmar que a relação parasita-hospedeiro está em equilíbrio. Contudo, essa situação de equilíbrio (homeostase) pode ser alterada por diversos fatores, como mudanças climáticas bruscas, variações no nível nutricional, idade, estado fisiológico do rebanho, etc. Mudanças significativas nesse equilíbrio são, muitas vezes, provocadas inadvertidamente pelo próprio homem e estão ligadas normalmente ao manejo inadequado, tais como taxas de lotação elevadas, que resultam no aumento da contaminação ambiental pelos estádios de vida livre dos parasitas, e introdução de animais de raças provenientes de regiões de clima temperado, que não apresentam resistência contra algumas espécies de parasitas abundantes em regiões tropicais.

O controle das parasitoses de ovinos e caprinos no Brasil é essencialmente químico, com o uso de drogas sintéticas que, logo após interagirem com os sistemas biológicos (em ambos hospedeiro/parasita) e sofrerem processo de biotransformação, liberam resíduos que podem comprometer a integridade física do animal, e, após sua eliminação, causar danos ao meio ambiente. Esses eventos, decorrentes do uso de antiparasitários convencionais, podem elevar os custos de produção a índices comprometedores.

Atualmente os programas de controle de verminoses de caprinos e ovinos pretendem não só a cura das doenças clínicas, que se caracterizam por altas taxas de mortalidade, mas também a redução dos prejuízos provocados pela infecção subclínica. Ressaltam a necessidade de difusão de métodos alternativos, ecologicamente viáveis, para o controle das verminoses, contemplando desde a utilização de compostos anti-helmínticos naturais até a capacitação de técnicos e criadores sobre práticas de manejo politicamente corretas, que se adequadamente administradas, favorecerão esse controle. Considera-se que o conjunto de medidas mencionadas poderá contribuir para mudar a realidade.

Morfologia de cestódeos parasitas de ovinos e caprinos

A classe Cestoda compreende cerca de 3.500 espécies de endoparasitas obrigatórios, cujos adultos são encontrados no intestino de todas as classes de hospedeiros vertebrados. Alguns apresentam ciclo monoxênico, entretanto a maioria necessita de pelo menos um hospedeiro intermediário vertebrado ou invertebrado. Eles têm tamanhos variados (de poucos milímetros a vários metros), corpo achatado dorso ventralmente, despigmentado, revestido por uma cutícula, com segmentos divididos em três partes. A primeira região, denominada escólex, possui estruturas de fixação – ventosas alongadas (bótrios) ou arredondadas com ou sem rostro, ou rostelo armado ou não de acúleos ou ganchos. A segunda, denominada de colo, dá origem à terceira, o estróbilo, que contém o restante do parasita, cujas divisões são denominadas de proglótides. Essas podem ser poucas, como no caso de Echinococcus, ou centenas, como no de Taenia. São hermafroditas, sem aparelho circulatório e alimentam-se por absorção de alimentos presentes no intestino do hospedeiro. Os cestódeos de maior importância médico-veterinária pertencem às ordens Pseudophyllidea (com os gêneros Diphyllobothrium e Spirometra, parasitas usuais de peixes entre outros animais) e Cyclophillidea (com vários representantes das famílias Anoplocephalidae, Davaineidae, Dipylididae, Hymenolepididae e Taeniidae).

Posição sistemática:

Filo: Platyhelminthes

Classe: Cestoda

Ordem: Cyclophylylidea

Família: Taeniidae

Gênero: Echinococcus Rudolphi, 1801

Gênero: Taenia Linnaeus, 1758

Família: Anoplocephalidae

Gênero: Moniezia Blanchard, 1891

Moniezia

São endoparasitas obrigatórios, corpo achatado dorso-ventralmente, formado por três partes. A primeira é a cabeça ou escólex não armado com acúleos, normalmente apresenta estruturas de fixação como ventosas. A porção intermediária do corpo é o colo, região germinativa responsável pelo crescimento do parasita (Figura 1).

Figura 1. Escólex de Moniezia sp.( v = ventosas; s = sulcos; c = colo).

Ilustração: Wilson Wouflan Silva
Fonte: adaptada de Lynn (1999).

A última porção do corpo é o estróbilo, que é formado pelo conjunto de proglótides (Figura 2), que varia consideravelmente de forma e tamanho. Cada proglótide possui um par de órgãos sexuais repetidos metamericamente, característica denominada de proglotização. Após a fertilização na proglótide madura, os órgãos sexuais degeneram-se para dar lugar aos ovos (Figura 3).

Figura 2. Proglótide de Moniezia sp. (Gi = glândulas interproglotidianas; C = cirro; Gv = glândulas vitelínicas; Og = orifício genital).

Ilustração: Wilson Wouflan Silva
Fonte: adaptada de Lynn (1999).

Figura 3. Ovo de Moniezia sp. (Ap = aparelho piriforme; Co = cápsula ovígera).

Ilustração: Wilson Wouflan Silva
Fonte: adaptada de Lynn (1999).

As tênias mais comuns em ruminantes são Moniezia expansa e Moniezia benedeni. Esses cestódeos alimentam-se do conteúdo intestinal, por absorção de nutrientes essenciais, sem causar transtornos aos seus hospedeiros. No entanto, quando ocorrem infecções elevadas, podem provocar cólicas, em virtude da obstrução intestinal e, em certos casos, morte de animais jovens. Segundo Repossi Júnior et al. (2006), distúrbios metabólicos ligados às vitaminas do complexo B também podem ser observados.

Moniezia expansa (Rudolphi, 1810)

Parasita do intestino delgado de caprinos e ovinos, comum em várias partes do mundo, pode alcançar até 6 m de comprimento. Apresenta escólex pequeno, cuboide-esférico, com tamanho médio variando de 0,3 mm a 0,8 mm, com quatro ventosas ovaladas e sem acúleos ou ganhos. As proglótides são delgadas, mais largas que longas (em média 1,5 cm), translúcidas e ornamentadas linearmente em toda borda posterior por uma fileira de glândulas interproglotidianas (variando de 12 a 30), espalhadas ao longo da borda superior da proglótide (Figura 2). São hermafroditas e o aparelho genital é duplo, disposto bilateralmente. Os ovários são multilobulados e as glândulas vitelinas estão situadas lateralmente ao seu corpo. Os testículos do parasita formam uma complexa rede multilobular. Os ovos medem de 56 µm a 57 µm, apresentando ora forma triangular, ora esférica, poligonal ou cúbica, com característico aparelho piriforme do embrião bem desenvolvido.

Moniezia benedeni (Moniez, 1879)

Cestoda cujo comprimento pode alcançar até 4 m. Apresenta escólex no formato cuboide de diâmetro relativamente grande (1 mm), ornamentado por acúleo e quatro ventosas salientes. As proglótides maduras medem cerca de 3 mm, normalmente constituídas por glândulas interproglotidianas, comprimidas no terço mediano das bordas das proglótides. Os ovos medem em torno de 75 µm de diâmetro.

Ciclo Evolutivo de Moniezia sp.

As proglótides grávidas ou ovos são eliminados juntamente com as fezes contaminando o meio ambiente. Quando os ovos são eliminados em regiões de pastagens, podem ser ingeridos por várias espécies de ácaros de vida livre de Cryptostigmata, principalmente os Oribatídeos (Galumna, Oribatula e Peloribates), os quais desenvolvem larvas do tipo cisticercoide (cisto sólido com um escólex invaginado). O hospedeiro definitivo contamina-se ingerindo acidentalmente os ácaros nas pastagens. Após a ingestão, os ácaros são destruídos pelo suco gástrico produzido no estômago do hospedeiro, liberando a larva, que se fixa na parede intestinal (Figura 4). Cerca de 35 a 45 dias depois, os parasitas atingem a maturidade e vivem, em média, 5 meses no hospedeiro definitivo. Contudo existem relatos de maior tempo de sobrevida.

Figura 4. Ciclo evolutivo do gênero Moniezia.

Ilustração: Wilson Wouflan Silva

Epidemiologia

O gênero Moniezia é comum em ruminantes. Embora não registrado normalmente, é de grande importância patogênica, pois pode causar graves infecções em cordeiros e cabritos com menos de 6 meses de idade, provocando grandes prejuízos no plantel (SOULSBY, 1987).

A infecção por cestódeos é prevalente nas diversas regiões do mundo. No Chipre, foi observado o percentual de 17% de infecções causadas por M. expansa, com caráter secundário (LE RITCHIE et al., 1973), a maior incidência foi na primavera e no outono. Em Córdoba, o parasitismo de caprinos por M. expansa também foi constatado em conteúdos fecais oriundos de matadouros públicos (MARTINEZ GOMES et al., 1973). No Brasil, estudos preliminares demonstraram que M. expansa representa um dos principais parasitas em caprinos no Estado da Bahia. Nesse estado, na região de Uauá, a prevalência da infecção por M. expansa em caprinos foi de 41,66% (MOURA; MOURA, 1974) e, em Vitória da Conquista, foi de 26,53% (GRISI, 1975). Em Pernambuco, foi observado parasitismo em caprinos, por M. expansa, durante todo o ano (PADILHA, 1980). Giovannoni e Kubiak (2001) verificaram, no Paraná, infecções por cestódeos em ovinos e caprinos.

Flutuação estacional na incidência da infecção poderá ser associada à presença de vetores, geralmente ácaros da família Oribatidae, que podem sobreviver cerca de 15 meses no pasto (FORTES, 1987).

A intensidade do parasitismo não se repete de forma igual em todos os animais do rebanho, visto que a concentração de parasitas em uma determinada população de hospedeiros é maior em apenas alguns indivíduos (CABARET; MORALES, 1983). Esse fato deve-se a uma predisposição individual relacionada a fatores como idade, sexo, estado fisiológico, raça, condições ambientais e receptividade do próprio hospedeiro (MORALES et al., 1986). Do ponto de vista estratégico, a identificação e o tratamento seletivo dos animais que albergam uma maior concentração de parasitas são de grande importância epidemiológica, uma vez que eles têm papel fundamental na contaminação ambiental (CROFTON, 1971; MORALES, 1989).

Patogenia e sintomatologia clínica

A patogenia causada por parasitas do gênero Moniezia é tema discutível entre pesquisadores e parasitologistas. A maioria dos estudos demonstra que as tênias não são patogênicas e que os animais infectados, na maioria das vezes, apresentam um aumento no apetite, o que pode ser atribuído à competição nutricional que ocorre entre o parasita e o hospedeiro. Animais com menos de 6 meses de idade são os mais acometidos. Pesquisas detectaram fortes efeitos patogênicos em razão da elevada carga parasitária, como diarreia, obstrução intestinal e enterotoxemia em animais jovens. Entretanto há divergências quanto ao seu efeito patogênico (MOAZENI; NILI, 2004).

Do ponto de vista patológico, as infecções graves podem causar inflamação da mucosa intestinal e degenerescência das vilosidades e, mais raramente, degenerescência gordurosa do fígado (VIBE, 1976; FORTES, 1987). Em infecções elevadas, podem-se encontrar novelos de tênias formando uma massa sólida nos intestinos dos animais parasitados. Essas infecções são facilmente detectadas pela observação das proglótides eliminadas junto com as fezes ou por meio de necropsias realizadas nos animais mortos.

Apesar disso, mesmo em estudos experimentais com animais infectados artificialmente, não foi possível reproduzir sinais capazes de caracterizar clinicamente a doença, mesmo tendo esses animais apresentado uma alta carga parasitária (SOULSBY, 1987).

Os sintomas da monieziose, de acordo com a etapa de evolução, devem ser motivo de intenso cuidado, principalmente em animais jovens. No primeiro momento, os animais apresentam mucosas anêmicas, com emagrecimento e sede intensa. Depois, podem surgir alterações no trato gastrintestinal, como aumento do volume abdominal, quadros alternados de constipação, diarreias, tremores e convulsões, com frequente visualização de proglótides nas fezes; e, no último momento, observam-se animais caquéticos, com diarreia persistente e anemia intensa, e morte (FORTES, 1987).

Diagnóstico e controle

O diagnóstico laboratorial baseia-se principalmente no encontro de proglótides maduras características nas fezes. A identificação dá-se a partir da recuperação dos ovos desses proglótides e posterior observação microscópica para constatação do aparelho piriforme (FORTES, 1987; SOULSBY, 1987).

Esse tipo de infecção pode ocorrer em animais de qualquer sexo e idade. No entanto, a gravidade é maior em animais jovens e em fêmeas no período do periparto. Além disso, a condição nutricional dos animais tem grande influência na relação parasita/hospedeiro (COLDITZ et al., 1996).

De forma geral, os animais, até a puberdade, apresentam grande susceptibilidade à verminose. Medidas estratégicas de controle antiparasitário são indispensáveis na recria dos animais jovens. Caso essas medidas não sejam adotadas, a mortalidade e a redução no ganho de peso dos animais poderão causar prejuízos consideráveis. É importante observar que o grau de infecção das crias varia conforme as condições de manejo e o grau de contaminação da pastagem. As fêmeas paridas são a principal fonte de contaminação ambiental, responsáveis quase sempre pela infecção de suas crias. Estudos realizados com cordeiros expostos à pastagem contaminada pelas ovelhas no periparto mostraram que eles apresentaram elevada carga parasitária, quando comparados com aqueles não expostos à pastagem contaminada (SALISBURY; ARUNDEL, 1970). Em algumas situações, são encontradas grandes quantidades de ovos, mesmo antes do período da desmama, em animais com menos de 2 meses de idade (ROCHA et al., 2004). Para minimizar a exposição desses animais aos parasitas, tem sido recomendado que a recria seja realizada em pastagens descontaminadas ou submetidas a manejo rigoroso.

A alimentação tem grande influência no desenvolvimento e nas consequências do parasitismo. Animais que recebem alimentação de boa qualidade podem ter mais habilidade para enfrentar os prejuízos decorrentes do parasitismo, em razão da boa condição imunológica desenvolvida. Dessa forma, podem aumentar a resistência e, consequentemente, limitar o estabelecimento, o crescimento e a fecundidade dos cestódeos ou, até mesmo, causar a eliminação dos parasitas adultos presentes no aparelho digestivo. Os alimentos que contêm compostos com ação antiparasitária podem interferir diretamente na integridade dos helmintos, o que ocorre, por exemplo, com plantas ricas em taninos condensados (COOP; KYRIAZAKIS, 2001). Dietas com nível elevado de proteína podem propiciar uma melhora na resposta imunológica em ovinos, especialmente naquelas raças que já são naturalmente resistentes aos helmintos (BRICARELLO et al., 2003).

Echinococcus

Na família Taeniidae, encontram-se quatro espécies diminutas de cestódeos pertencentes ao gênero Echinococcus, cujas formas adultas são parasitas principalmente de carnívoros, e as formas larvárias podem ser encontradas em ruminantes, roedores e também no homem. No Brasil, a espécie de elevada importância médico-veterinária é Echinococcus granulosus (agente da hidatidose), por acometer durante seu desenvolvimento larval o homem (acidentalmente) e os ruminantes (principalmente bovinos e ovinos). Sua ocorrência em equinos e suínos ainda é controversa.

Echinococcus granulosus (Batsch, 1786)

Endoparasita obrigatório, com corpo achatado dorso-ventralmente, escólex com quatro ventosas e rostro com uma dupla coroa de acúleos ou ganchos unidos. No colo seguem-se três ou quatro segmentos denominados de proglótides: uma imatura, uma ou duas maduras e uma grávida, que pode conter em seu interior entre 500 e 800 ovos. Não apresenta cavidade corporal nem tubo digestivo e possui comprimento médio de 5 mm quando adulto. É encontrado apenas no intestino delgado do hospedeiro definitivo e causa a equinococose. A larva encontra-se no interior do cisto hidático e mede entre 5 cm e 10 cm. O cisto hidático é constituído de várias membranas – adventícia ou externa (pericisto), anista, e prolígera ou germinativa. Os cistos, que causam a doença conhecida como hidatidose, podem ser encontrados no fígado e nos pulmões do hospedeiro intermediário, principalmente de ruminantes. Suínos também podem participar do ciclo esporadicamente, enquanto o homem participa do ciclo acidentalmente. Neste os cistos podem ser encontrados no cérebro, rins e ossos.

O cão parasitado, que é o hospedeiro definitivo, libera no ambiente os ovos do parasita junto com as fezes, raramente dentro das proglótides. Os ovos são esféricos, revestidos por uma membrana quitinosa (embrióforo), a qual encerra o embrião hexacanto ou oncosfera. São resistentes a frio e calor, mantendo-se viáveis no ambiente por longos períodos. O hospedeiro intermediário (ovino, caprino, bovino, suínos, cervídeos, entre outros) contamina-se ao ingerir a pastagem com os ovos, e/ou o acidental (homem), ao consumir a carne do animal contaminado. Os ovos rompem-se no intestino, pela ação do suco gástrico sobre o embrióforo, e liberam as larvas. Em seguida, a oncosfera perfura a mucosa duodenal, ganha a circulação sanguínea e, após um breve período de migração, chega ao fígado, pulmão ou outros órgãos, onde se aloja. A partir daí, inicia-se a formação de um cisto, que cresce cerca de 1 cm por ano, podendo chegar a 10 cm. O cisto é envolto por uma membrana celular derivada da atuação de células de defesa do hospedeiro, denominada de membrana adventícia. Logo abaixo dessa camada, protegendo o parasita, forma-se uma membrana laminar acelular denominada de anista, que é derivada do parasita. Internamente existe a membrana prolígera ou germinativa, onde se formam as cápsulas prolígeras, que originam os proto-escóleces.

Dentro do cisto existe a “areia hidática”, formada por escóleces isolados e por fragmentos da membrana e das vesículas prolígeras, imersos no líquido hidático, que contém sais minerais e proteínas. A continuidade do ciclo depende da ingestão de vísceras do hospedeiro intermediário pelo hospedeiro definitivo, por não haver eliminação ou saída de formas evolutivas. Quando os cães se alimentam das vísceras cruas, ingerem o cisto com proto-escóleces, que é liberado no duodeno pela ação de ácidos gástricos e se transforma em verme adulto em 2 meses. Ele vive no intestino dos cães até morrer e ser eliminado (cerca de 4 a 6 meses em média).

Patogenia e sintomatologia clínica

Por ação mecânica, pode haver compressão dos tecidos pelo crescimento do cisto, causando dor abdominal, alteração do sistema porta-hepático levando à estase sanguínea, perturbação do fluxo biliar, crises semelhantes a colelitíase, ascite e distúrbios digestivos variados. Com frequência o hospedeiro desenvolve hipersensibilidade, que provoca crises alérgicas. A ruptura espontânea do cisto em alguns órgãos (pulmão, pleura e abdômen), com a consequente liberação da areia hidática na circulação, pode ocasionar reações anafiláticas, levando-o inclusive ao óbito.

Diagnóstico e controle

O diagnóstico clínico é difícil. Geralmente suspeita-se de manifestações crônicas hepáticas ou pulmonares em hospedeiros oriundos de áreas endêmicas. O diagnóstico laboratorial baseia-se em reações imunológicas e análise por imagens (raios X, tomografia computadorizada e ultrassonografia).

A hidatidose é considerada uma zoonose, cujo principal hospedeiro é o cão, disseminador de ovos do parasita adulto para as várias espécies de hospedeiros intermediários. A transmissão para o homem dá-se normalmente pelo contato íntimo com os cães domésticos. Os felídeos não apresentam importância epidemiológica por não serem bons hospedeiros apesar de vários registros na literatura. As medidas de prevenção incluem a incineração das vísceras de ovelhas ou o cozimento antes de oferecê-las aos cães; o tratamento dos cães parasitados, o manejo de pastagens e o controle de matadouros e de cães errantes. No homem, o tratamento é preferencialmente cirúrgico, com a remoção do cisto. Foram relatados alguns esquemas de tratamento utilizando o albendazol (10 mg/kg) e mebendazol (50 mg/kg) durante longo período de tempo (cerca de 3 meses). Os resultados foram variáveis e, às vezes, controversos (DAYAN, 2003). Essa infecção é mais frequente nos estados do Sudeste e do Sul do País.

Taenia hydatigena (Pallas, 1876)

Representante dos tenídeos, é um parasita encontrado principalmente no intestino delgado de canídeos (outros animais carnívoros podem albergar o adulto), e a forma larvária pode ser encontrada na cavidade peritoneal de ruminantes (caprinos, ovinos e bovinos), roedores e suínos (outros animais, inclusive primatas, também podem albergar o parasita ocasionalmente).

O adulto pode alcançar cerca de 3 m de comprimento podendo atingir 5 m. O escólex é composto de ventosas características, armadas com rostro que contém duas fileiras de acúleos ou ganchos. Em seguida, vêm o colo e as proglótides. A proglótide grávida possui tamanho de 10 mm a 15 mm por 4 mm a 7 mm e apresenta útero ramificado contendo ovos elípticos que medem cerca de 40 µm por 35 µm.

Os ovos do parasita ganham o ambiente junto com as fezes do hospedeiro definitivo, onde podem sobreviver vários meses. Após a ingestão dos ovos pelo hospedeiro intermediário, eles são rompidos no intestino pela ação dos ácidos gástricos, e a oncosfera, depois de atravessar o epitélio intestinal, ganha a corrente sanguínea e alcança o fígado, podendo migrar pelo parênquima hepático. Também pode ocorrer rompimento dos vasos do sistema porta, e a oncosfera pode alcançar a cavidade peritoneal em cerca de 3 ou 4 semanas. Nesse local, o embrião se invagina formando o cisticerco denominado Cysticercus tenuicollis ou bolha d’água, que se desenvolve podendo atingir o diâmetro de cerca de 5 cm. A sobrevivência média no hospedeiro é de poucos meses. O ciclo continua quando o hospedeiro definitivo ingere os cisticercos viáveis em vísceras descartadas ou quando ocorre predação do hospedeiro intermediário.

A patogenia relacionada ao adulto é semelhante àquela descrita para os tenídeos de modo geral. A forma larvária possui importância especial, visto que pode causar problemas em animais jovens infectados. A passagem do embrião pelo parênquima hepático pode causar sangramento e, dependendo da extensão da lesão, o animal pode vir a óbito. Quadros de peritonite são frequentes principalmente em animais jovens, e podem evoluir para ascite. Pouca sintomatologia é observada em infecções tardias, quando o cisticerco já se encontra plenamente desenvolvido.

O diagnóstico é difícil, pois não há quadro característico. Assim, sintomas, como perda de peso, anemia, quadros hemorrágicos detectados em fezes diarreicas, peritonite com aumento da temperatura corporal e ascite, podem sugerir a presença do parasita. No hospedeiro definitivo, podem ser visualizados ovos nas fezes, mas a diferenciação é difícil. Métodos imunológicos específicos têm sido estudados, entre eles o Elisa, um método diagnóstico de elevada sensibilidade que pode ser utilizado no diagnóstico dessa parasitose (DEPLAZES et al., 1990; KARA; DOGANAY, 2005).

Não há recomendações de tratamento cirúrgico ou quimioterápico para os animais portadores do cisticerco. Medicamentos usados para tratamento de outros cestódeos encontrados no hospedeiro definitivo são eficazes para o adulto. O controle dessa parasitose é baseado sobretudo na destruição de vísceras que contenham o cisticerco, de modo que se evite a infecção de cães.

Terapêutica anti-helmíntica convencional: um mal necessário?

Anti-helmínticos são drogas conhecidas como vermicidas ou vermífugos, que atuam destruindo ou expulsando os vermes. O controle da verminose de pequenos ruminantes geralmente é realizado por meio de anti-helmínticos pertencentes a diversos grupos químicos. Na maioria das vezes, são administrados sem levar em consideração os fatores epidemiológicos estabelecidos na área geográfica explorada, fatores esses que podem interferir diretamente na população parasitária de vida livre e, consequentemente, na reinfecção do rebanho (DITTRICH et al., 2004).

Considerando a importância dos endoparasitas gastrintestinais na produção de caprinos e ovinos, o desenvolvimento de estudos que visem a uma melhor terapêutica anti-helmíntica tem apresentado apreciável progresso, sobretudo nas duas últimas décadas e especialmente com a realização de estudos da biologia e da fisiologia dos nematoides.

A utilização de técnicas adequadas para a avaliação do controle da atividade anti-helmíntica, tais como análises de controle de qualidade e teste de resistência, e os aspectos econômicos referentes aos custos dos vermífugos devem ser considerados como forma de viabilizar a descoberta de drogas com maior eficácia terapêutica. As drogas devem ter as seguintes características: ação deletéria sobre os helmintos, boa tolerância pelo hospedeiro, utilização em dose única ou em esquema de curta duração, amplo espectro de ação, aumento na sua distribuição nos tecidos e nos fluidos orgânicos sem afetar a sua integridade, baixo custo e fácil acesso comercial. É fundamental observar o aspecto relacionado à eliminação de resíduos das drogas no ambiente, que podem atuar em organismos de vida livre importantes para manutenção do equilíbrio, bem como a presença dos resíduos no alimento a ser consumido pela população.

Os fármacos anticestódeos, que provocam a morte da tênia in situ, são referidos como tenicidas. Os compostos que causam ou facilitam a expulsão das tênias são denominados tenífugos. Estes fármacos paralisam os cestódeos, mas, se as tênias recuperarem-se antes da expulsão, elas podem fixar-se novamente no intestino do hospedeiro (ADAMS, 2003). Deve-se considerar que o tratamento bem-sucedido contra tênias ocasiona a remoção completa do parasita. Como o colo do cestódeo regenera-se, as drogas que apenas removem as proglótides, mas deixam o escólex intacto, não agem satisfatoriamente.

Entre os compostos considerados mais eficazes contra cestódeos, podem-se destacar o cloridrato de bunamidina, o diclofeno (INN), o hexaclorofeno (15 mg/kg), o resorantel (65 mg/kg), o bitinol (40 mg/kg – 75 mg/kg), a niclosamida (50 mg/kg – 90 mg/kg) e o praziquantel. Existem diferentes classes de antiparasitários, e os compostos apresentam diferentes mecanismos de ação: o bitinol atua melhor nas formas jovens dos parasitas, enquanto o resorantel é bastante eficaz em ambas as fases; já a niclosamida age desregulando o processo de fosforilação oxidativa, paralisando o parasita. Estudos in vitro mostraram que o praziquantel foi rapidamente absorvido pelos cestódeos, tendo como efeito primário a indução de contração tetânica da musculatura e vacuolização rápida do tegumento sincicial, situado na região anterior do estróbilo da tênia. A ação tenicida, mediante o uso dos benzimidazóis (albendazol, mebendazol e flubendazol), sobre as formas adultas e larvárias tem sido relatada por alguns autores, mas os resultados obtidos até o momento são variáveis (ADAMS, 2003; DAYAN, 2003).

A maioria dos produtos disponíveis para o controle das helmintíases não divulga informações técnicas suficientes para a determinação de um esquema de vermifugação estratégico, nem indica os impactos ocorridos no uso contínuo do produto. A utilização da forma iatrogênica dos compostos antiparasitários, aliada à ausência de planejamento epidemiológico estratégico, tem contribuído para o insucesso terapêutico, aumento da resistência e dos gastos com as práticas de controle (ECHEVARRIA et al., 1996; MELO et al., 2003).

Os anti-helmínticos devem ser utilizados apenas de maneira complementar em esquemas de manejo que visem minimizar a utilização das drogas e, ao mesmo tempo, maximizar a produtividade do rebanho (COLES; ROUSH, 1992). Esses esquemas (Tabela 1) devem ser elaborados por profissionais com sólidos conhecimentos sobre a biologia e a epidemiologia dos helmintos.

Tabela 1. Esquema terapêutico de uso em massa para a teníase, com compostos químicos sintéticos adquiridos comercialmente no Brasil.

Composto

Dose
(mg/kg)

Esquema de administração

Via de administração

Espectro de ação anticestódeos

Niclosamida

75

Dose única

Oral

Echinococcus granulosus

Moniezia benedeni

Moniezia expansa

Taenia hidatigena

Albendazol

5–10

Dose múltipla

Enteral

Praziquantel

10–30

Dose única

Enteral

Clorossalicilamida

10

Dose única

Enteral

Fonte: Adaptada de Adams (2003).

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Capítulo 5
Eimeriose

Luiz da Silva Vieira
Ana Carolina de Souza Chagas

Introdução

A eimeriose ou coccidiose é uma doença infecciosa causada por protozoários coccídios monoxenos do gênero Eimeria, que ocorre principalmente em animais jovens de várias espécies. A doença é caracterizada por alterações intestinais, diminuição do apetite, retardo no desenvolvimento corporal e morte (LEVINE, 1973). Essa protozoose tem distribuição mundial e parasita pequenos ruminantes submetidos aos mais diferentes sistemas de manejo; porém, é mais frequente e assume maior gravidade em animais confinados, mantidos em áreas com alta densidade populacional, sendo muito comum em rebanhos caprinos produtores de leite e em cordeiros confinados para engorda (FREITAS et al., 2005). Em condições naturais, os animais podem infectar-se logo após o nascimento e são usuais os casos de eimeriose em caprinos e ovinos de 1 a 3 meses de idade. Em rebanhos caprinos da Jordânia, a eimeriose clínica é muito comum no inverno, quando os animais são confinados em alta densidade por causa da escassez de forragem para pastejo (ABO-SHEHADA; ABO-FARIEHA, 2003).

A infecção por eimeriídeos é autolimitante; logo após o parasita completar o seu ciclo evolutivo, isto é, com a formação dos oocistos, rompimento da célula parasitada e liberação desses estágios evolutivos para a luz do trato gastrintestinal, a infecção extingue-se e, consequentemente, o hospedeiro recupera-se. A chamada cura espontânea dos animais ocorre porque os oocistos não esporulados, liberados na luz intestinal, não infectam o hospedeiro. Entretanto, em virtude da alta contaminação ambiental, os animais são constantemente expostos aos oocistos esporulados, que são as únicas formas infectantes (BONFIM; LOPES, 1994).

A importância da eimeriose deve-se às perdas econômicas decorrentes da mortalidade de animais jovens e, principalmente, ao baixo desempenho dos que se recuperam da doença. Os animais que sobrevivem à infecção necessitam de tempo adicional para atingir peso igual (ganho compensatório) ao daqueles não infectados, da mesma idade e mantidos nas mesmas condições de manejo. Segundo Fitzgerald (1980), a queda na produtividade representa às vezes maior prejuízo econômico do que a própria mortalidade, que raramente ultrapassa 10% do rebanho infectado (HOWARD, 1986). Calculou-se que os prejuízos econômicos com a eimeriose em rebanhos ovinos podem chegar a 140 milhões de dólares anuais em todo o mundo (FITZGERALD, 1980).

Etiologia

A eimeriose dos pequenos ruminantes é causada por diferentes espécies do gênero Eimeria, que variam de acordo com o hospedeiro, e os eimeriídeos têm sido encontrados em todas as regiões estudadas. Abo-Shehada e Abo-Farieha (2003) realizaram um amplo levantamento dos estudos abordando a frequência e a prevalência de Eimeria sp. nas criações de caprinos em todo o mundo. Muitos estudos foram realizados com pequenos ruminantes no Brasil a partir da década de 1990, indicando a prevalência de várias espécies do gênero Eimeria em muitos estados do País. Em pesquisa realizada em caprinos leiteiros criados intensivamente na região de São José do Rio Preto, SP, encontrou-se elevada ocorrência de Eimeria ninakohlyakimovae (77,6%), Eimeria joklchijevi (72,4%), Eimeria alijevi (63,8%), Eimeria christenseni (63,8%), Eimeria arloingi (62,1%), Eimeria caprovina (56,9%), Eimeria hirci (50,0%) e Eimeria caprina (48,3%) (FREITAS et al., 2005). Os trabalhos concentram-se especialmente no Nordeste (BARRA, 2000; MARTINS FILHO; MENEZES, 2001; SANTOS et al., 1997; JULIÃO et al., 1999; VIEIRA et al., 1999) e no Sudeste (BONFIM; LOPES, 1994; HASSUM; MENEZES, 1999, 2005; HASSUM et al., 2002; MENEZES et al., 2001; REBOUÇAS et al., 1992; TEIXEIRA FILHO et al., 2001).

Embora os ovinos e caprinos sejam parasitados por várias espécies de Eimeria, poucas delas são consideradas patogênicas e associadas ao quadro clínico da doença, como no caso de E. ninakohlyakimovae (DAI et al., 2006; VIEIRA et al., 1999). Geralmente a parasitose apresenta-se na forma subclínica e possui elevada morbidade nos rebanhos. A infecção por eimeriídeos é normalmente multiespecífica, entretanto, apesar de existir semelhança morfológica dos oocistos das espécies parasitas de caprinos e ovinos, é comum uma estreita especificidade pelo hospedeiro (FOREYT, 1990). As espécies mais frequentes em caprinos e ovinos, observadas em diversos sistemas de criação no Brasil, são apresentadas na Tabela 1.

Tabela 1. Espécies de Eimeria parasitas de caprinos e ovinos no Brasil.

Caprinos

Ovinos

E. christenseni

E. ashata

E. hirci

E. crandallis

E. arloingi

E. ovina

E. ninakohliakimovae

E. ovinoidalis

E. alijevi

E. parva

E. jolchijevi

E. granulosa

E. apsheronica

E. faurei

E. caprovina

E. caprovina

E. caprina

E. minasensis

Fonte: Silva (1998).

Abo-Shehada e Abo-Farieha (2003) afirmam que infecções mistas por diferentes espécies de Eimeria têm sido mais observadas em ovinos do que em caprinos. Conforme os estudos de Reeg et al. (2005) em ovinos, a prevalência de determinadas espécies de Eimeria está diretamente relacionada com a idade do animal infectado. Oocistos de Eimeria granulosa, por exemplo, só foram encontrados em animais com mais de 49 dias de vida; já, oocistos de Eimeria ovinoidalis representam em média 70% dos oocistos excretados por animais de 17 a 40 dias de idade. Esse número reduz gradativamente até os oocistos de Eimeria parva tornarem-se predominantes nos animais com 80 a 100 dias de idade. Aparentemente essa variação na eliminação de oocistos para cada espécie de Eimeria está diretamente relacionada com a imunidade espécie-específica, que se desenvolve muito cedo no animal. Trabalhos têm demonstrado que existe influência genética sobre a excreção de oocistos em ovelhas da raça Merino com idade superior a 60 dias, indicando elevada herdabilidade. Não há indicação de que os anticorpos maternos promovam proteção em animais jovens (REEG et al., 2005).

Biologia e ciclo biológico

A evolução das espécies de Eimeria que parasitam os pequenos ruminantes processa-se em três fases distintas de desenvolvimento: esporogônica, merogônica e gametogônica. Os oocistos esporulados são ingeridos pelo hospedeiro com a água e os alimentos contaminados. No intestino delgado, os oocistos rompem-se liberando os esporocistos e estes liberam os esporozoítos, que são as formas infectantes. Na fase merogônica, os esporozoítos atravessam a camada epitelial do intestino delgado e penetram nas células dos vasos quilíferos das vilosidades intestinais, onde se arredondam, crescem e se multiplicam assexuadamente por um processo denominado merogonia, dando origem aos merozoítos de primeira geração. Os merozoítos de primeira geração penetram nas células epiteliais das glândulas intestinais e iniciam um novo processo de multiplicação assexuada, denominado merogonia secundária, em que dão origem aos merontes secundários, que, quando maduros, se rompem, liberando os merozoítos de segunda geração. A fase gametogônica inicia-se quando os merozoítos de segunda geração penetram nas células epiteliais da mucosa intestinal, resultando na formação de macrogametas e microgametas. Após a fecundação, forma-se o ovo ou zigoto, que dá origem aos oocistos, que são liberados na luz do trato gastrintestinal após a ruptura da célula parasitada, sendo em seguida eliminados para o meio ambiente junto com as fezes, onde ocorre a esporulação (LEVINE, 1973), Figura 1.

Figura 1. Ciclo biológico de Eimeria sp.

Ilustração: Raymundo Rizaldo Pinheiro

Segundo Vieira et al. (1997), grande parte do conhecimento sobre o ciclo evolutivo desses protozoários refere-se à presença de estádios endógenos em animais infectados natural ou experimentalmente. A identidade desses protozoários é geralmente atribuída às espécies correspondentes aos oocistos encontrados nas fezes. Conforme Silva e Lima (2000), pelo menos 17 espécies de Eimeria são consideradas parasitas de caprinos, mas é desconhecido o ciclo de vida completo da maioria dos eimeriídeos de ruminantes.

Para que ocorra a esporulação dos oocistos no meio ambiente, é necessário que haja boas condições de temperatura, umidade e oxigenação. Os oocistos esporulados de Eimeria apresentam quatro esporocistos, e cada um deles tem no seu interior dois esporozoítos, por isso são denominados oocistos do tipo tetraspóricos dispóricos (Figura 2). Em condições climáticas favoráveis, tais como umidade elevada e baixa temperatura, os oocistos têm capacidade de sobreviver por vários meses no meio ambiente. Eles são destruídos pela dessecação, luz solar direta e calor (PARQUER; JONES, 1990), entretanto, são resistentes à maioria dos desinfetantes comerciais.

Figura 2. Oocistos esporulados de Eimeria minasensis de caprinos (A); oocistos tipo tetraspóricos dispóricos (B). PE = parede externa, PI = parede interna, CM = capuz micropilar.

Fonte: Silva (1998).
Fotos: Andréa Caetano da Silva

Epidemiologia

Os animais jovens, especialmente até 8 meses de idade, são os mais susceptíveis à infecção por eimeriídeos e, geralmente, apresentam os sinais mais acentuados da protozoose. A mortalidade também é maior nessa faixa etária. Os animais adultos que sofreram a parasitose quando jovens podem desenvolver imunidade não completa contra as espécies que os infectaram e continuar eliminando oocistos. Esses animais serão a principal fonte de contaminação ambiental e de disseminação da doença. Agyei et al. (2004) observaram que em caprinos de Gana, na África Ocidental, a excreção de oocistos diminuiu significativamente e tornou-se mínima naqueles com idade próxima a 1 ano. Como a imunidade adquirida não é absoluta, os animais adultos podem manifestar sintomatologia clínica sob condições de estresse (VIEIRA, 1996). Silva e Lima (2000) verificaram que os caprinos adultos são mais susceptíveis a E. minasensis e os jovens a E. christenseni e E. ninakohliakimovae.

O sistema de produção é um fator importantíssimo para a ocorrência da infecção, para o nível dela nos animais e para as características clínicas da doença. Em criações intensivas, a protozoose é mais frequente e apresenta-se com gravidade mais acentuada, por causa da manutenção do agente e do contato constante. Fernández et al. (2006) observaram que caprinos da raça Pardo Alpina, criados em sistema intensivo, apresentaram elevados níveis de infecção por Eimeria até o 3º mês de idade e por nematoides gastrintestinais do 2° ao 12° mês, ocasionando hiperproteinemia por hiperalbuminemia, sem alterações nas outras bandas do perfil eletroforético. No trabalho realizado por Bonfim e Lopes (1994), foram encontradas quatro espécies de Eimeria no sistema extensivo, em relação às sete espécies prevalentes nos sistemas de criação intensivo e semi-intensivo (Tabela 2).

Tabela 2. Prevalência (%) média das espécies do gênero Eimeria, de acordo com o sistema de criação, em 60 caprinos amostrados da Região Serrana do Estado do Rio de Janeiro.

Espécie

Intensivo

Semi-intensivo

Extensivo

E. arloingi

35,3

22,3

21,9

E. christenseni

12,3

15,9

34,7

E. caprovina

6,8

9,1

0,0

E. hirci

17,8

17,7

22,1

E. ninakohlyakimovae

16,8

18,9

21,3

E. alijevi

7,6

9,2

0,0

E. pallida

3,4

6,9

0,0

Fonte: Adaptado de Bonfim e Lopes (1994).

A precipitação pluviométrica é uma variável importante na epidemiologia da doença. Em um experimento realizado com bezerros submetidos a pastejo rotacionado no Rio Grande do Sul, observou-se número crescente médio de oocistos por grama de fezes (OPG) de Eimeria spp., o que demonstra elevada correlação desses com a precipitação (mm3) medida durante o período experimental. Assim, para precipitação de 0,30 mm3: 47,5 OPG; para 34,6 mm3: 235,0 OPG; para 53,7 mm3: 447,5 OPG; e para 125,8 mm3: 962,0 OPG. Já a temperatura não demonstrou ser um fator estatisticamente determinante nesse estudo (HECK et al., 2005).

Verifica-se que a influência das variáveis climáticas depende da região de estudo. Nahed-Toral et al. (2003) constataram que tanto a temperatura quanto a precipitação pluviométrica estavam diretamente relacionadas com a prevalência de Eimeria sp. (r = 0.80) em ovelhas criadas extensivamente no México. Faizal et al. (1999) demonstraram que caprinos infectados com diferentes espécies de Eimeria ganharam 3 kg de peso vivo a mais do que o grupo não tratado com o coccidiostático toltrazuril, durante a estação chuvosa no Sri Lanka. Entretanto, segundo Nahed-Toral et al. (2003), isso é relativo e depende da disponibilidade de pasto de boa qualidade. No final da primavera, durante o verão e o início do outono, que são os meses com maior quantidade de chuva, os animais conseguem recuperar o peso perdido na seca com a ingestão de maior quantidade de forragem disponível. Isso promove uma melhor condição nutricional dos animais, deixando-os mais tolerantes às parasitoses. De acordo com os autores, no inverno a altura da forragem pode ser baixa, assim os animais são obrigados a se alimentar muito rente ao solo, favorecendo a ingestão de oocistos infectantes.

Conforme Hassum e Menezes (2005), a eliminação de oocistos de caprinos, na região do Rio de Janeiro, estava relacionada ao estado fisiológico dos animais e às variações climáticas com ação na qualidade da pastagem. Já, em reprodutores ovinos, a eliminação de oocistos não foi relacionada primariamente à libido, e sim, indiretamente, às variações climáticas que ocorreram durante as estações. Os autores observaram que, durante a estação de monta, ocorreram picos de eliminação de oocistos pelos animais, já que o cio pode causar estresse nos machos e nas fêmeas, e isso interfere no estado fisiológico. Os ovinos jovens e as ovelhas gestantes e lactantes eliminaram maiores quantidades de oocistos; aqueles, em virtude da primeira infecção e do desmame; e estas, por causa do estado fisiológico, da baixa qualidade das forrageiras e do desconforto térmico provocados pelo período seco e pelo frio intenso.

As instalações e utensílios utilizados para a criação de animais têm grande importância na epidemiologia da doença. Bebedouros e comedouros localizados dentro das instalações e não lavados rotineiramente favorecem o aparecimento da eimeriose, visto que são facilmente contaminados pelas fezes dos animais doentes.

Patogenia, lesões e sinais clínicos

A patogenia causada pelos coccídios é decorrente das alterações e modificações provocadas pelos parasitas nos tecidos dos hospedeiros. As células parasitadas alteram-se com o crescimento dos parasitas e são destruídas, formando áreas de microulcerações com consequentes hemorragias (RYLEY, 1980). As alterações dependem das espécies de Eimeria sp. presentes na infecção, da localização delas e do grau de destruição dos tecidos.

Macroscopicamente, veem-se espessamento, edema, hemorragia e hiperemia da mucosa do intestino delgado e/ou grosso, dependendo de onde as formas gametogônicas se desenvolvem (Figura 3). Os linfonodos mesentéricos geralmente estão aumentados de volume, principalmente o íleo-cecal. As lesões histológicas principais consistem de hemorragia, hiperemia, edema e necrose. Essas alterações são causadas principalmente pelos estágios gametogônicos e pela formação de oocistos. O infiltrado inflamatório geralmente está presente e consiste de plasmócitos, linfócitos, macrófagos e leucócitos polimorfonucleares (VIEIRA et al., 1996).

Figura 3. Lesões macroscópicas na mucosa do duodeno (D) e jejuno (J) em caprino naturalmente infectado com Eimeria sp.; íleo (I) sem alterações.

Foto: Janete Santa Rosa

Segundo Dai et al. (2006), E. ninakohliakimovae provoca diarreia de gravidade variada em caprinos, a qual está associada à redução da atividade da fosfatase alcalina e ao aumento do hematócrito e, consequentemente, da hemoglobina, em razão da hipovolemia. Histologicamente, há enterite proliferativa do intestino delgado e grosso. Os nódulos linfáticos da cadeia mesentérica, da vesícula biliar e do fígado também apresentaram lesões histológicas significativas.

O resultado da infecção por eimeriídeos, tratando-se de espécies patogênicas, pode variar de morte súbita, em animais altamente susceptíveis, a uma discreta reação em animais imunes. A mortalidade também pode ser dependente da espécie de Eimeria, do nível de infecção e da idade (HOWARD, 1986). Quando aparecem os sinais clínicos, os animais infectados apresentam fezes diarreicas de coloração escura e, às vezes, com presença de muco e sangue (Figura 4), desidratação, perda do apetite, debilidade orgânica generalizada e perda de peso. Rahman (1994) verificou que, em caprinos altamente infectados por Eimeria spp., a liberação de maior quantidade de ovos de nematoides gastrintestinais e o crescimento lento indicam que a infecção por Haemonchus contortus se tornou mais grave.

Figura 4. Fezes diarreicas, com presença de muco e sangue, de caprino infectado experimentalmente com E. ninakohliakimovae.

Foto: Luiz da Silva Vieira

Diagnóstico

O diagnóstico da doença, com base somente nos sinais clínicos, é de difícil interpretação, pois não é patognômico, visto que os sinais podem ser confundidos com os de verminose, em especial com os causados por Tricostrongylus colubriformis. Portanto, recomenda-se que seja realizado o exame coprológico dos animais acometidos, já que os oocistos são facilmente visualizados. O histórico do rebanho, idade dos animais e precipitação pluviométrica na região da propriedade também devem ser considerados.

Para identificar as espécies do gênero Eimeria que parasitam pequenos ruminantes, os oocistos devem ser colocados para esporular em bicromato de potássio a 2,5%. Após a esporulação, por um período aproximado de 5 dias, os oocistos são concentrados e flutuados por centrifugação em solução saturada de açúcar e, em seguida, observados morfologicamente em microscópio óptico. As espécies são identificadas com base nas características morfológicas – mensuração dos oocistos esporulados e dos esporocistos – (micrometria) e nas relações comprimento-largura (índice morfométrico) dos oocistos e dos esporocistos (LEVINE, 1973) (Tabela 3).

Tabela 3. Tamanho médio (+ erro padrão) dos oocistos, esporocistos e capuz micropilar das espécies do gênero Eimeria parasitas de caprinos no Município de Mossoró, Rio Grande do Norte.

Espécie

Oocisto

Esporocisto

Capuz

Diâmetro polar

Diâmetro equatorial

Índice morfométrico

Diâmetro polar

Diâmetro equatorial

Índice morfométrico

Altura

Largura

Com capuz micropilar

E. arloingi (100)

30,24±0,149

21,15±0,081

1,43±0,014

14,76±0,148

8,28±0,083

1,79±0,018

2,99±0,03

7,37±0,074

E. christensen (100)

39,12±0,729

39,12±0,729

25,84±0,457

15,94±0,133

9,83±1,01

1,63±0,013

3,44±0,047

7,87±0,07

E. hirci (100)

25,08±0,184

20,63±0,13

1,22±0,008

11,82±0,112

7,99±0,075

1,51±0,018

1,80±0,169

4,80±0,06

E. jolchijevi (100)

34,06±0,381

24,61±0,264

1,39±0,008

15,9±0,21

8,90±0,12

1,79±0,014

2,93±0,054

8,51±0,129

Sem capuz micropilar

E. alijevi (100)

17,03±0,091

15,95±0,078

1,07±0,004

10,34±0,09

6,65±0,067

1,56±0,016

–

–

E. apsheronica (100)

32,05±0,323

24,62±0,147

1,30±0,013

15,89±0,17

9,76±0,083

1,63±0,021

–

–

E. caprina (100)

25,3±0,206

21,99±0,126

1,40±0,008

14,69±0,12

8,35±0,067

1,77±0,017

–

–

E. caprovina (100)

30,29±0,193

22,70±0,164

1,34±0,016

14,18±0,13

8,73±0,073

1,71±0,017

–

–

E. ninakohlyakimovae

23,98±0,266

19,34±0,195

1,20±0,01

12,7±0,142

6,91±0,078

1,84±0,012

–

–

Fonte: Barra (2000).

Tratamento

Os benefícios são grandes quando o tratamento é realizado no início da infecção, antes que danos severos ocorram no intestino. Entretanto, nenhuma droga é capaz de controlar a eimeriose depois que os sinais clínicos da doença já tenham aparecido (PLATZER et al., 2005).

Para que apresente eficácia, o tratamento preventivo é recomendado para rebanhos criados em regime de confinamento e deve ser iniciado logo após a exposição dos animais aos oocistos esporulados. Em caprinos leiteiros, é necessário que a medicação profilática, à base de antibióticos ionóforos, seja iniciada duas semanas após o nascimento. Essa prática é importante, uma vez que a eliminação de oocistos mantém-se baixa e os animais, além de não apresentarem sintomatologia clínica, principalmente diarreia, têm bom desenvolvimento ponderal (VIEIRA et al., 2004).

Os coccidiostáticos podem ser administrados aos animais junto com a água, o leite ou a ração, embora seja difícil medir a quantidade ingerida por cada animal (VIEIRA et al., 2005). Entre as drogas recomendadas para o tratamento profilático da eimeriose, as mais utilizadas são os antibióticos ionóforos (salinomicina, monensina e lasalocida) – Tabela 4. Esses produtos, além de coccidiostáticos inespecíficos, funcionam também como promotores de crescimento (PARAI, 1985; PATIL et al., 1996). Platzer et al. (2005) demonstraram que o tratamento com dose única de diclazuril (1 mg/kg) apresentou bons resultados no controle da eliminação de oocistos e na recuperação de ovelhas produtoras de leite na Áustria. Do dia 7 ao dia 21 do estudo, houve redução da taxa de eliminação total de oocistos, nos animais tratados em relação ao grupo controle, para as seguintes espécies patogências: Eimeria ovinoidalis, Eimeria bakuensis, Eimeria weybridgensis, Eimeria crandallis e Eimeria ahsata.

Tabela 4. Compostos recomendados para tratamento e prevenção da eimeriose em caprinos e ovinos.

Tratamento curativo

Composto

Dose (mg/kg)

Período

Amprolio

25–50

5 a 10 dias

Sulfaquinoxalina

8–70

5 dias

Tratamento preventivo

Composto

Dose (mg/kg)

Período

Decoquinato

0,5

28 dias

Lasalocida

1

6 semanas

Monensina

1

fases de cria e recria

Salinomicina

1

fases de cria e recria

Fonte: Lima (1980), Vieira et al., (2004, 2005).

Vieira et al. (2004) observaram que, em cabritos leiteiros nas fases de cria e recria, a salinomicina nas doses de 1 mg/ kg e 2 mg/kg, administrada no leite e na ração, apresentou bons resultados, tanto em termos de ganho de peso como de redução dos níveis de infecção parasitária (Tabela 5).

Tabela 5. Médias (± erro padrão) referentes ao ganho de peso, número de OPG e rendimento de carcaça em caprinos submetidos ao tratamento preventivo com salinomicina, nas fases de cria e recria.

Variável

Controle

Salinomicina (1 mg/kg)

Salinomicina
(2 mg/kg)

Ganho de peso (g/dia)

Fase de cria

100,2 ± 5,2

105,1 ± 5,2

111,4 ± 5,2

Fase de recria

46,9 ± 10,1

103,8 ± 10,1

118 ± 10,1

OPG nas fezes(1)

Fase de cria

11,433 ± 6,318

344 ± 189

44 ± 19

Fase de recria

28,209 ± 6917

718 ± 112

248 ± 83

Rendimento de carcaça (%)

42,6 ± 0,7

46,6 ± 0,7

45,8 ± 0,7

(1)OPG, dados transformados para Log(OPGx0,02 + 4,5).

Fonte: Vieira et al. (2004).

Vieira et al. (2005) avaliaram a monensina sódica na dose de 0,5 mg/kg, oferecida na ração para caprinos leiteiros da raça Anglo Nubiana e Saanen na fase de recria. Houve diferença estatística (P<0,05) entre as médias gerais de OPG do grupo controle (1.312,54±98,8) e do grupo tratado (641,31±98,7). Também houve diferença estatística entre as médias dos quadrados mínimos dos pesos dos animais ao final do experimento. Dentro da raça Anglo Nubiana, o grupo controle apresentou peso de 15,81 kg (±0,28) e o grupo tratado de 20,17 kg (±0,21).

Os animais que mostram sinais clínicos característicos de eimeriose, principalmente diarreia, devem ser isolados e medicados individualmente com quimioterápicos. Isso contribuirá para reduzir a contaminação ambiental e a infecção dos demais animais do rebanho. Além da medicação coccidiostática, a desidratação do animal infectado deve ser controlada e, quando necessário, devem ser administrados antibióticos específicos para controlar as infecções secundárias, como as complicações respiratórias que são frequentes (LIMA, 1980).

Controle

As medidas sanitárias e de manejo são as mais importantes no controle da doença. Elas visam impedir ou diminuir a ingestão de oocistos esporulados pelos animais, que devem permanecer em instalações limpas e secas. Os bebedouros e comedouros devem ficar fora da área interna das baias, de forma que se evite a contaminação por fezes. A limpeza das instalações deve ser feita diariamente, com varredura e lavagem, de preferência com água sobre pressão. Para total desinfecção pode-se utilizar lança-chamas (vassoura de fogo). Isso é muito importante, uma vez que os oocistos resistem à maioria dos desinfetantes comerciais. Berne et al. (1988) avaliaram o efeito de desinfetantes do grupo dos fenóis a 5% e 10%, iodophor a 1% e 2%, hipoclorito de sódio a 5% e 10%, formoaldeído P.A. (37%) a 5% e 10%, e água clorada comercial a 12,5% e 25%, na esporulação de oocistos de caprinos naturalmente infectados. Os autores verificaram que apenas o grupo dos fenóis nas concentrações de 5% e 10% foi totalmente eficaz na inibição do processo de esporulação.

Os animais adultos desenvolvem imunidade para as espécies com as quais eles foram infectados quando jovens. No entanto, como a imunidade não é completa, eles eliminam frequentemente oocistos no meio ambiente. Dessa forma, animais jovens devem ser mantidos em instalações separadas das dos adultos. Em rebanhos de caprinos leiteiros, os cabritos recém-nascidos devem ser separados das mães 24 horas após o nascimento e devem ser aleitados artificialmente. A disseminação e o aumento dos níveis de infecção por Eimeria são facilitados pela concentração de grande número de animais em pequenas áreas. Assim, como medida adicional de controle, recomenda-se evitar superlotação (VIEIRA, 2002).

Considerações finais

É importante destacar que a presença de infecção por Eimeria spp. em pequenos ruminantes é um fator limitante para o sistema produtivo, principalmente pelo fato de ocorrer infecção simultânea com H. contortus. Particularidades de cada propriedade devem ser consideradas, observando o estado fisiológico e nutricional dos animais, a aglomeração de animais de diferentes faixas etárias e a estação do ano. Desse modo, o conhecimento das questões básicas relacionadas à eimeriose e sua epidemiologia pode ser utilizado no manejo preventivo dos animais.

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Capítulo 6
Criptosporidiose

Márcia Benedita Oliveira Silva

Histórico e importância

Tyzzer (1907) descreveu pela primeira vez o gênero Cryptosporidium, para designar um protozoário que frequentemente parasita a mucosa gástrica de camundongos de laboratório. O autor reconheceu as formas de reprodução do parasita, assexuada e sexuada, as quais são seguidas da formação do que ele chamou de esporos (oocistos), que, diferentemente dos demais coccídios já descritos, não possuíam esporocistos contendo esporozoítos. Três anos mais tarde descreveu a forma de transmissão fecal desse protozoário, cujos esporos contaminam alimentos, e classificou-o taxonomicamente como Cryptosporidium muris. Posteriormente, em 1912, o mesmo autor observou, no intestino delgado de camundongos, oocistos menores do que os descritos anteriormente, medindo de 1 µm a 6 µm de diâmetro e, após estudos de inoculação nesses camundongos, concluiu que essa espécie era distinta do C. muris e a descreveu como Cryptosporidium parvum (O’DONOGHUE, 1995).

Durante os 70 anos seguintes, espécies de Cryptosporidium foram descritas em uma variedade de hospedeiros vertebrados. Em revisão feita por Tzipori (1998), o autor relata que, até 1998, o parasita havia sido descrito em 15 espécies diferentes de vertebrados, inclusive no homem, em muitos casos associado a infecção com sinais clínicos, sendo os mais comuns a diarreia, em mamíferos, e os distúrbios respiratórios, em aves.

A importância da patogenia do parasita permaneceu indefinida até 1955, quando Slavin (1955) descreveu a infecção, no intestino de perus, por uma nova espécie, denominada Cryptosporidium meleagridis, em associação com a doença clínica caracterizada por diarreia severa. Interesse maior ocorreu a partir de 1971 com a vinculação do Cryptosporidium à diarreia em bezerros. O primeiro caso de criptosporidiose humana foi descrito em 1976 e, a partir disso, esse protozoário adquiriu importância por ser reconhecido como agente causador de surtos de diarreia prolongada em pacientes imunossuprimidos, especialmente aqueles com Aids. Além desse fato, a associação do Cryptosporidium a vários surtos de diarreia humana por ingestão de água contaminada tem dado ao parasita maior reconhecimento mundial. Isso tem encorajado a pesquisa científica do Cryptosporidium em vários domínios, inclusive no campo veterinário, uma vez que os animais domésticos, principalmente bovinos, caprinos e ovinos, têm sido considerados fonte de infecção para humanos pela eliminação de grandes quantidades de oocistos resistentes em águas superficiais (O’DONOGHUE, 1995).

A zoonoze criptosporidiose tem sido economicamente significativa em rebanhos de ruminantes neonatos e na pré-desmama pelo estresse. C. parvum é o enteropatógeno mais comum durante as primeiras semanas de vida de bezerros, cordeiros e cabritos, e é um relevante agente na etiologia da síndrome diarreica neonatal. O parasita costuma agir sozinho, mas as perdas são mais pronunciadas quando em associação com outros enteropatógenos. Perdas econômicas, em rebanhos de pequenos ruminantes, relacionadas com criptosporidiose são traduzidas por retardo de crescimento e mortalidade, bem como por despesas com intervenções medicamentosas em virtude de problemas de diarreia neonatais.

Taxonomia e classificação

O gênero Cryptosporidium tem sido classificado dentro do filo Apicomplexa, possui complexo apical (LEVINE, 1970) e todas as espécies são protozoários parasitas intracelulares obrigatórios, com desenvolvimento endógeno que culmina na produção de formas encistadas denominadas oocistos, os quais são liberados pelo rompimento das células epiteliais do intestino delgado, chegando ao ambiente com as fezes do hospedeiro. Para a maioria das espécies desse filo, o estádio de oocisto é de grande importância para a dispersão, sobrevida e infectividade do parasita. É também, o estádio mais significativo para a detecção do parasita e identificação das espécies.

O Cryptosporidium pertence à classe Sporoazida (reproduz-se por ciclo assexuado e sexuado, com formação de oocisto), subclasse Coccidiasina (ciclo de vida que envolve merogonia, gametogonia e esporogonia), ordem Eucoccidiorida (ocorrência de esquizogonia), subordem Eimeriorina (desenvolvimento em células, independentemente de microgametas e macrogametas) e família Cryptosporidiidae (TYZZER, 1907), neste último caso por apresentar oocisto com quatro esporozoítos, sem esporocisto.

A subdivisão do gênero Cryptosporidium em espécies foi, por muitas décadas, realizada de acordo com o hospedeiro em que eram encontradas, a morfologia dos oocistos e suas estruturas internas e a localização dentro do hospedeiro.

Segundo Fayer et al. (2000), para gêneros semelhantes a Caryospora, Cyclospora, Eimeria, Isospora, Sarcocystis e Toxoplasma, características biológicas (incluindo especificidade de hospedeiro), combinadas com o tamanho e conformação dos oocistos e das estruturas internas deles (que consiste de esporocistos e esporozoítos), permitem aos especialistas a identificação de muitas espécies. Diferenças no tamanho ou nas estruturas internas dos oocistos podem ser vistas com microscopia comum ou de alta resolução. Entretanto, apesar de a avaliação morfométrica ser uma boa ferramenta – frequentemente utilizada na identificação de espécies dentro do filo Apicomplexa –, dificuldades podem ocorrer quando o tamanho dos oocistos e a sua configuração ou suas estruturas internas não são características suficientes para distingui-lo de outras espécies. No caso do Cryptosporidium, o uso exclusivo dessas ferramentas não tem sido conclusivo, uma vez que os oocistos são relativamente pequenos, medem de 4 µm a 6 µm, apresentam conformação esférica e possuem estruturas internas de difícil visualização à microscopia comum, com pouca ou nenhuma diferença morfométrica que distinga as espécies (FAYER et al., 2000).

A parede dos oocistos possui antígenos que facilitam a sua identificação nas fezes por meio de técnicas de imunodiagnóstico. No entanto, muitos desses antígenos são conservados dentro do gênero Cryptosporidium e aparecem em várias espécies; assim, tornam difícil a utilização de anticorpos específicos para diferenciar espécies (FAYER et al., 2000; TZIPORI; WARD, 2002).

A análise enzimática e de ácidos nucleicos de esporozoítos dentro dos oocistos tem promovido outro meio de identificar espécies e subespécies de Cryptosporidium. Contudo, a classificação de espécies baseada apenas em diferenças enzimáticas e moleculares também não tem sido suficiente (FAYER et al., 2000).

Características biológicas clássicas, semelhantes à especificidade de hospedeiro utilizado para identificar outras espécies do filo Apicomplexa, têm ajudado no reconhecimento do gênero Cryptosporidium, mas essas determinações requerem alto custo e tempo, além de grandes quantidades de oocistos e uma variedade de espécies de hospedeiros potencialmente susceptíveis (TZIPORI; WARD, 2002).

Atualmente, estudos com base na combinação de critérios morfométricos, especificidade de hospedeiro e análise de DNA reconhecem apenas 13 espécies dentro do gênero Cryptosporidium, conforme apresentado na Tabela 1 (FAYER et al., 2000; MONIS; THOMPSON, 2003).

Tabela 1. Espécies de Cryptosporidium aceitas com base na morfologia e especificidade do hospedeiro.

Espécie

Tipo de hospedeiro

Tamanho do oocisto
Comprimento (μm)

Tamanho do oocisto
Largura (μm)

C. canis

Cão

Humanos

3,7 – 5,9

3,7 – 5,9

C. hominis

Humanos

4,4 – 5,4

4,4 – 5,9

C. molnari

Peixe marinho

3,3 – 5,5

3,0 – 5,0

C. felis

Gato

Humanos

3,2 – 5,1

3,0 – 4,0

C. parvum

Camundongo

Bovino

Humanos

Suíno

Ovino

Caprino

Equino

4,5 – 5,4

4,2 – 5,0

C. muris

Camundongo

6,6 – 7,9

5,3 – 6,5

C. wrairi

Cobaio

4,8 – 5,6

4,0 – 5,0

C. andersoni

Camelo e bovino

6,0 – 8,1

5,0 – 6,5

C. meleagridis

Peru

Humanos

4,5 – 6,0

4,2 – 5,3

C. baileyi

Galinha

5,6 – 6,3

4,5 – 4,8

C. serpentis

Cobra

5,6 – 6,6

4,8 – 5,6

C. saurophilum

Lagarto

Cobra

4,4 – 5,6

4,2 – 5,2

C. nasorum

Peixes

3,5 – 4,7

2,5 – 4,0

Fonte: adaptado de Fayer et al., (2000) e Monis e Thompson (2003).

Estudos moleculares têm promovido consideráveis evidências da heterogeneidade genética dentro dos isolados de Cryptosporidium de diferentes espécies de vertebrados, com existência de uma série de genótipos/espécies de parasitas que se tornam gradualmente adaptados a um grupo particular de animais e assim desenvolvem alguma especificidade de hospedeiro. Entre esses se incluem os genótipos de ganso, pato, suíno, gambá, furão, de bovino B e de C. canis encontrados em raposas e coiotes, todos previamente considerados C. parvum (KOSEK 2001; MORGAN et al., 1999; WIDMER 2004).

Apoiados nessa heterogeneidade genética e nas diferenças biológicas, Morgan-Ryan et al. (2002) propuseram a subdivisão de C. parvum em duas espécies, C. hominis e C. parvum, para representar as designações de genótipos tipo 1 e tipo 2. A primeira é considerada antroponótica, ocorre apenas no homem, e a segunda, zoonótica, infecta o homem e uma variedade de mamíferos.

Morfologicamente os oocistos de C. hominis e C. parvum são indistinguíveis, ambos medem 4,4 µm a 5,4 µm. Os oocistos de C. hominis podem infectar suínos neonatais, cordeiros e peixe-boi; já os de C. parvum, camundongos, ratos, cães, gatos e bezerros (WIDMER, 2004). Os oocistos de C. hominis são também conhecidos por apresentar maior crescimento em cultivos celulares (células HCT-8), maior número de estádios, maior duração do ciclo de vida e maior período de eliminação do que os de C. parvum (FAYER et al., 2000, WIDMER, 2004).

Ciclo de vida

O ciclo do Cryptosporidium é monoxeno e similar ao dos demais coccídios entéricos, que incluem um ciclo merogônico com duas gerações de merontes, um ciclo gametogônico com macrogametas, microgametas e zigotos e uma esporogonia.

Comparado com Eimeria spp., o ciclo de vida do Cryptosporidium (Figura 1) é caracterizado por uma série de peculiaridades, sendo algumas delas de grande importância para o estabelecimento e desenvolvimento da infecção e para o tratamento da doença. A transmissão dá-se quando os oocistos são ingeridos ou inalados. O desencistamento (liberação dos esporozoítos) ocorre no interior do trato gastrintestinal sob ação combinada da redução de dióxido de carbono, temperatura, enzimas pancreáticas e sais biliares. Em contraste a outros coccídios, oocistos de Cryptosporidium liberam seus esporozoítos espontaneamente em outras soluções aquosas sem nenhum estímulo especial, o que explica, em parte, porque o Cryptosporidium pode infectar outros tecidos extraintestinais, como a conjuntiva ocular e o trato respiratório (BRADY et al., 1984; HEINE et al., 1984; LINDSAY et al., 1987).

Figura 1. Ciclo do Cryptosporidium parvum.

Fonte: adaptado do Centers for Disease Control & Prevention (2008).

Após o desencistamento, os esporozoítos penetram nas células epiteliais das microvilosidades do intestino delgado, onde formam o vacúolo parasitóforo. Nessa fase, eles são envolvidos por cinco unidades de membrana, das quais duas pertencem ao hospedeiro e as outras três ao parasita. O Cryptosporidium é o único coccídio que apresenta localização intracelular e extracitoplasmática (MARCIAL; MADARA, 1986).

As membranas do parasita e do enterócito estão aderidas por meio de uma região denominada de organela de alimentação, por onde o parasita retira substâncias nutrientes diretamente do citoplasma da célula hospedeira. Essa organela é exclusiva do gênero Cryptosporidium e sua função parece ser a de facilitar a troca de nutrientes entre a célula hospedeira e o parasita e, por ser semipermeável, dificultar a passagem de agentes nocivos ao parasita (MARCIAL; MADARA, 1986).

Os trofozoítos proliferam de forma assexuada por merogonia, liberando oito merozoítos de primeira geração. A divisão assexuada ocorre por um processo denominado endopolidiogenia, em que o núcleo do trofozoíto se divide para formar os merozoítos. Os merozoítos de primeira geração invadem outras células epiteliais podendo repetir o processo de merogonia primária, formando novamente oito merozoítos, ou iniciar a merogonia secundária, dando origem a quatro merozoítos de segunda geração (Figura 1f) (CURRENT; SNYDER 1988).

Os merozoítos secundários dão origem aos estádios sexuados. A reprodução sexuada desse parasita ocorre por gametogonia, com formação de microgamontes (masculino – Figura 1g) e macrogamontes (feminino – Figura 1h). Os microgamontes produzem 16 microgametas não flagelados, e os macrogamontes desenvolvem-se em um único macrogameta. A união do gameta masculino com o feminino dá origem ao zigoto (Figura 1i), que, por esporogonia, produz oocistos esporulados que medem de 4 µm a 6 µm e contêm quatro esporozoítos, sem esporocisto (Figura 1k) (CURRENT; SNYDER, 1988).

A membrana do oocisto pode ser única e delgada ou dupla e espessa. Os oocistos de parede delgada (Figura 1k) desencistam dentro do mesmo hospedeiro, levando a um processo de autoinfecção, enquanto os de parede espessa (Figura 1j) são lançados no meio externo e são responsáveis por transmitir a infecção de um hospedeiro a outro. A habilidade do parasita de persistir dentro de um único hospedeiro é uma característica que o distingue de outras espécies de coccídios e tem sido atribuída à repetição da primeira geração merogônica e à produção de oocistos esporulados com parede fina (CURRENT; SNYDER, 1988).

O fato de os oocistos serem esporulados e infectantes imediatamente após sua liberação torna o Cryptosporidium um parasita de alta infectividade, facilitando a sua transmissão em ambientes fechados, uma vez que o ciclo de vida do parasita pode se completar em apenas dois dias (TZIPORI et al., 1981).

Histórico da doença

Em ovinos, a infecção por Cryptosporidium foi primeiramente descrita na Austrália, em cordeiros de uma a três semanas de vida, que apresentavam diarreia (BARKER; CARBONELL, 1974). A importância e o papel do Cryptosporidium como agente primário de diarreia foram demonstrados no início dos anos 1980, em estudos com infecção experimental em cordeiros sem a presença de outros enteropatógenos (ANGUS et al., 1982; SNODGRASS et al., 1984). A partir desses experimentos, ficou demonstrada a importância desse parasita como agente causador de diarreias neonatais nessa espécie e, dependendo das condições ambientais em que são criados e da presença ou não de outros patógenos intestinais com valores consideráveis de mortalidade, a sua frequente associação com alta morbidade (ANGUS, 1990; MATOS-FERNANDEZ et al., 1994; MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996).

A Austrália também foi a primeira a descrever a infecção por Cryptosporidium em caprinos, os animais tinham duas semanas de idade e apresentavam quadro de diarreia (MASON et al., 1981). Desde então, a doença tem sido diagnosticada em surtos de diarreia em cabritos neonatos, nos países da Europa e Américas (MATOS-FERNANDEZ et al., 1993; POLACK et al., 1983). O Cryptosporidium é atualmente considerado um dos principais enteropatógenos em cabritos, e somente C. parvum tem sido associado à diarreia (KOUDELA et al., 1998; MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996; SILVA et al., 1999).

Patologia e patogenia

Em cordeiros, o período pré-patente oscila entre 2 e 7 dias e, em cabritos, ao redor de 4 dias. Esse período aumenta à medida que reduz a dose do agente infectante ou eleva a idade do animal (ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994). As manifestações clínicas da criptosporidiose em pequenos ruminantes neonatos são: apatia e depressão, anorexia, dor abdominal e, na maioria das vezes, diarreia com grande quantidade de oocistos. As fezes são geralmente amareladas, de consistência pastosa ou líquida, com odor fétido e nauseante (ANGUS et al., 1988; KOUDELA; JIRI, 1997; ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994; SNODGRASS et al., 1984).

Em infecções experimentais de cordeiros, o peso seco das fezes pode baixar de 24% para 10% (ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994). Na maioria dos casos da doença, os animais têm diarreia por 3 a 5 dias e, em casos mais severos, por uma a duas semanas (ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994). A cinética da eliminação é usualmente similar, tanto em infecções experimentais quanto em naturais, e – após os primeiros 2 ou 3 dias do período patente – a quantidade de oocistos eliminados aumenta progressivamente, com o pico máximo entre o 5º ou 6º dia pós-infecção; depois diminui progressivamente e finaliza entre o 10º e 15º dia pós-infecção. Nesta fase, os animais manifestam anorexia, que resulta em perda de peso e retardo no crescimento, que pode permanecer até os primeiros 5 meses de vida (HILL et al., 1990; KOUDELA; JIRI, 1997; ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994).

Em adição aos efeitos clínicos da criptosporidiose, a localização do organismo na superfície das células, ocasionando a perda das vilosidades e diminuição nos níveis de dissacaridases, o que pode interferir na absorção de nutrientes e levar a um quadro de má absorção e desnutrição. Estudos do desenvolvimento das lesões, após o período de incubação e no curso da doença, têm demonstrado que o parasita coloniza principalmente o jejuno e íleo. Entretanto, após o início da eliminação de oocistos (3 dias depois do começo da infecção), as lesões podem se espalhar para outras áreas do intestino delgado, podendo atingir em alguns casos o intestino grosso (KOUDELA et al., 1997; MOLINA et al., 1994).

Formas endógenas do Cryptosporidium são encontradas no epitélio – usualmente sem danificar as células hospedeiras, exceto nos casos em que essas se apresentam de forma baixo colunar, cuboidal ou escamosas –, e as microvilosidades podem estar ausentes no sítio de ligação do parasita (Figura 2) (KOUDELA et al., 1997, SILVA, 2000; SNODGRASS et al., 1984).

As lesões anatomopatológicas são descritas como atrofia, fusão ou perda de vilosidades intestinais, que se apresentam achatadas, curtas e mais largas que o normal e, algumas vezes, fundidas com outras vilosidades (Figura 2) (KOUDELA et al., 1997; SILVA, 2000).

Figura 2. C. parvum em células epiteliais do intestino delgado de cabrito (20x e 1.000x).

Foto: Márcia Benedita de Oliveira Silva

As alterações inflamatórias são marcadas por infiltrado celular, normalmente de células plasmáticas e neutrófilos, e por macrófagos e linfócitos, na camada da lâmina própria subepitelial. O intestino é hiperêmico e a luz do órgão é repleta de células inflamatórias e células da mucosa intestinal, em virtude da intensa descamação do epitélio. Linfonodos mesentéricos encontram-se algumas vezes aumentados de tamanho (SILVA, 2000).

Interação com outros enteropatógenos

C. parvum parece ser o agente etiológico mais frequentemente envolvido em surtos de diarreia em cordeiros – 65% dos surtos e 45% em casos individuais –, seguido por Escherichia coli – 61% dos surtos e 30% em casos individuais – (MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996). Outros agentes semelhantes a rotavírus são considerados menos importantes – 17% dos surtos e 2% em casos individuais – (MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996).

Em cabritos, C. parvum está presente em 40% dos surtos de diarreia e em 42% das análises individuais, seguido por E. coli em 36% e 22%, rotavírus em 14% e 22%, Clostridium perfringes em 20% e 11%, e Salmonella spp. em 7% e 3%, respectivamente (MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996).

A prevalência de infecção por C. parvum em cordeiros e cabritos tem sido estudada em surtos de diarreia, e a morbidade é considerada alta. Dados de um levantamento realizado em rebanhos caprinos na região de Sobral, CE, em 1999, demonstraram a prevalência de 12,7% de Cryptosporidium nesses animais (VIEIRA et al., 1999). A mortalidade em cabritos neonatos tem chegado a 50% e aumenta quando a doença está associada com outras infecções concorrentes ou quando o animal tem acentuada deficiência nutricional (VIEIRA et al., 1997; VIEIRA et al., 1999).

Transmissão, fatores epidemiológicos e econômicos

Cordeiros infectados podem excretar diariamente uma média de 2 x 109 oocistos nas fezes, eliminando mais de 2 x 1010 oocistos até o final da infecção (HILL et al., 1990; ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994). A infecção ocorre, na maioria das vezes, pela ingestão de oocistos previamente eliminados nas fezes de neonatos infectados ou de adultos portadores assintomáticos (XIAO et al., 1993).

Os adultos assintomáticos e as mães em período pré-natal podem contribuir para o aumento da contaminação ambiental, eliminando pequenas quantidades de oocistos no ambiente. Entre 75% e 100% dos cordeiros nascidos nesse ambiente tornam-se infectados nas primeiras semanas de vida (XIAO et al., 1994). Visitas frequentes de roedores a criadouros de pequenos ruminantes com pouca higiene ambiental podem se constituir em outra forma de infecção para os cordeiros (KLESIUS et al., 1986).

A influência da dose do agente infeccioso no curso da doença tem sido estudada e não existe nenhuma diferença entre a infecção natural e a experimental com respeito a sinais clínicos, eliminação de oocistos ou resposta de anticorpos no soro (ORTEGA MORA et al., 1993). Entretanto, o período pré-patente é, em poucos dias, mais longo nas infecções experimentais, com doses menores do agente (BLEWETT et al., 1993). Estudos experimentais com cordeiros gnobióticos têm mostrado que a dose infectante mínima pode corresponder a um único oocisto (BLEWETT et al., 1993).

O processo clínico que acompanha a infecção é mais comum em cordeiros e cabritos com menos de 30 dias de vida (MUNOZ-FERNANDEZ et al., 1996; ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994; TZIPORI et al., 1982), e nenhuma diferença intraespecífica quanto à patogenicidade tem sido evidenciada entre isolados obtidos de ruminantes domésticos (GRAAF et al., 1999).

A concentração de anticorpos no soro (IgG e IgA) e nas fezes são similares em ambos os períodos de vida e aparentemente independentes da idade, o que sugere a participação de outros mecanismos diferentes da resposta humoral no desenvolvimento da proteção (ORTEGA MORA; WRIGHT, 1994). Contudo, uma maior produção de muco intestinal e a concentração de glicoproteínas no intestino têm sido observadas em animais infectados com 28 a 56 dias de vida. A cinética de resposta de IgA no muco intestinal varia conforme a idade em que o animal sofre a primeira infecção, sendo mais rápida e com títulos maiores em animais que são infectados mais tardiamente (GRAAF et al., 1999).

As perdas econômicas relacionadas à criptosporidiose não são somente por causa da mortalidade, mas também por retardo no crescimento dos animais, custo de medicamentos, assistência veterinária e aumento da mão de obra envolvida. Na ausência de outros enteropatógenos, a mortalidade é maior em cordeiros do que em bezerros, e a morbidade pode chegar a 100% (ANGUS, 1990; ANGUS et al., 1981; MATOS-FERNANDEZ et al., 1994). A anorexia é mais pronunciada no início do processo em cordeiros e cabritos (KOUDELA; JIRI, 1997; NACIRI et al., 1984; ORTEGA MORA et al., 1994; SILVA, 2000; SNODGRASS et al., 1984; TZIPORI et al., 1981;). Quando comparados com animais não infectados de até quatro semanas de idade, cordeiros naturalmente infectados com C. parvum têm uma diferença média de peso de 2 kg (GRAAF et al., 1999).

Diagnóstico

Deve-se sempre suspeitar de criptosporidiose quando cordeiros e cabritos com mais de uma semana de vida apresentam diarreia aguda (GRAAF et al., 1999). A demonstração de oocistos em material fecal ou conteúdo intestinal pode ser feito por exame de esfregaços fecais corados pelo método ácidorresistente ou por observações microscópicas dos estádios endógenos do parasita em tecidos intestinais obtidos por biópsias ou exames pós-morte.

O diagnóstico da criptosporidiose, por meio dos exames parasitológicos de fezes feitos mediante técnicas de rotina, dificilmente revela a presença de oocistos de Cryptosporidium, os quais necessitam de métodos específicos de coloração associados aos métodos de concentração para aumentar a probabilidade de detecção do parasita (GARCIA et al., 1993).

As técnicas de concentração mais comumente utilizadas são a de flutuação em solução saturada de cloreto de sódio ou sacarose (Scheater) e o método de Ritchie (formol-éter), e os corantes mais utilizados são aqueles para organismos ácidorresistentes, como o Ziehl-Neelsen modificado (HENRICKSEN; POHLENZ, 1981), o Kinyoun, a safranina e a auramina-rodamina (Figura 3). Tanto o material a fresco quanto o conservado podem ser examinados, por serem compatíveis com as técnicas de coloração, sendo a técnica de Ziehl-Neelsen a mais recomendada por obter melhores resultados de sensibilidade e especificidade (GARCIA et al., 1993). Nas preparações com Ziehl-Neelsen modificado, os oocistos apresentam-se de conformação esférica corados, em tonalidades diferentes de róseo-avermelhada, com os esporozoítos visíveis ou não dentro do oocisto.

Figura 3. Oocistos de Cryptosporidium parvum em esfregaço fecal de cabrito (400x e 1.000x).

Foto: Márcia Benedita de Oliveira Silva

Os oocistos e os estádios endógenos do parasita podem também ser visualizados na forma de decalques (imprints) da mucosa do íleo, corados por Giemsa (GARCIA et al., 1993).

Fazer a confirmação histológica do grau e distribuição da infecção no trato intestinal é útil. O procedimento pode ser feito em animal moribundo, sacrificado com barbitúrico intravenoso, ou animal morto recentemente, que possa ser necropsiado nos primeiros 20 minutos. Neste último caso, amostras dos tecidos intestinais devem ser coletadas e fixadas imediatamente em formol 10% ou outros fixadores compatíveis com a coloração de Giemsa e/ou hematoxilina e eosina. É essencial enviar amostras de fezes do animal morto e dos animais vivos do mesmo rebanho ao laboratório, a fim de que se faça exames de confirmação e exames diferenciais com outros agentes infecciosos. Infecções múltiplas com dois ou mais patógenos são muito comuns em surtos de diarreia em cordeiros e cabritos até quatro semanas de idade (O’DONOGHUE, 1995).

Tratamento e controle

O tratamento etiológico de criptosporidiose tem sido possível nos dias atuais, e as drogas que demonstram ser parcialmente efetivas no tratamento e profilaxia dessa infecção em ruminantes incluem a lactato-halofungisona, a paramomicina e o decoquinato (Tabela 2). Entretanto, a viabilidade comercial de alguns desses produtos é ainda um problema em muitos países (HOERR et al., 1986; LINDSAY et al., 1987; PAPADOPOULOU et al., 1988; VARGA et al., 1995).

Tabela 2. Eficácia de diferentes drogas contra criptosporidiose em ruminantes.

Droga

Espécie animal

Dose(1)

Período de administração

Melhores resultados

Eliminação de oocisto

Episódio de diarreia (1)
ou consistência das fezes (2)

Lactato halofunginona

Cordeiro

50 µg

1 – 5 dias

Previne

Previne

Lactato halofunginona

Bezerro

30 µg – 500 µg

3 – 14 dias

Previne

Previne

Paramomicina

Bezerro

25 mg – 100 mg

11 dias

Previne

Reduz (1), melhora (2)

Paramomicina

Cabrito

100 mg

12 dias

Previne

Melhora (2)

Decoquinato

Bezerro

2,5 mg – 10 mg

8 semanas

Diminui

Melhora (2)

Decoquinato

Cabrito

2,5 mg

21 dias

Diminui

Previne (1)

(1) Por kg de peso vivo.

Fonte: adaptado de Graaf et al. (1999).

A importância do colostro para proteger ruminantes neonatos contra infecções por C. parvum tem sido enfocada. Em condições de campo, anticorpos adquiridos passivamente não protegem bezerros e cordeiros contra infecção adquirida naturalmente (ORTEGA MORA et al., 1993; PEETERS et al., 1992). Contudo, bezerros e cordeiros alimentados de colostro de mães imunizadas e com altos títulos de anticorpos específicos foram parcialmente protegidos contra a infecção (FAYER et al., 1989; NACIRI et al., 1994).

Na perspectiva de controle da infecção, medidas preventivas de higiene e manejo são as ferramentas mais importantes no combate à criptosporidiose em ruminantes domésticos. O objetivo é destruir formas externas do parasita e prevenir sua transmissão entre os animais e no ambiente ocupado por animais jovens (ANGUS et al., 1990).

Em criações de pequenos ruminantes, a destruição de oocistos nos galpões ou baias de maternidade pelo uso de calor úmido ou de desinfetantes químicos (amônia quaternária), a limpeza e troca periódica da palha nas baias (camas), a separação dos animais sadios dos doentes durante surtos de diarreia, a diminuição da taxa de concentração de animais na maternidade em adição à administração de colostro a neonatos, podem ajudar a prevenir surtos de criptosporidiose e a minimizar os índices de morbidade e mortalidade em rebanhos infectados (GRAAF et al., 1999).

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Capítulo 7
Toxoplasmose

Antônio Cézar Rocha Cavalcante
Ana Carolina de Aguiar Vasconcelos Carneiro
Ricardo Wagner de Almeida Vitor

Histórico e importância

Em 1908, Charles Nicolle e Louis Manceaux descreveram um parasito intracelular, encontrado no baço e fígado de um roedor, o Ctenodactylus gundi, proveniente do norte da Tunísia, na África, e empregado em pesquisas de laboratório no Instituto Pasteur. Esses pesquisadores acreditaram que o organismo encontrado se tratava de uma forma particular de Leishmania, denominaram-no Leishmania gondii. No mesmo ano, Alfonso Splendore observou o mesmo parasito em um coelho de laboratório em São Paulo, no Brasil, e também comparou-o ao agente do calazar. Esses achados simultâneos indicavam pelo menos duas espécies hospedeiras diferentes, infectadas com o mesmo agente etiológico em regiões fisiográficas distintas. Em 1909, os primeiros autores retificaram sua posição e denominaram-no Toxoplasma gondii (FRENKEL, 1982).

Esse protozoário pertence ao filo Apicomplexa, Levine 1970, à classe Sporozoazida, Leukart 1979, à subclasse Coccidiasina, Leukart 1979, à ordem Eucoccidiorida, Léger & Doboscq 1910, à família Sarcocystidae, Poche 1913, e à subfamília Toxoplasmatinae, Biocca 1956, gênero Toxoplasma, Nicolle & Manceuax, 1908 (CURRENT et al., 1990).

A toxoplasmose é uma doença causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular obrigatório, de distribuição geográfica mundial, encontrado parasitando uma grande diversidade de hospedeiros (mamíferos e aves). Seu desenvolvimento ocorre por várias vias de transmissão, dentro e fora de diferentes espécies hospedeiras (TENTER et al., 2000).

A infecção por T. gondii em pequenos ruminantes implica problemas na saúde pública, uma vez que o consumo de carne e leite de pequenos ruminantes contaminados pode facilitar a transmissão zoonótica desse protozoário.

Em caprinos e ovinos, a principal repercussão clínica e econômica da toxoplasmose é o aborto. As matrizes geralmente são assintomáticas até o momento do aborto, e os fetos abortados apresentam-se mumificados, macerados ou natimortos, podendo nascer crias debilitadas, as quais podem morrer logo após o nascimento. Os efeitos clínicos são mais severos nos fetos infectados na primeira metade da gestação do que nos infectados na metade final (DUBEY, 1987). Embora as perdas econômicas decorrentes do aborto de caprinos por causa da toxoplasmose sejam desconhecidas, elas podem ser consideravelmente elevadas, visto que, segundo McSporran et al. (1985) e Nurse e Lenghaus (1986), experimentalmente, o T. gondii induz maior gravidade em fetos caprinos do que em qualquer outra espécie do rebanho.

O fato de a doença ocorrer de forma esporádica e de as matrizes geralmente não apresentarem sintomatologia clínica característica da toxoplasmose até o momento do aborto, permite que a preocupação dos fazendeiros seja maior com as infecções de etiologia bacteriana e viral. Como o aborto é um evento fisiológico de grande importância do ponto de vista de crescimento do rebanho, para que este atinja níveis ótimos de produtividade, a toxoplasmose deve ser considerada.

No Brasil, a literatura sobre a toxoplasmose caprina e ovina é extensa, abordando desde inquéritos sorológicos até infecções experimentais. Em Minas Gerais, além de levantamentos sorológicos, foram realizados estudos visando determinar o emprego das reações de Sabin-Feldman (RSF), reação imunoenzimática (Elisa) e de imunofluorescência indireta (Rifi) no diagnóstico individual e em levantamentos soro-epidemiológicos (CHIARI et al., 1985; CARNEIRO, 2006); a influência da forma de criação na prevalência de toxoplasmose (CHIARI et al., 1987; MACHADO; LIMA 1987; SILVA et al., 2003); a frequência de eliminação de T. gondii em líquidos orgânicos de caprinos em diferentes períodos da infecção experimental (VITOR et al., 1991); a transmissão transplacentária (VITOR et al., 1992), a avidez de anticorpos específicos anti-toxoplasma da classe IgG e sua utilização na diferenciação entre toxoplasmose recente e crônica em caprinos e ovinos (BAHIA et al., 1995a; CAVALCANTE, 2004; CARNEIRO, 2006); a utilização do eluato de sangue dessecado em papel de filtro para inquéritos sorológicos (BAHIA et al., 1995b) e a resposta de anticorpos em caprinos infectados experimentalmente (VITOR et al., 1999).

Taxonomia e biologia do Toxoplasma gondii

O ciclo de vida do T. gondii é heteroxeno facultativo (Figura 1). Os hospedeiros intermediários são os animais homeotérmicos, incluindo principalmente animais de rebanhos e humanos. Os hospedeiros definitivos são os representantes da família Felidae, entre eles, o gato doméstico (DUBEY; BEATTIE,1988). Nos hospedeiros intermediários, o T. gondii passa por duas fases de desenvolvimento assexuado. Na primeira fase, taquizoítos multiplicam-se rapidamente por repetidas endodiogenias em vários tipos diferentes de células hospedeiras. Taquizoítos da geração anterior iniciam a segunda fase de desenvolvimento, a qual resulta na formação de cistos teciduais. No interior dos cistos teciduais, bradizoítos multiplicam-se lentamente por endodiogenia (DUBEY, 1993, 1998). Taquizoítos predominam na fase aguda da toxoplasmose enquanto bradizoítos, na fase crônica. Os cistos teciduais localizam-se preferencialmente no sistema nervoso central, olho e musculatura esquelética e cardíaca, sendo encontrados com menor intensidade em órgãos como pulmão, fígado e rins (DUBEY, 1993; DUBEY et al., 1998).

Figura 1. Ciclo de vida do Toxoplasma gondii.

Fonte: Dubey (1986).

Os cistos teciduais, considerados como o estágio final do ciclo de vida nos hospedeiros intermediários, são altamente infecciosos e persistem por longo tempo, talvez por toda a vida do hospedeiro. Pressupõe-se que os bradizoítos liberados por ocasional ruptura de alguns cistos teciduais em hospedeiros imunossuprimidos, tais como pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida, podem multiplicar-se localmente como taquizoíto ou mesmo invadir outros órgãos (DUBEY, 1998). O mecanismo da persistência de cistos nos tecidos é desconhecido. Entretanto, alguns pesquisadores acreditam que cistos teciduais se rompem periodicamente, liberando bradizoítos, que se transformam em taquizoítos. Estes reinvadem células hospedeiras e novamente transformam-se em bradizoítos formando novo cisto tecidual (DUBEY,1998; DUBEY et al., 1998; FRENKEL, 2000).

O T. gondii permanece em tecidos de ovinos e caprinos durante toda a vida do animal. DUBEY (1980) comparou por bioensaio em camundongos a distribuição de cistos teciduais de dez caprinos infectados naturalmente com T. gondii. Foram encontrados cistos no músculo esquelético de 10 caprinos, no coração e no diafragma de 6, e no pulmão e fígado de 3. Resultados semelhantes foram verificados em 10 de 12 caprinos necropsiados entre 60 e 561 dias após a infecção experimental pelo parasito (VITOR et al., 1993). Os órgãos mais parasitados foram: cérebro, coração, músculo esquelético e diafragma. Contudo, o T. gondii também foi demonstrado no útero, glândula mamária, rim, baço, fígado e pulmão.

Quando ingeridos pelo hospedeiro definitivo, os bradizoítos são liberados dos cistos e iniciam outra fase assexuada de proliferação, que consiste na multiplicação por esquizogonia. Os estádios terminais dessa multiplicação assexuada dão início à fase sexual do ciclo de vida. A gametogonia e a formação de oocistos ocorrem no epitélio do intestino delgado dos felídeos. Os oocistos não esporulados são liberados no lúmen intestinal e eliminados no meio ambiente junto com as fezes.

A esporogonia ocorre fora do hospedeiro e origina o desenvolvimento de oocistos infecciosos contendo dois esporocistos, cada um com quatro esporozoítos (DUBEY; BEATTIE, 1988; DUBEY et al., 1993; FRENKEL, 2000). Ao contrário de muitos outros coccídios, oocistos de T. gondii são menos infectantes e menos patogênicos para felídeos (hospedeiro definitivo) do que para camundongos, ruminantes, porcos e humanos (hospedeiros intermediários) (DUBEY, 1998).

Todos os três estádios (taquizoítos, bradizoítos e esporozoítos) são infectantes, tanto para os hospedeiros intermediários como para os definitivos, os quais podem adquirir a infecção por T. gondii principalmente via as seguintes rotas: a) horizontal, por ingestão de oocistos infecciosos disseminados no meio ambiente, ou de cistos teciduais presentes em carne ou vísceras cruas ou mal cozidas dos hospedeiros intermediários; b) vertical, por transmissão transplacentária de taquizoítos (DUBEY; BEATTIE, 1988; DUBEY et al., 1998; FRENKEL, 2000). Além disso, em alguns hospedeiros, taquizoítos podem também ser transmitidos por meio do leite materno (DUBEY, 1991; DUBEY et al., 1998). A toxoplasmose já foi observada em seres humanos após a ingestão de leite não pasteurizado de cabra (CHIARI; NEVES, 1984). O T. gondii foi encontrado em leite de cabras infectadas experimentalmente, tanto na fase aguda como na crônica da toxoplasmose (VITOR et al., 1991). O estádio evolutivo presente no leite obtido na fase aguda da toxoplasmose é provavelmente o taquizoíto, o qual é susceptível a enzimas digestivas. Entretanto taquizoítos podem sobreviver por períodos mais longos no estômago de crianças, porque a concentração de enzimas proteolíticas no tubo digestivo é menor nessa idade do que na adulta.

Soroprevalência da toxoplasmose

A toxoplasmose é uma das zoonoses mais difundidas no mundo. Sua presença em caprinos tem sido assinalada em diversos países, demonstrando o caráter cosmopolita da doença e a adequação desse pequeno ruminante como espécie hospedeira do parasito. A soroprevalência da toxoplasmose caprina, avaliada a partir da década de 1980, mostra por diferentes testes que a frequência de reações positivas é bastante variável (Tabela 1). As variações observadas na prevalência da toxoplasmose caprina podem estar relacionadas a fatores epidemiológicos e nutricionais, hábito alimentar dos animais, tipo de vegetação, variações climáticas, idade, sexo, manejo e testes sorológicos (TENTER et al., 2000).

Tabela 1. Soroprevalência para Toxoplasma gondii em caprinos de diferentes países no período de 1981 a 2006.

País

Autor

Ano da amostragem(1)

Soroprevalência

Número de animais testados

Método(2)

Caprinos de abatedouros

Arábia Saudita

Amin & Morsy

<1997

28

100

HAI

Bangladesh

Samad et al.

1994–95

13

528

AD

Egito

El Ridi et al.

<1990

29

14

HAI

Indonésia

Iskandar

<1998

40

38

HAI

Paquistão

Zaki

1993

0

58

TAL

Zimbabué

Pandey e Van Knapen

<1992

5

156

Elisa

Caprinos de fazenda

Alemanha

Seineke et al.

1993–95

42

69

Elisa

Áustria

Edellhofer e Aspöck

<1996

69

687

Rifi

Bangladesh

Samad et al.

<1993

54

33

TAL

Samad et al.

<1993

12

306

TAL

Botsuana

Binta et al.

1994–96

10

345

HAI

Hejlĩcek e Literák

1981–90

21

54

RFC

Espanha

Rodrigues-Ponce et al.

<1995

63

1052

Elisa

Estados Unidos da América

Patton et al.

Patton et al.

<1990

<1990

65

55

99

99

TAM

HAI

Etiópia

Deconinck et al.

<1996

20

133

HAI

Sting et al.

<1997

19

829

Rifi

Itália

Masala et al.

<2003

12

2445

Elisa

Irã

Sharif et al.

2005

30

400

Rifi

México

García-Vázquez

<1993

3

707

Elisa

Nigéria

Amim e Silsmore

<1993

5

248

AD

Nova Zelândia

Opel et al.

<1991

35

185

Rifi

Opel et al.

<1991

32

185

TAL

Países Baixos

Antonis et al.

<1998

47

189

AD

Rep. Checa

Hejlĩcek e Literák

1981–90

61

54

RSF

Reunion

Roger et al.

1987

75

395

Elisa

Turquia

Öz et al.

1990–92

15

66

HAI

Babür et al.

<1997

63

38

RSF

Tailândia

Jittapalapong et al.

2005

28

631

TAL

Tobago

Borde et al.

2005

64

70

TAL

Zimbabué

Deconinck et al.

2005

68

335

Rifi

(1) O ano de amostragem está listado como publicado nas referências. Nos casos em que essa informação não estava disponível, o ano listado é o ano de publicação do estudo, como indicado por “<”.

(2) Reação de fixação de complemento (RFC); teste de aglutinação direta (AD); enzyme-linked immunosobent assay (Elisa); reação de imunufluorecência indireta (Rifi); teste de hemaglutinação indireta (HAI); teste de aglutinação do látex (TAL); teste de aglutinação modificado (TAM); reação de Sabin-Feldman (RSF).

Fonte: Tenter et al. (2000), modificada e atualizada.

No Brasil, os inquéritos sorológicos realizados em diferentes estados, no período de 1978 a 2006, demonstram sua frequência, que varia entre 0% e 92,4% (Tabela 2).

Tabela 2. Soroprevalência para Toxoplasma gondii em caprinos de diferentes estados do Brasil, no período de 1978 a 2006.

Fonte

Ano

Estado

Número de animais examinados

Método(1)

Reagente (%)

Chiari et al.

1987

Minas Gerais

343(2)

Rifi

92,4

Chiari et al.

1987

Minas Gerais

208(3)

Rifi

70,0

Machado e lima

1987

Minas Gerais

372

Rifi

36,8

Figueireido et al.

1997

Minas Gerais

160

HAI

11,9

Figueireido et al.

1997

Minas Gerais

160

Rifi

10,0

Carneiro

2006

Minas Gerais

767

Rifi

45,8

Carneiro

2006

Minas Gerais

767

Elisa

42,8

Serra-Freire et al.

1994

Rio de Janeiro

–

Rifi

15,8

Mainardi et al.

2003

São Paulo

442

Rifi

14,5

Meireles et al.

2003

São Paulo

200

Elisa

17,0

Figliuolo et al

2004a

São Paulo

394

Rifi

28,7

Araujo

1984

Rio Grande do Sul

118

HAI

16,1

Maciel

2005

Rio Grande do Sul

360

HAI

19,4

Maciel

2005

Rio Grande do Sul

360

Rifi

30,0

Sella et al.

1994

Paraná

153

Rifi

30,7

Reis

2005

Paraná

282

MAT

23,05

Reis

2005

Paraná

282

Rifi

44,68

Silva et al.

2003

Pernambuco

213

Rifi

40,4

Cavalcante

2004

Ceará

2.362

Elisa

25,1

Amaral et al.

1978

Bahia

100

HAI

10,0

Santos et al.

1997

Bahia

384

Rifi

24,0

Pita Gondim et al.

1999

Bahia

439

TAL

28,9

Uzêda et al.

2004

Bahia

373

Rifi

16,35

(1) Reação de imunofluorescência indireta (Rifi); teste de aglutinacão em látex (TAL); enzyme-linked immunosobent assay (Elisa); reação de hemaglutinação indireta (HAI); teste de aglutinação modificado.

(2) Animais da região metropolitana de Belo Horizonte, MG.

(3) Animais do Município de Pedra Azul, MG.

Em Minas Gerais, estudo realizado na região metropolitana de Belo Horizonte e no Município de Pedra Azul permitiu estabelecer uma relação entre o sistema de criação dos animais e os títulos positivos para T. gondii em caprinos. Os valores percentuais observados nesse estudo foram 92,4% para a área periurbana de Belo Horizonte, 70% para a área urbana e 30,7% para área rural do Município de Pedra Azul. Os caprinos das áreas urbana e periurbana de Belo Horizonte eram mantidos em regime de confinamento, enquanto os de Pedra Azul eram criados extensivamente (CHIARI et al., 1987).

Nesse mesmo estado, Machado et al. (1987), utilizando a Rifi, observaram uma frequência de 36,8% de caprinos reagentes ao T. gondii em 372 amostras de soro de animais provenientes de 46 propriedades em 14 municípios. Nesse levantamento, as criações foram estratificadas segundo a forma de exploração. No extrato I (rebanhos leiteiros), constituído de animais puros e mestiços, a frequência foi de 36,1%; no extrato II (criações extrativas), formado por animais criados extensivamente e destinados ao abate, a frequência foi de 11,4%; e no extrato III, rebanhos de exploração mercantil simples e destinados à alimentação e renda alternativa da família, o índice de positividade foi de 62,9%. Os autores concluíram que a frequência da infecção por T. gondii está associada à forma de exploração dos animais e que o percentual de caprinos reagentes é maior em animais adultos. Não houve associação entre o sexo e o índice de positividade. Além disso, a ocorrência de títulos altos não está relacionada à presença de sintomatologia clínica.

Estudando a soroprevalência da toxoplasmose caprina em área rural e urbana de dez cidades do Rio de Janeiro, utilizando a Rifi, Serra-Freire et al. (1994) obtiveram o percentual de 15,8% de positividade, o que indica a presença de infecção por T. gondii. Nesse estudo, não foram encontrados animais positivos nas áreas rurais; já, nas áreas urbanas, o percentual observado foi de 27,5%.

Na região de Londrina, Paraná, foram examinados, pela Rifi, caprinos leiteiros de diferentes categorias zootécnicas (reprodutores, fêmeas em lactação, em gestação e vazias, e jovens até 1 ano) de oito propriedades. Os animais reativos dentro de cada categoria zootécnica foram: reprodutores, 11,7%; fêmeas em lactação, 32,0%; fêmeas em gestação, 22,8%; fêmeas vazias, 9,9%; jovens até 1 ano de idade, 23,5%. Os únicos grupos que apresentaram diferenças significativas, quando confrontados, foram os de animais jovens e de animais adultos, sugerindo que a idade seja um fator de influência sobre o percentual de reagentes (SELLA et al., 1994).

Alves et al. (1997), estudando a prevalência da infecção por T. gondii em diferentes regiões da Paraíba, observaram a ocorrência, variando de 0% a 26,8%, em 631 caprinos examinados pela Rifi. Os autores sugerem que a elevada prevalência observada nos caprinos da região de Bananeiras está associada a fatores epidemiológicos ambientais (temperatura, umidade e tipo de solo). Essa região é caracterizada por temperaturas mais amenas, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica mais elevada, enquanto as outras se situam em uma zona tipicamente semiárida, caracterizada por clima seco.

Santos et al. (1997) avaliaram pela Rifi a prevalência da infecção por T. gondii em caprinos de diferentes raças, idade e categorias zootécnicas, procedentes de diversas microrregiões homogêneas da Bahia, e verificaram que a frequência de reagentes foi de 24,0% (100/384). Entre as regiões homogêneas foram observados os seguintes valores: Salvador, 27,6% (23/122); Recôncavo Baiano, 0% (0/50); Agreste da Alagoinha, 35,1% (32/91); e Feira de Santana, 75% (45/121). Também foram observadas diferenças entre raças e categorias zootécnicas.

Posteriormente, ainda na Bahia, foram analisadas pelo TAL amostras de soro de 439 caprinos, provenientes de duas diferentes regiões, de características climáticas distintas: “Recôncavo – região A” e “Caatinga – região B”. A frequência de anticorpos para T. gondii foi de 28,9%. A taxa de positividade para os caprinos da região A foi de 41,9% e para os da região B foi de 7,2%. Os autores concluíram que a variação deve-se à maior exposição dos rebanhos da região A a ambientes contaminados com oocistos de T. gondii. (PITA-GONDIM, et al., 1999).

No Ceará, foram realizados testes sorológicos em 2.362 amostras de soro de caprinos procedentes de diferentes mesorregiões (CAVALCANTE, 2004). Pelo Elisa, o percentual de animais positivos foi de 25,1%. A proporção de animais positivos variou significativamente (p<0,05) entre as regiões. As maiores proporções de animais positivos foram observadas nas regiões Litoral e Norte, com 45,6% e 30,7%, respectivamente, e a menor proporção na região Centro (17,3%). Verificou-se a tendência de aumento da prevalência de anticorpos para T. gondii nos grupos de animais com idade mais avançada. Quanto à raça, a prevalência oscilou entre 20,8% (raças puras) e 28,2% (mestiças), não sendo detectadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos. Para a variável sexo, a prevalência foi de 21,9% para machos e 25,7% para fêmeas, não se observando, também, diferenças significativas. Fatores de risco associados à toxoplasmose foram: a) comedouro de madeira; b) ausência de comedouro; c) presença de gatos em número superior a dez por fazenda.

Carneiro (2006) avaliou soros de 676 caprinos provenientes de diferentes mesorregiões do Estado de Minas Gerais, e obteve uma taxa de positividades de 42,8%. Foi identificada uma maior prevalência de anticorpos anti-T. gondii em caprinos de raça pura (46,3%). Não foi observada associação significativa entre a positividade para toxoplasmose e o sexo ou idade dos animais. Os fatores de risco para a infecção por T. gondii em caprinos foram: idade superior a 36 meses (OR= 1,21 IC 95% 1,02 – 1,44), presença de aprisco (OR = 1,83 IC 95%1,01 – 3,31) e tipo racial puro (OR = 2,49 IC 95% 1,11 – 5,59).

Os ovinos, assim como os caprinos, assumem importante papel na cadeia epidemiológica da toxoplasmose. Vários aspectos relativos a essa parasitose em ovinos já foram estudados, entre eles, fatores de risco associados à presença de anticorpos antitoxoplasma (Skjerve et al., 1998), casos de toxoplasmose e evoluções de abortos (Pereira-Bueno et al., 2004; Szeredi; Bacsadi, 2002), transmissão congênita (Duncanson et al., 2001), diagnósticos para abortos (Archer et al., 1971a, 1971b) e prejuízos causados por essa infecção nos rebanhos (Freyre et al., 1999).

A toxoplasmose em ovinos tem sido assinalada em diversos países. Tenter et al. (2000) mostraram que a frequência de reações sorológicas positivas nesses animais é bastante variável, oscilando de 3%, no Paquistão e Zimbabué, a 92% na França (Tabela 3). As variações observadas na soroprevalência da toxoplasmose ovina podem estar relacionadas a vários fatores epidemiológicos regionais, aspectos nutricionais, idade, sexo, manejo e testes sorológicos aplicados na sua determinação (Tenter et al., 2000).

Tabela 3. Soro prevalência para Toxoplasma gondii em ovinos de diferentes países no período de 1988 a 2006.

País

Autor

Ano da amostragem(1)

Soropre-valência (%)

Amostras testadas (n)

Método(2)

Zimbabué

Pandey & Van Knapen

<1992

6,0

107

Rifi

Zimbabué

Pandey & Van Knapen

<1992

3,0

107

Elisa

Áustria

Schweighardt

<1991

72,0

531

RFC

Áustria

Edelhofer

<1996

66,0

4.079

Rifi

França

Cabannes et al.

<1997

92,0

642

Rifi

Espanha

Moreno et al.

<1991

40,0

550

AD

Espanha

Moreno at al.

<1991

35,0

550

Rifi

Espanha

Marca et al.

<1996

35,0

2.306

TAM

Espanha

Marca et al.

<1996

34,0

2.306

Rifi

México

Cruz-Vazquez et al.

1988

38,0

702

Rifi

Arábia Saudita

El-Metenawy

<2000

3,0

150

Rifi

Turquia

Babür et al.

<1997

89,0

62

RSF

Turquia

Altintas et al.

<1997

40,0

531

RSF

Nigéria

Amin & Silsmore

<1993

12,0

206

AD

Uruguai

Freyre et al.

1992

28,7

1.613

AD

Uruguai

Freyre et al.

1994

38,5

1.613

AD

Irã

Hashemi-Fesharki

1996

24,6

1.102

HAI

Irã

Hashemi-Fesharki

1996

24,3

2.209

TAL

Noruega

Skjerve et al.

1998

16,2

1.940

Elisa

Chile

Gorman et al.

<1999

12,0

408

HAI

Chile

Gorman et al.

<1999

28,0

408

Rifi

Gana

Van der Puije et al.

2000

33,2

732

Elisa

Síria

El-Moukdad

2002

44,6

–

–

Itália

Massala et al.

2003

28,4

9.639

Rifi

Sérvia

Klun et al.

2005

84,5

511

TAM

Marrocos

Sawadogo et al.

2005

27,6

261

Elisa

Zimbabué

Hove et al.

2005

67,9

335

Rifi

Paquistão

Zaki

1993

3,0

40

TAL

Irã

Sharif et al.

2004–2005

35,0

588

Rifi

França

Dumètre et al.

2006

22,0

164

AD

França

Dumètre et al.

2006

65,6

93

AD

(1) O ano de amostragem está listado como publicado nas referências. Nos casos em que essa informação não estava disponível, o ano listado é o da publicação do estudo, como indicado por “<”.

(2) Reação de fixação de complemento (RFC); teste de aglutinação direta (AD); enzyme-linked immunosobent assay (Elisa); reação de imunufluorecência indireta (Rifi); teste de hemaglutinação indireta (HAI); teste de aglutinação do látex (TAL); teste de aglutinação modificado (TAM); reação de Sabin-Feldman (RSF).

Fonte: Tenter et al. (2000), modificada e atualizada.

No Brasil, são poucos os estudos sobre a prevalência de anticorpos anti-T. gondii em ovinos (Tabela 4). Amaral et al. (1978) realizaram um estudo sobre a prevalência de toxoplasmose em ovinos procedentes do Rio Grande do Sul. Esses pesquisadores examinaram 100 soros pela HAI e relataram 23 (47,8%) positivos com títulos iguais ou superiores a 1:64. Também nesse estado, Larsson et al. (1980) encontraram prevalência de 39%. Pita-Gondim et al. (1999) em estudos na Bahia, utilizando o LAT, verificaram a soroprevalência de 18,7% em 240 ovelhas. No mesmo ano, Langoni et al. (1999), estudando 352 amostras de soros ovinos de 18 propriedades do Estado de São Paulo pela Rifi e HAI, relataram 30,4% de positividade pela HAI e 55,1% pela Rifi.

Tabela 4. Soroprevalência para Toxoplasma gondii em ovinos de diferentes estados do Brasil, no período de 1978 a 2007.

Fonte

Ano

Estado

Número de animais examinados

Método(1)

Reagente (%)

Amaral et al.

1978

Rio Grande do Sul

100

HAI

23,0

Larsson et al.

1980

Rio Grande do Sul

100

RSF

39,0

Pita-Gondim et al.

1999

Bahia

240

TAL

18,75

Langoni et al.

1999

São Paulo

352

HAI

30,4

Langoni et al.

1999

São Paulo

352

Rifi

55,1

Meireles et al.

2003

São Paulo

200

Elisa

31,0

Lagozo et al.

2008

São Paulo

120

MAT

24,2

Ogawa et al.

2003

Paraná

339

Rifi

54,6

Silva et al.

2003

Pernambuco

173

Rifi

35,3

Figliuolo et al.

2004b

São Paulo

597

Rifi

34,7

Carneiro

2006

Minas Gerais

711

Elisa

31,0

Carneiro

2006

Minas Gerais

711

Rifi

43,0

Clementino et al.

2007

Rio Grande do Norte

102

Elisa

29,41

Brandão et al.

2009

Maranhão

161

Rifi

23,0

(1) Reação de hemaglutinação indireta (HAI); reação de Sabin-Feldman (RSF); teste de aglutinacão em látex (TAL); reação de imunofluorescência indireta (Rifi); enzyme-linked immunosobent assay (Elisa); teste de aglutinação modificado (MAT).

Estudo soroepidemiológico também foi realizado no Estado de Pernambuco por Silva et al. (2003). De 173 amostras de soros provenientes de ovinos de duas regiões, foram encontrados 35,3% sororreativos pela Rifi. Os autores encontraram associações significativas para raça e sexo, mas não para região, tipo de manejo ou falha reprodutiva.

Figliuolo et al. (2004b) analisaram 597 ovinos procedentes de São Paulo e encontraram anticorpos anti-T. gondii em 34,7% dos animais. Segundo os autores, há associação entre a idade dos animais e a presença de anticorpos anti-T. gondii. CARNEIRO (2006) observou 221 ovinos (31,1%) positivos entre 711 animais provenientes de diferentes regiões do Estado de Minas Gerais. Animais com idade superior a 36 meses tiveram risco 1,45 maior de estarem infectados, quando comparados aos mais novos. Recentemente, Clementino et al. (2007) observaram 30 (29,4%) animais positivos entre 102 ovinos destinados ao consumo, oriundos de Lajes, Rio Grande do Norte. Por meio do Elisa para avidez de IgG, esses autores observaram que 6/30 (20%) apresentavam anticorpos de baixa avidez.

Aspectos clínicos

Na espécie caprina, casos de toxoplasmose disseminada acompanhada de sintomatologia são raros (FATZER, 1974; HARTLEY; SEAMAN, 1981; MEHDI et al., 1983). De acordo com Dubey (1987), o aborto é a manifestação clínica mais frequente e pode ocorrer em matrizes de todas as idades quando infectadas pelo T. gondii. Também, é mais frequente nas fêmeas que adquiriram a infecção durante a gestação, podendo se repetir em gestações subsequentes (DUBEY, 1982; VITOR et al., 1992). Na Figura 2, feto autolisado, eliminado com aproximadamente 100 dias de gestação. Abortos de etiologia desconhecida são citados em regiões produtoras de caprinos do Ceará e nas regiões norte e nordeste de Minas Gerais, com percentuais de 75,6% e 41,2% respectivamente (YORINORI, 2001; PINHEIRO et al., 2000). Guimarães (2006) descreveu abortos em 49,7% das propriedades de Minas Gerais que possuem caprinos e em 23,9% das propriedades que possuem ovinos. A etiologia desses abortos precisa ser determinada para se conhecer a real participação do T. gondii como agente abortivo em pequenos ruminantes do Brasil.

Figura 2. Feto abortado de cabra infectada experimentalmente com T. gondii.

Fonte: Vitor et al. (1992).
Foto: Ricardo Wagner de Almeida Victor

Vários casos de aborto em cabras naturalmente infectadas pelo T. gondii já foram descritos em outros locais do mundo (BARI et al., 1993; BINTA, et al., 1998; CHHABRA et al., 1981; DUBEY, 1981a, 1981b; DUBEY et al., 1981, 1986).

Recentemente Chanton-Greutmann et al. (2002), investigando a etiologia de casos de aborto em caprinos e ovinos na Suíça, identificaram, além de agente viral, T. gondii, Neospora caninum, Chlamidophila abortus como agentes causais de abortos. Nesse estudo, C. abortus foi diagnosticada, respectivamente, em 39% e 23% dos casos de abortos de ovelhas e cabras, seguido por T. gondii com percentuais de 19% e 15% dos casos de ovelhas e cabras.

Marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda

A identificação das fases aguda e crônica de uma infecção por meio de diagnóstico sorológico é importante. Usualmente o diagnóstico da toxoplasmose é realizado pela demonstração de anticorpos específicos para T. gondii, geralmente em baixos títulos. Como resposta à infecção, anticorpos da classe IgM são preponderantes na resposta e imunes à maioria dos antígenos; dando lugar aos IgG à medida que a resposta se torna mais efetiva (Goodmam, 1991).

Outro marcador sorológico capaz de distinguir entre infecções recentes e infecções antigas diz respeito à avidez dos anticorpos IgG específicos. Em infecções recentes, alta porcentagem desses anticorpos apresenta baixo poder de ligação, ou seja, baixa avidez pelos antígenos específicos de T. gondii. Ao longo de semanas ou meses, esses anticorpos vão sendo substituídos por IgG de alta avidez, de modo que, nas infecções de mais longa duração, encontra-se um predomínio marcante de anticorpos de grande afinidade (BAHIA et al., 1995a). Casos de toxoplasmose aguda em humanos podem ser diagnosticados usando os marcadores sorológicos IgM e IgG de baixa avidez, além de IgA, que identifica infecção recente (Decoster, 1997).

Entre os possíveis marcadores para diferenciação entre fase aguda e crônica da toxoplasmose caprina estaria a avidez de anticorpos IgG para T. gondii. Bahia et al. (1995a) avaliaram a avidez de anticorpos IgG, pelo Elisa, como marcador sorológico de infecção recente e crônica de caprinos pelo T. gondii. Esses autores observaram que a avidez de anticorpos IgG aumenta com o tempo de infecção do animal, tornando-se estável em torno do 100º dia após a inoculação. Em um grupo de 116 amostras de soro coletadas de animais infectados naturalmente, foram demonstrados perfis característicos de toxoplasmose recente, crônica ou em fase de transição. Os perfis foram previamente determinados por meio da soroconversão e da avaliação da evolução dos níveis de anticorpos IgG pela Rifi. Os animais caracterizados como portadores de toxoplasmose crônica apresentaram percentual de queda da absorbância de 26,3% ± 10,8%. Para toxoplasmose recente, a queda de absorbância foi de 77,6% ± 13,8% e, para o perfil de transição, de 46,2% ± 11,9%. Concluiu-se que a determinação da avidez de anticorpos da classe IgG pode ser utilizada como método auxiliar na determinação da fase de infecção da toxoplasmose caprina.

Amostras de soros de cinco cabras inoculadas com taquizoítos da cepa C4 do T. gondii foram avaliadas pelo Elisa, Immunoblotting e HAI (VITOR et al., 1999). A HAI mostrou capacidade de diagnóstico da toxoplasmose recente, pois, após tratamento dos soros com 2-mercapto-etanol, detectou anticorpos IgM específicos para T. gondii. O reconhecimento de anticorpos IgM para T. gondii não ocorreu de forma semelhante para todos os animais. Em duas cabras a HAI detectou IgM entre o 12º e o 48º dia pós-inoculação (d.p.i); em outras três, o teste reconheceu IgM específico entre o 12° e o 26° d.p.i. Entretanto, nos cinco animais houve concordância da HAI com o período de parasitemia, confirmando o valor diagnóstico desse teste. HAI seria, portanto, uma técnica auxiliar para determinação de anticorpos IgM para T. gondii no diagnóstico da toxoplasmose aguda em caprinos, podendo ser empregada em estudos populacionais ou no diagnóstico individual. Os autores ainda demonstraram que os soros testados pelo Immunoblotting reconheceram um pequeno número de antígenos nos dias iniciais da infecção experimental, aumentando o perfil de reconhecimento a partir do 19º d.p.i.

Poucos relatos existem na literatura sobre metodologias utilizadas para distinguir infecções agudas e infecções crônicas da toxoplasmose ovina. Fugliuolo et al. (2004b) relatam que 36,2% dos ovinos estudados em São Paulo estão provavelmente na fase aguda da infecção por apresentarem títulos sorológicos superiores a 1:1.024. O mesmo tipo de raciocínio é utilizado por Klun et al. (2005) ao sugerirem que aproximadamente 10% dos ovinos avaliados na Sérbia estão na fase aguda, visto que apresentam anticorpos IgG específicos com títulos iguais ou superiores a 1:1.600.

A determinação da avidez de anticorpos IgG anti-T. gondii também pode ser utilizada como marcador de infecção recente em ovinos. Carneiro (2006) analisou soros de 221 ovinos de Minas Gerais, positivos para anticorpos IgG anti-T. gondii, e observou que 81% dos animais positivos possuíam anticorpos IgG de alta avidez e 19% anticorpos de baixa avidez. Corroborando com os resultados encontrados previamente em soros de caprinos, conclui-se que a maioria dos ovinos estudados está na fase crônica da doença. Esse resultado indica ainda a presença de ovinos em fase aguda recente da toxoplasmose em Minas Gerais.

Diagnóstico de aborto

Nos casos de aborto em caprinos e ovinos, em razão da infecção pelo T. gondii, o exame macroscópico da placenta evidenciará cotilédones com focos de necrose, envolvendo algumas vilosidades (Figura 3), ou comprometendo todo o cotilédone (Figura 4). Para melhor visualização, os cotilédones devem ser lavados com solução NaCl a 0,9%, para expor as vilosidades lesadas. No caso de abortos causados pela infecção por Coxiella burneti, a placentite envolve tanto os cotilédones como a área intercotiledonária (DUBEY, 1987).

Figura 3. Cotilédone fetal de cabra infectada experimentalmente com T. gondii.

Fonte: Vitor et al. (1992).
Foto: Ricardo Wagner de Almeida Victor

Figura 4. Feto abortado de cabra infectada experimentalmente com T. gondii.

Fonte: Vitor et al. (1992).
Foto: Ricardo Wagner de Almeida Victor

A demonstração do T. gondii na placenta e tecidos fetais por inoculação em camundongos (VITOR et al., 1992) ou por PCR (SREEKUMAR et al., 2004) pode confirmar o diagnóstico de aborto pelo parasito. O material usado para inoculação deve ser mantido refrigerado (e não congelado) até seu processamento, porque o T. gondii pode morrer sob congelamento. A análise da presença de anticorpos para T. gondii em líquidos cavitários de fetos abortados (líquido cardíaco, pericárdico, pulmonar, pleural e abdominal) é a metodologia mais simples e pode auxiliar na confirmação de abortos por toxoplasmose (VITOR et al., 1992). Em caprinos e ovinos não ocorre passagem de IgG materna pela placenta. Nesses casos, o encontro de IgG específica para o T. gondii nos líquidos cavitários de fetos abortados ou no sangue de recém-nascidos, antes da ingestão do colostro, indicará infecção congênita da cria.

Controle

Medidas de controle devem incluir cuidados para se evitar a ingestão ou contato com tecidos contaminados com cistos teciduais, bem como a contaminação ambiental das fazendas com oocistos. Membranas fetais e fetos abortados devem ser manuseados com mãos protegidas para prevenir infecção das pessoas envolvidas com os animais. Esses tecidos devem ser enterrados ou incinerados para evitar infecção dos felídeos e outros animais das fazendas. O controle da reprodução de gatos nas fazendas deve ser feito por castração, pois a maioria dos gatos infecta-se logo após o desmame. Uma vez infectados, os gatos liberam oocistos por um curto período de tempo e desenvolvem imunidade que impede a sua reinfecção. O feno e a ração devem ser protegidos de gatos para evitar contaminação por oocistos; e o leite de cabra pasteurizado ou fervido antes de consumo humano. Todos os tecidos e carnes de origem ovina e caprina devem ser cozidos acima de 70 ºC antes do consumo.

Caprinos e ovinos desenvolvem uma boa imunidade contra toxoplasmose. Dessa forma, o uso de vacina poderia prevenir abortos. Recentemente foi desenvolvida uma vacina com esse objetivo, utilizando uma cepa mutante atenuada do parasito (Buxton; Innes, 1995). As principais características da vacina são: capacidade de não formar cistos ou oocistos; indução de altos níveis de IFNγ e desenvolvimento de imunidade residual de, no mínimo, 18 meses nos animais. Essa vacina (Toxovax®), indicada na proteção contra abortos em ovinos e caprinos, já é comercializada na Nova Zelândia e Inglaterra. Segundo o fabricante, estudos para facilitar o registro dela em outros países estão em andamento.

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Capítulo 8
Sarcocistose

Jeronimo Lopes Ruas
Tiago Gallina Corrêa

Introdução

A sarcocistose é uma doença causada por protozoários pertencentes ao filo Apicomplexa, classe Sporozoazida ou Coccidia, ordem Eucoccidiorida, família Sarcocystidae, gênero Sarcocystis. Foi descrita pela primeira vez por Miescher em 1843, na Suécia, que observou estruturas na musculatura esquelética de camundongo doméstico (Mus musculus), denominadas de “Túbulos de Miescher”. O gênero foi nomeado pela primeira vez por Lankester, em 1882, em bovinos (LEVINE, 1985; DUBEY et al., 1989). Sarcocystis é um parasito de distribuição cosmopolita, encontrado em inúmeros animais domésticos e silvestres – como mamíferos, répteis, peixes e aves –, desde o ártico até as regiões tropicais. Já foram descritas 189 espécies de Sarcocystis e, dessas, 86 têm os hospedeiros definitivos e intermediários conhecidos (DOLEZEL et al., 1999; DUBEY et al., 1989; ODENING, 1998; SAITO et al., 1996; TADROS; LAARMAN, 1976). A prevalência de sarcocistose pode chegar a 100% em ovinos e bovinos, sendo observados cistos do parasito principalmente na musculatura esquelética e cardíaca. A sarcocistose muscular é uma fase de latência do parasito, que permanece viável por longos períodos nos tecidos do hospedeiro (DUBEY et al., 1989; RUAS et al., 2001; STIGGER et al., 2001).

Ciclo biológico do Sarcocystis spp.

Sarcocystis possui um ciclo de vida heteroxeno obrigatório, que obedece ao binômio presa-predador. Os herbívoros são os hospedeiros intermediários (presa) e infectam-se ao ingerir alimento ou água contaminados com fezes do hospedeiro definitivo (predador) contendo oocistos ou esporocistos. Os esporozoítos liberados de esporocistos ingeridos penetram na parede intestinal e produzem a primeira geração de merontes (endotélio vascular de vários tecidos). No endotélio vascular e células musculares dos hospedeiros intermediários, desenvolve-se um estágio assexuado com formação de gerações de merontes (merogonia). De acordo com a espécie de Sarcocystis, pode haver de duas a cinco gerações de merontes. Depois de todas as gerações de merontes, o ciclo culmina com a produção de cistos nos tecidos (DUBEY et al., 1989).

Os cistos, formas infectantes para o hospedeiro definitivo, encontram-se dispostos entre as fibras musculares íntegras, dentro de um vacúolo parasitóforo (Figura 1). São colônias de parasitos que, quando maduros, podem conter até centenas de bradizoítos (Figura 2).

Figura 1. Cisto em fibra cardíaca de hospedeiro.

Foto: Jeronimo Lopes Ruas

Figura 2. Bradizoítos dispersos em solução salina após ruptura de um cisto.

Foto: Jeronimo Lopes Ruas

Os hospedeiros definitivos infectam-se pela ingestão de tecidos do hospedeiro intermediário contendo cistos maduros de Sarcocystis. Pela ação dos processos da digestão no estômago do hospedeiro definitivo, os bradizoitos são liberados do interior do cisto, movendo-se ativamente e penetrando na mucosa intestinal, onde se transformam em gametas masculinos (microgametas dentro de microgamontes) e gametas femininos (macrogametas dentro de macrogamontes). Os microgamontes são ovais, medem em torno de 7 µm × 5 µm e contêm, no seu interior, de um a vários microgametas, que medem 4 µm × 0,5 µm. Os macrogamontes são maiores que os microgamontes, medem de 10 µm a 20 µm de diâmetro e contêm uma única célula no seu interior (macrogameta). Os microgametas são liberados dos microgamontes e movem-se ativamente para a periferia do macrogamonte, que é fertilizado, dando origem a um zigoto e posteriormente a um oocisto, que contém em seu interior dois esporocistos similares, com quatro esporozoítos cada. O ciclo de vida desse parasito caracteriza-se por produzir esporulação in situ, o que leva à eliminação de oocistos já esporulados nas fezes; visto que, na maioria das vezes, o que chega ao meio ambiente são esporocistos livres por causa da fragilidade da parede do oocisto (Figura 3).

Figura 3. Oocisto esporulado (seta superior) e esporocisto livre (seta inferior).

Foto: Jeronimo Lopes Ruas

Os hospedeiros intermediários infectam-se pela ingestão de oocistos esporulados e/ou esporocistos junto com alimento ou água contaminados. Os esporozoítos são liberados dos esporocistos no intestino delgado, penetram nas células endoteliais dos vasos mesentéricos e desenvolvem a primeira geração de merontes. A segunda geração de merontes ocorre em células endoteliais de capilares de vários órgãos. Tanto a primeira como a segunda geração de merontes ocorrem dentro do citoplasma celular do hospedeiro, sem presença de vacúolo parasitóforo. O número de gerações de merontes varia de acordo com a espécie de Sarcocystis presente, podendo chegar a quatro gerações em animais domésticos; contudo, em ruminantes (ovelha, cabra e bovinos), ocorrem somente duas gerações. Os merozoítos liberados da última geração de merontes são responsáveis pelo início da formação dos cistos teciduais. Esses merozoítos são circundados por um vacúolo parasitóforo e adquirem formato mais oval, denominado metrócito. Após sucessivas divisões, o cisto é preenchido por bradizoítos, o que determina sua condição infectante para o hospedeiro definitivo (BOTELHO et al., 2002; DUBEY et al., 1989, 1999; GARDINER, 1988; LONG, 1990). Quando os hospedeiros intermediários sobrevivem à primeira infecção, podem adquirir imunidade, que lhes garantirá proteção contra a forma aguda da doença desde que o novo desafio seja com espécie homóloga. A experiência prévia com sarcocistose não garante imunidade contra infecção com espécies heterólogas (BUXTON, 1990; LONG, 1990; UGGLA).

Importância econômica

A sarcocistose pode causar importantes perdas econômicas na criação de pequenos e grandes ruminantes domésticos. Os prejuízos são decorrentes das alterações clínicas nos hospedeiros, ocasionando abortos e, em alguns casos, a morte dos animais. Além disso, pode causar importantes perdas por condenação de carcaças, em virtude da detecção da presença de cistos. A infecção crônica com espécies patogênicas de Sarcocystis pode determinar diminuição no peso dos animais, na produção de leite e na qualidade da lã, quando comparado com animais não infectados. Esse aspecto crônico da doença pode levar a graves prejuízos, na maioria das vezes detectados (DUBEY, 1993; DUBEY et al., 1989; LEVINE, 1985; MUNDAY, 1984, 1986).

Diagnóstico da sarcocistose

Diagnóstico clínico

Os sinais clínicos da sarcocistose em pequenos ruminantes são pouco específicos. Pode-se suspeitar de sarcocistose quando os animais apresentarem sinais como febre, anorexia, anemia, retardo do crescimento, redução na produção de leite e lã, aborto, partos prematuros, sinais nervosos e miosite (DUBEY, 1993; DUBEY et al., 1989; LEVINE, 1985). Como esses são sinais inespecíficos, há a necessidade de uma avaliação epidemiológica e confirmação do diagnóstico por meio de exames laboratoriais.

Diagnóstico sorológico

Existem vários testes sorológicos que podem ser empregados no diagnóstico de anticorpos para Sarcocystis spp., por exemplo: imunofluorescência indireta, Elisa e hemaglutinação. O exame sorológico apresenta o inconveniente das reações inespecíficas entre as várias espécies de Sarcocystis, tanto patogênicas como não patogênicas. Em adição a isso, as técnicas sorológicas convencionais apresentam dificuldade para distinguir as infecções agudas das crônicas. Geralmente, os testes utilizam preparações de antígenos provenientes de merozoítos e bradizoítos, cuja purificação e consequente padronização são difíceis. Uma alternativa para purificar os antígenos é a cultura in vitro de merozoítos e merontes.

Diagnóstico direto

Exames histopatológicos

Amostras de tecidos são coletadas e processadas; cortes de 5 µm de espessura são corados pela técnica de hematoxilina e eosina (HE) para pesquisa de cistos de Sarcocystis (MARKUS, 1978; RUAS et al., 2001; SAITO et al. 1996).

Exame a fresco

As amostras de tecido são coletadas por escarificação, com bisturi, dos tecidos do órgão estudado. Cada preparado é examinado e o resultado do exame é classificado como positivo ou negativo para a presença de merozoítos e/ou cistos de Sarcocystis spp. (RUAS et al., 2001; SAITO, 1984).

Imuno-histoquímica

A imuno-histoquímica é uma técnica essencialmente qualitativa e seu objetivo básico é a localização in situ do antígeno, na célula ou no tecido. Nesta técnica, seções de blocos de parafina são testadas com anticorpos para Sarcocystis (DUBEY et al., 1989; DUBEY; HAMMIR, 2000).

Caracterização molecular

Este diagnóstico é baseado na detecção de Sarcocystis spp. pela técnica de PCR (HECKEROTH; TENTER, 1999; TENTER et al., 1994) durante sua fase proliferativa no sangue de caprinos e ovinos, sendo de grande valia para o diagnóstico de sarcocistose aguda.

Controle geral da sarcocistose

O manejo, quando embasado em dados epidemiológicos consistentes, visando à interrupção do ciclo vital do Sarcocystis spp., é a melhor forma de controle da enfermidade em pequenos ruminantes domésticos.

Medidas gerais de controle da sarcocistose:

a) Higienizar as instalações para reduzir a contaminação dos alimentos e da água por oocistos e/ou esporocistos.

b) Evitar o acesso de cães e gatos às instalações dos ovinos e caprinos confinados.

c) Dar destino apropriado (incineração) às carcaças de animais mortos na propriedade, evitando o acesso dos canídeos e felídeos.

d) Não alimentar caninos e felinos com carne mal cozida.

e) Fiscalizar adequadamente os abates.

f) Esclarecer, por meio de campanhas, os proprietários.

Sarcocistose em ovinos

Existem quatro espécies de Sarcocystis parasitando ovinos (Ovis aries): Sarcocystis tenella e Sarcocystis arieticanis (patogênicos), cujos hospedeiros definitivos são os canídeos; e Sarcocystis gigantea e Sarcocystis medusiformis (não patogênicos), cujos hospedeiros definitivos são os felídeos.

Sarcocystis tenella

Os canídeos são os hospedeiros definitivos.

Também chamada de Sarcocystis ovicanis, é a espécie mais patogênica. Os ovinos infectam-se após ingerirem esporocistos junto com água e/ou alimento contaminados (DUBEY et al., 1989; LEVINE, 1985).

Estrutura e ciclo vital

Ocorrem duas gerações de merontes nas células dos vasos sanguíneos. Depois de completadas as gerações de merontes, aproximadamente 35 dias após a ingestão dos esporocistos, formam cistos microscópicos (700 µm ou mais) com parede grossa (1 µm a 3 µm). Os cistos localizam-se preferencialmente na musculatura estriada (principalmente língua e células de Purkinje do coração) e no sistema nervoso central. Canídeos domésticos (Canis familiares) e silvestres, como coiotes (Canis latrans) e raposa vermelha (Vulpes vulpes), atuam como hospedeiros definitivos. Possivelmente, canídeos silvestres sul-americanos (Cerdocyon thous e Pseudalopex gymnocercus) também podem atuar como hospedeiros definitivos do S. tenella. Em regiões como o extremo sul do Brasil, Uruguai e Argentina, canídeos silvestres coabitam com grandes rebanhos extensivos de ovinos, favorecendo o binômio presa-predador, necessário para o fechamento do ciclo na sarcocistose (DOTTO et al., 2001; DUBEY et al., 1989; FORD, 1986; PORT, 2002; RUAS, 2005).

Patogenia e sinais clínicos

Os principais sinais clínicos da sarcocistose por S. tenella são: anemia, retardo do crescimento, redução na produção de leite e lã, aborto, partos prematuros, sinais nervosos e miosite. Em casos mais severos, dependendo da dose de oocistos e/ou esporocistos ingeridos e do perfil imunológico do hospedeiro, a sarcocistose pode levar à morte do animal. A fase mais crítica da enfermidade é no estágio de merogonia, quando causa sarcocistose aguda, culminando com encefalite, encefalomielite, aborto e diátese hemorrágica (DUBEY et al., 1989). A infecção crônica com espécies patogênicas pode determinar perda de peso, diminuição na produção de leite e na qualidade da lã, quando comparado com animais não infectados (MUNDAY, 1984, 1986).

Sarcocystis arieticanis

Os canídeos são os hospedeiros definitivos.

Espécie patogênica para ovinos, forma cistos microscópicos na musculatura esquelética, e não parasita o sistema nervoso central. Os cistos têm aproximadamente 900 µm de comprimento e parede fina (< 1 µm). Apresenta patogenicidade e prevalência menor que S. tenella, contudo, após receberem doses superiores a 2 milhões de esporocistos, os ovinos morrem entre 16 e 21 dias (DUBEY, 1989; LEVINE, 1985).

Sarcocystis gigantea

O hospedeiro definitivo é o gato doméstico.

Também chamada de Sarcocystis ovifelis. Espécie não patogênica que produz cistos macroscópicos com aproximadamente 1 cm de comprimento, com coloração branca fosca e formato arredondado ou em forma de grão de arroz. Por causa do tamanho e aspecto característicos, esses cistos são facilmente detectados na linha de abate dos frigoríficos, principalmente na musculatura do esôfago, laringe e língua. Esses achados resultam na condenação de peças ou de carcaças inteiras, com consequentes perdas econômicas (DUBEY et al., 1989; HECKEROTH; TENTER, 1999; UGGLA; BUXTON, 1990).

Sarcocystis medusiformis

Os hospedeiros definitivos são os felídeos.

Esta espécie tem distribuição geográfica restrita à Austrália, à Nova Zelândia e ao Irã, e tem sido relatada como não patogênica. Os cistos possuem tamanho aproximado de 8 mm x 0,2 mm, com parede grossa (2 µm), sendo encontrados principalmente no diafragma e músculos abdominais. A aparência repugnante dos cistos de S. medusiformis pode levar à condenação de parte ou até das carcaças inteiras, acarretando prejuízos econômicos (DUBEY et al., 1989; LEVINE, 1985).

Sarcocistose em caprinos

Existem três espécies que parasitam caprinos (Capra hircus): Sarcocystis capracanis, Sarcocystis hircicanis e Sarcocystis moulei.

Sarcocystis capracanis

Esta espécie tem distribuição cosmopolita, e o hospedeiro definitivo é o cão doméstico.

Estrutura e ciclo vital

A primeira e segunda geração de merontes desenvolvem-se, respectivamente, entre 12 e 21 dias após a ingestão dos esporocistos. As merogonias ocorrem nas células endoteliais dos pequenos vasos sanguíneos de vários órgãos. Os cistos possuem tamanho aproximado de 1.000 µm x 100 µm, têm parede grossa (> 3 µm), e são encontrados praticamente em todos os músculos esqueléticos, no coração e no sistema nervoso central.

Patogenia e sinais clínicos

Durante o desenvolvimento das gerações de merontes, ocorrem as alterações patogênicas. Os principais sinais clínicos são: febre, anorexia, perda de peso, tremores musculares e abortos. Se o inóculo de esporocistos for muito alto, pode levar à morte. Animais que sobrevivem à sarcocistose apresentam-se debilitados, com pelos ressecados e coloração opaca. Animais convalescentes da sarcocistose tornam-se mais susceptíveis a outras infecções (DUBEY et al., 1989; LONG, 1990).

Sarcocystis hircicanis

O hospedeiro definitivo é o cão doméstico. É encontrado na Índia, Europa Oriental e Europa Ocidental. Possui cisto de aproximadamente 3 mm e parede fina (< 1 µm). Para causar lesões, é necessária a ingestão massiva de esporocistos superior a 10 milhões (DUBEY et al., 1988, 1989; LONG, 1990).

Sarcocystis moulei

O hospedeiro definitivo é o gato doméstico. É também chamado de Sarcocystis caprafelis. Possui distribuição cosmopolita e é uma espécie não patogênica. Produz cistos macroscópicos com aproximadamente 9 mm x 5 mm e parede grossa (> 10 µm), mais frequentemente encontrados no esôfago de caprinos (DUBEY et al., 1989; HEYDORN; KIRMSSE, 1996; LONG, 1990).

Considerações finais

O Brasil possui grande potencial para a exploração de pequenos ruminantes domésticos e condições favoráveis para a produção de carne, leite, peles, lã e derivados. Essa atividade econômica é de considerável importância socioeconômica para a geração de renda e emprego, tanto nos grandes estabelecimentos produtores como nas unidades de agricultura familiar.

A melhoria das condições sanitárias nos estabelecimentos produtores dessas espécies é uma questão fundamental. As parasitoses, em algumas situações, podem tornar-se fator limitante da produção. Tradicionalmente, os pequenos ruminantes são criados com manejo que determina o convívio com canídeos e felídeos domésticos e silvestres na propriedade. Na criação extensiva de ovinos, é cultural o uso de cães nas práticas de manejo. Esses fatores podem favorecer o binômio presa-predador em razão do carnivorismo e, por consequência, o fechamento do ciclo vital do Sarcocystis.

Referências

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Capítulo 9
Neosporose

Solange Maria Gennari
Sandra Mayumi Nishi

Introdução

Em 1984, Neospora caninum, parasita coccídeo pertencente ao filo Apicomplexa e à família Sarcocystidae, foi observado em cães na Noruega (BJERKAS et al., 1984) e, alguns anos mais tarde, foi descrito como um novo gênero e espécie (DUBEY et al., 1988). Desde então N. caninum tem sido relatado no mundo todo, por vários autores, infectando animais domésticos e silvestres (DUBEY, 2003). Em bovinos e cães, é responsável por abortos e problemas neuromusculares, respectivamente, e, em caprinos e ovinos, está associado a casos esporádicos de abortamentos e nascimento de filhotes fracos e prematuros (JOLLEY et al., 1999; LINDSAY et al., 1995).

Como outros parasitas coccídeos, N. caninum apresenta um ciclo típico de três estágios: taquizoítos, cistos tissulares e oocistos (Figura 1). Os cães domésticos (MCALLISTER et al., 1998) e os coiotes (GONDIM et al., 2004) são os hospedeiros definitivos do parasita. Os oocistos não esporulados são eliminados por essas espécies animais e, no ambiente, esporulam em 24 horas (LINDSAY et al., 1999). Em infecções experimentais, foram observados oocistos nas fezes de cães de 5 a 29 dias após a infecção, e os animais eliminaram essas formas por até 26 dias (GONDIM et al., 2002; LINDSAY et al., 1999; MCALLISTER et al., 1998; RODRIGUES et al., 2004).

Figura 1. Ciclo de vida de Neospora caninum.

Fonte: Dubey (1999).

Água, solo e alimentos contaminados com oocistos, quando ingeridos pelos hospedeiros susceptíveis, desenvolvem-se para taquizoítos, que se multiplicam por endodiogenia e formam cistos tissulares nos hospedeiros intermediários. Os cães podem ser tanto hospedeiros definitivos como intermediários. Os taquizoítos e cistos tissulares são os estágios observados nos hospedeiros intermediários e ambos são intracelulares. Os cães, alimentando-se de cistos, podem eliminar oocistos não esporulados (MCALLISTER et al., 1998). O agente pode ser transmitido pela via transplacentária em vários hospedeiros, sendo esta uma importante via de transmissão (DUBEY, 2003).

Neospora caninum em ovinos

Dubey et al. (1990) foram os primeiros a descrever a presença de cistos teciduais de N. caninum em cérebro e medula espinhal de um cordeiro da Inglaterra, de uma semana de idade, que se encontrava impossibilitado de se levantar após o nascimento.

Alguns anos mais tarde, McAllister et al. (1996) inocularam seis grupos de ovelhas gestantes com taquizoítos de N. caninum (170.000 e 1.700.000) nos 65º, 90º e 120º dias da gestação. Todos os animais soroconverteram e o único sinal da infecção foi o abortamento. Independentemente da dose infectante, todas as ovelhas infectadas no 65º dia da gestação abortaram. As inoculadas no 90º dia pariram cordeiros débeis ou clinicamente normais; e todas as ovelhas infectadas no 120º dia da gestação tiveram crias clinicamente normais. Mediante estudos de imuno-histoquímica, foram encontrados cistos no cérebro de 38% dos fetos abortados, de 28% dos cordeiros nascidos débeis e de 39% dos nascidos clinicamente normais. Não foram observados cistos em tecidos extraneural. Encefalite multifocal não supurativa foi diagnosticada em 95% dos animais examinados, sendo comumente identificados necrose cerebral, mineralização distrófica e meningite em animais vivos ou abortados. Lesões no fígado e pulmões foram menos frequentes.

No estudo de McAllister et al. (1996) e em outros, conduzidos por Buxton et al. (1997) e Buxton e Henderson (1999), confirmou-se, após infecção experimental, a transmissão transplacentária de N. caninum em ovinos e verificou-se que o estágio da gestação no qual ocorre a infecção influi na ocorrência ou não de abortos ou de casos clínicos.

Jolley et al. (1999) delinearam um estudo com o objetivo de observar se ovelhas cronicamente infectadas por N. caninum poderiam transmitir o agente via transplacentária. Observaram que a transmissão vertical de N. caninum ocorreu em ovelhas com infecção crônica, e que a presença de anticorpos no grupo de ovelhas soropositivas e reinoculadas com N. caninum, no 67º dia da gestação, não as protegeu da ocorrência de abortos ou do nascimento de cordeiros fracos, bem como dos abortos em gestações sequenciais, como os relatados em bovinos (BARR et al., 1993).

Kobayashi et al. (2001), no Japão, descreveram o primeiro caso de infecção por N. caninum em uma ovelha adulta e em seus dois fetos. Foram observados cistos tissulares no cérebro dos animais, que foram identificados como N. caninum por meio da morfologia dos cistos, da imuno-histoquímica e da amplificação de fragmentos de DNA de N. caninum. Estudos do mesmo grupo (KOYAMA et al., 2001) isolaram N. caninum do cérebro de uma ovelha naturalmente infectada por inoculação em camundongos imunodeficientes. Taquizoítos foram observados nos camundongos, e o diagnóstico foi confirmado por imuno-histoquímica e por amplificação do DNA de N. caninum pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR).

No Brasil, Pena et al. (2006) isolaram N. caninum de uma ovelha de 4 meses de idade, sem sintomas clínicos da doença e positiva quanto à presença de anticorpos séricos. N. caninum foi isolado por bioensaio em cães, com a eliminação de oocistos do 10º ao 26º dia após a ingestão do cérebro da ovelha. Foram diagnosticados como positivos pela técnica de PCR – realizada diretamente sobre o gene Nc5-Neospora específico – os oocistos eliminados pelo cão, e o cérebro e a medula deste animal. Os oocistos também tiveram o DNA amplificado pela PCR, baseada nos primers da sequência ITS-1, comum aos toxoplasmatídeos. Os fragmentos amplificados resultantes do ITS-1 foram sequenciados e submetidos às análises de bioinformática, revelando-se idênticos aos já descritos como N. caninum.

O’Handley et al. (2002) confirmaram, experimentalmente, que os ovinos se infectavam com ingestão de oocistos de N. caninum. Inocularam oralmente seis ovinos com 104 oocistos e, utilizando a técnica de PCR, observaram a presença de DNA de Neospora no sangue das ovelhas já na primeira semana após a ingestão dos oocistos e no tecido nervoso na ocasião do abate dos ovinos, no 49º dia pós-infecção. Todos os ovinos soroconverteram.

Apesar de os ovinos infectarem-se com facilidade, e os abortos ocorrerem nesses animais em condições experimentais, abortamentos não parecem ser importantes em infecções naturais por N. caninum. Otter et al. (1997) realizaram um levantamento para conhecer a real importância desse agente como causador de abortos em ovinos da Inglaterra e País de Gales. Esses autores examinaram, histologicamente, cérebro e coração de 281 cordeiros abortados. Amostras de fluido pleural de 197 desses fetos e de outros 141, que não foram examinados histologicamente, foram analisadas quanto à presença de anticorpos anti-N. caninum pela reação de imnunofluorescência indireta (Rifi≥50). Poucas lesões foram observadas nos fetos, e as análises de imuno-histoquímica foram negativas para N. caninum ou Sarcocystis spp., com alguns fetos positivos para Toxoplasma gondii. Títulos de anticorpos anti-N. caninum também não foram encontrados nas amostras analisadas. Os autores concluíram que, naqueles países, abortos ovinos por N. caninum são raros.

Em outro estudo realizado no Reino Unido, somente 3 de 660 ovelhas que abortaram apresentaram anticorpos anti-N. caninum (HELMICK et al., 2002), trazendo mais evidências de que esse parasita tem importância limitada em abortamentos ovinos naquela região.

Estudos semelhantes, nos quais as causas de aborto são estudadas na espécie ovina, não foram realizados em outros países. No Brasil, a ocorrência de anticorpos séricos em ovelhas foi determinada em diferentes estados. A Tabela 1 apresenta os resultados desses estudos por autor, local e técnica sorológica utilizada.

Tabela 1. Porcentagem de ovinos soropositivos à presença de anticorpos anti-Neospora caninum, por autor, local e método diagnóstico utilizado.

Autor

Local

Positivo (%)
(no examinado)

Método

Romanelli (2002)

Guarapuava, PR

9,5 (305)

Rifi(1)≥50

Figliuolo et al. (2004)

São Paulo

9,2 (597)

Rifi≥50

Gonçalves et al. (2004)

Ribas do Rio Pardo, MS

12,0 (58)

Elisa(2)

Aguiar et al. (2005)

Monte Negro, RO

29,0 (141)

Rifi≥50

Ueno et al. (2005)

Brasília, DF

8,8 (1.028)

Rifi≥50

Otero et al. (2005)

Bahia

7,4 (282)

Rifi≥50

(1) Reação de Imunofluorescência Indireta (Rifi).

(2) Enzyme-linked Immunosobent Assay (Elisa).

Os primeiros levantamentos sorológicos de ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em ovelhas no Brasil foram realizados por Romanelli, no Paraná, em 2002, e por Figliuolo e colaboradores em 2004, em São Paulo. Neste último estudo, nem a idade dos animais nem a presença de cães nas propriedades apresentaram associação com a presença de animais positivos. Das 30 propriedades examinadas em diferentes regiões do estado, somente 4 não apresentaram ovinos positivos à presença de anticorpos anti-N. caninum.

Neospora caninum em caprinos

Abortamentos naturais induzidos por N. caninum já foram descritos em caprinos dos Estados Unidos (BARR et al., 1992; DUBEY et al., 1992), em um rebanho leiteiro da Costa Rica (DUBEY et al., 1996), em um caprino na Itália (ELENI et al., 2004) e, em um cabrito de 3 dias de idade no Brasil (CORBELLINI et al., 2001). No estudo brasileiro, o caprino recém-nascido apresentava dificuldade para se levantar e para ingerir o leite, além de ataxia e opistótonos. Na necropsia do animal, no 3º dia de vida, havia cistos no córtex medular e na medula oblongata, os quais reagiram intensamente com soro policlonal anti-N. caninum.

Lindsay et al. (1995) observaram que, em infecção experimental, os caprinos abortaram quando inoculados com taquizoítos de N. caninum, e os fetos encontravam-se infectados, confirmando a via vertical de transmissão desse agente também na espécie caprina. Entretanto, estudos avaliando a importância de N. caninum em abortamentos caprinos ainda não foram realizados.

Com base em alguns poucos trabalhos de ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em soros de caprinos, observa-se que a incidência é relativamente baixa (Tabela 2), se comparada aos valores de ocorrência encontrados para T. gondii nessa espécie.

Tabela 2. Ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em caprinos por autor, local e método diagnóstico utilizado.

Autor

Local

% positivos
(no examinado)

Método

Ooi et al. (2000)

Taiwan

0,0 (24)

Rifi ≥ 50

Figliuolo et al. (2004)

São Paulo

6,3 (394)

Rifi ≥ 50

Uzêda et al. (2005)

Bahia

15,0 (384)

Rifi ≥ 50

Faria et al. (2007)

Paraíba

3,3 (136)

Rifi

Modolo et al. (2008)

São Paulo

17,44 (923)

NAT(1)

(1) Teste de aglutinação para neosporo.

Considerações finais

N. caninum é um agente causador de abortamentos em ovinos e caprinos e, apesar de sua ocorrência ser relativamente baixa e de os casos naturais de abortamentos pelo agente terem sido pouco descritos, já é sabido que ele se encontra nessas espécies animais e deve ser pesquisado juntamente com as outras potenciais causas de abortamentos.

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Capítulo 10
Babesiose e anaplasmose

Charles Ferreira Martins
Cláudio Roberto Madruga

Etiologia

Os hematozoários do gênero Babesia, que taxonomicamente pertencem ao subphylum Apicomplexa, classe Piroplasmasida, ordem Piroplasmorida e família Babesiidae (LEVINE, 1971), estão distribuídos mundialmente entre os animais selvagens e domésticos. Segundo a taxonomia dos microrganismos do gênero Anaplasma, com base na similaridade do gene 16S RNA, esses hematozoários pertencem à ordem Rickettsiales e família Anaplasmataceae (DUMLER et al., 2001).

A Babesia ovis e Babesia motasi são normalmente responsabilizadas pela babesiose de ovinos e caprinos, embora tenham sido identificadas Babesia taylory e Babesia foliata em alguns casos clínicos dessa enfermidade (UILENBERG, 2006). Tanto a B. ovis como a B. motasi possuem ampla distribuição geográfica e grande importância econômica, por causarem prejuízos diretos, como a redução da produtividade e a mortalidade nesses animais (AKTAS et al., 2005). Os carrapatos do gênero Rhipicephalus e Haemaphysalis têm sido associados à transmissão de ambas as espécies de Babesia (BAI et al., 2002, UILEMBERG, 2006). Recentemente foi confirmado que os carrapatos Rhipicephalus bursa, Rhipicephalus turanicus e Rhipicephalus sanguineus transmitem a B. ovis, visto que foi identificado DNA desse hemoprotozoário na reação de PCR com iniciadores sequênciais do gene 18S RNA e na análise do produto dessa PCR por polimorfismo do tamanho de fragmento (RFLP) para diferenciar de outras espécies (SHAYAN et al., 2007).

B. motasi tem apresentado distinta patogenia de acordo com a localização geográfica. No norte da Europa, ela apresenta baixa patogenia, enquanto no sul, elevada. Ainda que a diferença de patogenicidade possa estar associada a distintas populações genéticas do hemoprotozoário, deve-se considerar a possibilidade da existência de duas espécies ou subespécies. Essa consideração é plausível por causa das diferenças de infectividade em ovinos e caprinos e da pequena distinção morfológica entre os isolados (LEWIS et al., 1981).

Uma terceira espécie foi identificada em ovinos do Irã e Turquia, a Babesia crassa. A diferenciação entre B. ovis e B. motasi foi obtida na sorologia e na morfologia (HASHEMI-FESHARKI; UILENBERG, 1981) B. crassa apresenta grande semelhança com as demais do gênero e também tem baixa patogenicidade para ovinos e caprinos (HASHEMI-FESHARKI; UILENBERG, 1981). Na China, a babesiose ovina causa consideráveis perdas econômicas (YIN et al., 1997). Nesse país, os surtos estão relacionados possivelmente aos isolados mais patogênicos, transmitidos pelo carrapato Haemaphysalis spp., que filogeneticamente tem elevada identidade com B. motasi, ao passo que o isolado de menor patogenicidade transmitido por Hyalomma anatolicum tem maior similaridade com B. ovis e B. crassa (LIU et al., 2007).

Várias são as espécies de Babesia que afetam bovinos: Babesia bigemina, Babesia major, Babesia bovis e Babesia divergens. Desses protozoários, B. divergens foi o único observado na espécie ovina. Em um ensaio in vitro, que avaliou a invasão dos eritrócitos por merozoítos livres após um período de incubação de 1 hora, foi demonstrado que a especificidade da invasão eritrocítica não está relacionada a interações hospedeiro-específicas. Eritrócitos humanos foram invadidos mais eficientemente do que eritrócitos bovinos, enquanto eritrócitos de ovelhas, suínos e cavalos foram parasitados de modo menos eficiente. Em contraste, glóbulos vermelhos de cabras foram refratários à invasão. Ainda foram documentadas diferenças significativas na eficiência de invasão em eritrócitos de distintos indivíduos de mesma espécie (GAFFAR et al., 2003).

Anaplasma sp. também são agentes etiológicos de enfermidades encontrados em pequenos ruminantes. A anaplasmose ocorre em áreas de clima tropical, subtropical e temperado, causando consideráveis perdas econômicas. No Quênia, essa infecção em cabras é caracterizada por anemia e perda de peso (SHOMPOLE et al., 1989). Na natureza, dois anaplasmas foram isolados – Anaplasma ovis e Anaplasma marginale. Eles são conhecidos como organismos infectantes de cabras, mas somente A. ovis (Rickettsiales: Anaplasmataceae) tem sido identificado como causador de doença clínica nessa espécie (SHOMPOLE et al., 1989). Embora o A. ovis esteja extensivamente difundido no mundo, os surtos ocorrem esporadicamente.

Embora as ferramentas da biologia molecular – como a PCR e o sequenciamento – e os programas de bioinformática permitam a análise filogenética, ainda não existe clareza taxonômica das babesias que infectam ovinos e caprinos e de seus vetores tanto no velho quanto no novo mundo. Sabe-se que B. ovis é o agente de babesiose ovina e caprina mais frequentemente descrito (FERRER et al., 1998b; HASHEMI-FESHARKI; UILENBERG, 1981; RAZMI et al., 2002; YERUHAM et al., 1998a) e que A. ovis é o agente da anaplasmose nesses pequenos ruminantes. No Brasil, a doença não apresenta caráter preocupante.

Epidemiologia

Dependendo da área geográfica de origem dos animais, diferenças consideráveis na soroprevalência podem ser detectadas. Essa variação foi relacionada à população de carrapatos vetores, e, até o presente, já foram descritos R. sanguineus, R. bursa e R. turanicus, Hyalomma marginatum, Dermacentor daghestanicus, H. anatolicum, Haemaphysalis asiaticum e Haemaphysalis punctata (FERRER et al., 1998a; RAZMI et al., 2002; SHAYAN et al., 2007; YERUHAM et al., 1998a). A população de vetor está diretamente relacionada à vegetação, umidade e temperatura, que determinam sua ocorrência e situação epidemiológica (YERUHAM et al., 1998a).

Em geral, as parasitoses de ovinos e caprinos transmitidas por carrapatos têm menor importância do que as de bovinos. Entretanto, B. ovis, B. motasi, B. crassa e outras babesias ainda não foram detalhadamente estudadas e são descritas como agentes etiológicos que podem causar doenças com impacto sanitário e econômico significativos em vários países (AKTAS et al., 2005; CAEIRO, 1999; LIU et al., 2007). Os dados de prevalência de babesiose em pequenos ruminantes no Brasil são inexistentes. Em contrapartida, há vários estudos demonstrando a prevalência desses hemoprotozoários em países europeus (CAEIRO, 1999; CHRISTENSSON, THUNEGARD, 1981; FERRER et al., 1998a; PAPADOPOULUS, 1999; SAYIN et al., 1997) e asiáticos (BAI et al., 2002; RAZMI et al., 2002; YERUHAM et al., 1995).

Investigações hematológicas, mediante distensões sanguíneas, para a presença de Babesia sp., foram realizadas em pequenos ruminantes (RAZMI et al., 2002). Nesse estudo, não foram identificadas diferenças significativas de infecção entre grupos de ovinos de sexo e faixa etária distintas.

Anaplasma spp. infectando pequenos ruminantes tem sido descrito na Europa, África, Ásia e com menor frequência na América do Sul (FUENTE et al., 2005; HORNOCK et al., 2007; LIU et al., 2007; RIBEIRO et al., 1990). Embora tenha sido descrita a presença de anticorpos contra Anaplasma phagocytophilum em ovinos (FUENTE et al., 2005), manifestações de anaplasmose foram verificadas apenas em animais infectados com A. ovis. Um dos raros relatos de anaplasmose em pequenos ruminantes foi realizado em caprinos criados em vários municípios do Estado de Minas Gerais (RIBEIRO et al., 1990). Esse diagnóstico foi realizado por esfregaço de sangue a partir de hemácias periféricas.

Sinais clínicos

Animais com suspeita de babesiose apresentam sinais clínicos de febre alta (> 40 °C), taquicardia, anorexia, perda de peso, atonia ruminal, hemoglobinúria e dispneia. As mucosas apresentam-se, primeiramente, hiperêmicas, e, em estágios mais avançados, tornam-se ictéricas e posteriormente pálidas, em virtude da anemia (YERUHAM et al., 1998a). A causa primária da anemia é a hemólise intravascular, seguida do desequilíbrio entre a taxa de destruição dos eritrócitos e a capacidade de eritropoiese, que inclusive determina a intensidade da anemia (FELDMAN, 1981; JAIN, 1986; VOYVODA et al., 1997). Alguns estudos em ovinos têm demonstrado que a infecção por B. ovis é menos patogênica do que por B. motasi (AYTUG et al., 1990; İMREN; SAHAL, 1991). Segundo Yeruham et al. (1998a), a taxa de parasitemia de B. ovis e o grau de anemia não se correlacionam. Em geral, a anemia é comum para todos os casos clínicos causados por B. ovis, ao contrário da hemoglobinúria, que pode não ser observada em parte dos animais infectados (AYTUG et al., 1990; FERRER et al., 1998a; İMREN; SAHAL, 1991; POPA, 1998). Animais com infecção aguda por B. ovis não apresentam sintomatologia nervosa. Isso pode ser explicado pela ausência de acúmulo de eritrócitos parasitados em capilares do cérebro (YERUHAM et al., 1998b). Estudos da patogênese da infecção de B. motasi, após transfusão de sangue infectado para carneiros esplenectomizados e intactos, constataram que os primeiros apresentaram perda de peso, febre, anorexia e letargia. Os animais esplenectomizados recuperaram-se e permaneceram portadores. Os animais intactos foram refratários à infecção experimental (ALANI; HERBERT, 1998).

Vários fatores determinam a severidade dos sinais clínicos da babesiose, entre eles a situação epidemiológica determinada pela população de vetores, que caracteriza a região como de instabilidade ou estabilidade enzoótica, o que significa, no primeiro caso, uma grande parcela de animais susceptíveis à infecção e expressão da doença. No segundo caso, a maioria dos animais infecta-se durante o período de imunidade passiva e desenvolve a imunidade adquirida e, consequentemente, a resistência à doença (AYTUG et al., 1990; İMREN; SAHAL, 1991; VOYVODA et al., 1997). Outros aspectos a serem considerados quanto à expressão da babesiose são as características de patogenicidade dos isolados (LIU et al., 2007) e as condições do estado geral do animal em decorrência de fatores nutricionais e de manejo.

A anaplasmose também apresenta sintomatologia variável, mas em geral caracteriza-se por anemia progressiva, icterícia e enfraquecimento dos animais (CEBRA; CEBRA, 2005). Nos surtos de anaplasmose em caprinos, no Estado de Minas Gerais, foram constatadas anorexia, depressão, mucosas pálidas e debilidade. Durante a crise hemolítica, a urina apresentou coloração mais escura em alguns animais (RIBEIRO et al., 1990).

Patologia clínica

Os achados hematológicos observados em animais domésticos infectados por Babesia são essenciais. Em estudo clínico-patológico, realizado em ovelhas experimentalmente infectadas com B. ovis, ocorreu decréscimo do volume globular médio de 30% a 40%. O hematócrito e a concentração de hemoglobina apresentam valores diminuídos, e o volume corpuscular médio foi aumentado, o que caracteriza um quadro de anemia macrocítica-hipocrômica. A saturação do ferro e da transferrina do soro também estavam diminuídos (MARCO et al., 2000). Essas observações foram relatadas em vários estudos (MARCO et al., 2000; PANDEY; MISRA, 1987; VOYVODA et al., 1997; YERUHAM et al., 1998a). Uma possível causa para tais lesões pode ser a supressão da atividade hematopoiética da medula óssea, provocada pela babesiose (PANDEY; MISRA, 1987). Outros investigadores compartilham dessa hipótese (VOYVODA et al., 1997; YERUHAM et al., 1998a).

As enzimas do grupo transaminase, principalmente aspartato aminotransferase, e do grupo lactato desidrogenase têm marcado incremento, enquanto sorbitol desidrogenase e fosfatase alcalina têm algum decréscimo. Também observa-se a redução das proteínas totais e da albumina. O incremento da ureia e creatinina reflete o grau de severidade dos danos aos tecidos do fígado e rins (YERUHAM et al., 1998b).

Nas infecções por B. motasi, é verificada uma anemia macrocítica-hipocrômica que coincide com o pico de parasitemia. Na fase inicial, ocorre leucocitose, principalmente por causa da neutrofilia; e, na fase aguda dessa infecção, os níveis de bilirrubina não conjugada e conjugada (direta) aumentam (ALANI; HEBERT, 1988).

Em animais com anaplasmose, o achado laboratorial comum é a anemia regenerativa, com presença de corpúsculos no interior das hemácias. Ovinos que se recuperam da fase aguda e iniciam a fase crônica da infecção, frequentemente, apresentam contagens elevadas de hemácias nucleadas (CEBRA; CEBRA, 2005).

Anatomia patológica

Em estudo histopatológico, em ovinos infectados experimentalmente com B. ovis, foram observadas as seguintes alterações: encefalite não purulenta; pneumonia inicialmente exsudativa e subsequentemente intersticial; pericardite, miocardite e endocardite hemorrágica; hepatite necrótica centro-lobular; hiperplasia do sistema linfo-reticular; necrose e mudanças vasculares em glândulas adrenais. Nesse estudo, o rim mostrou lesões severas, exibindo necrose tubular aguda, típica de síndrome de choque. As lesões observadas foram sugestivas de choque hipovolêmico, que culminou em diátese hemorrágica, em razão da coagulopatia consumptiva. Adicionalmente, a liberação maciça de catabólitos de lise e necrose, aparentemente, produziu choque endotóxico (HABELA et al., 1991).

Em outras pesquisas, o rim apresentou glomerulonefrite aguda. As lesões foram sugestivas de alteração e estase vascular, levando à anoxia dos tecidos. A síndrome de coagulação intravascular disseminada (CID) foi também demonstrada em ovelhas infectadas com babesiose (MARCO et al., 2000; YERUHAM et al., 1998a).

Além das lesões descritas, outros exames histopatológicos revelaram congestão de capilares pulmonares e baço, nefrose hemoglobinúrica e hemosiderose generalizada (MARCO et al., 2000).

As lesões verificadas em animais com anaplasmose incluem palidez ou icterícia de membranas e esplenomegalia (CEBRA; CEBRA, 2005).

Diagnóstico

No diagnóstico deverão ser levados em consideração os dados epidemiológicos, os sinais clínicos ou patológicos e, sobretudo, os exames laboratoriais. Os sinais clínicos de babesiose e anaplasmose não são específicos, portanto há necessidade de diagnóstico diferencial com outras enfermidades. Existe grande variedade de testes laboratoriais que podem ser utilizados para identificação direta desses hemoparasitos (exame parasitológico e detecção de antígenos ou DNA). A escolha da prova está relacionada com a facilidade de execução, a disponibilidade de reagentes, a infraestrutura e capacidade técnica de cada laboratório, além do objetivo do diagnóstico (VIDOTO; MARANA, 2001).

Diagnóstico direto

Na fase aguda da doença, quando a parasitemia é alta, os hemoparasitos são facilmente detectados nos eritrócitos de ovinos e caprinos, por meio de exames de distensões sanguíneas coradas pelo método Giemsa (FARIAS, 1995). Embora seja de simples execução, a técnica de esfregaço apresenta baixa sensibilidade quando utilizada na fase crônica da doença (NANTULYA, 1990) ou quando a prevalência de animais infectados é baixa. Em consequência, um número significativo de infecções de hemoparasitos não é detectado; por isso, em estudos epidemiológicos, essa técnica tem pouco valor.

Para melhorar a capacidade de detecção no sangue periférico e identificar as espécies de babesias responsáveis pela infecção, foram desenvolvidas provas de hibridização de DNA espécie-específicas (AKTAS et al., 2005). A PCR tem possibilitado novas abordagens para a análise genética, com base na habilidade de amplificar amostras com baixa concentração de DNA de B. ovis em ovelhas e cabras (AKTAS et al., 2005). A utilização da PCR contribui para a detecção e caracterização genética de parasitas durante o período de baixa transmissão por vetores. Uma modificação da técnica da PCR foi descrita por Jackson et al. (1994), com a introdução de uma segunda reação de amplificação do DNA, a partir do produto da primeira reação, utilizando iniciadores internos. Essa técnica foi denominada nested-PCR (nPCR). Ela utiliza duas reações de PCR consecutivas, melhorando, desse modo, a sensibilidade da técnica original. A nPCR, descrita por Torioni de Echaide et al. (1998), demonstrou ser capaz de detectar 30 eritrócitos infectados por mL de sangue, o que corresponde ao aumento de 10 a 100 vezes na sensibilidade com relação ao teste da PCR utilizada em rotina.

Como anteriormente mencionado, a PCR apresenta ampla vantagem em sensibilidade quando comparada ao exame por esfregaço de sangue, por exemplo, a PCR com iniciadores sequênciais do gene da pequena subunidade ribossomal do RNA (ssu rRNA) da B. ovis. Quatro amostras foram positivas para Babesia spp. no esfregaço de sangue, enquanto 21 foram positivas na PCR (AKTAS et al., 2005). Técnicas como “blotting” de linha reversa (RLB) com sondas genéricas e espécie-específicas para a região V4 hipervariável do gene 18S rRNA amplificada possibilitam o diagnóstico e o estabelecimento da diversidade genética entre isolados (NAGORE et al., 2004). Esse método de diagnóstico tem ampla aplicação, pois permite diagnóstico múltiplo e diferencial de B. ovis, B. motasi e B. crassa, e também de isolados geográficos como B. crassa (Irã) e B. crassa (Turquia). Esse teste demonstrou alta especificidade porque houve reação apenas com o organismo alvo da sonda, inclusive diferenciando isolados regionais (SCHNITTGER et al., 2004).

Diagnóstico indireto

O diagnóstico indireto utilizado para pesquisa de anticorpos contra Babesia sp. e Anaplasma sp. é empregado em levantamentos epidemiológicos, pois possibilita conhecer o percentual de animais portadores, o grau de proteção do rebanho e a faixa etária mais afetada. Esses dados são necessários para o estabelecimento de programas de controle desses hemoparasitos (KLAUS; JONES, 1968).

Para detecção de anticorpos contra Babesia spp. de ovinos, a prova sorológica mais utilizada é a imunofluorescência indireta (IFI). Entretanto, segundo Papadopoulos et al. (1996), a IFI apresenta problemas relacionados à especificidade, por causa das reações cruzadas com parasitas do mesmo gênero, especialmente em áreas endêmicas onde ocorrem infecções por B. ovis, B. motasi e B. crassa. O teste de imunoadsorção enzimática (Elisa), específico para Babesia de ovinos e caprinos, ainda não foi descrito. O teste de Elisa baseia-se no antígeno bruto e no sintético de B. bovis, designado 11C5. O antígeno sintético apresentou um desempenho melhor em virtude da reprodutibilidade dos resultados, especificidade e maior estabilidade (DUZGUN et al., 1991).

Com relação às infecções de Anaplasma spp. em ovinos, a IFI é uma técnica empregada para determinar a presença de anticorpos contra várias espécies de Anaplasma spp., principalmente A. phagocytophilum (Amusategui et al., 2006). Atualmente o teste Elisa mais utilizado é o de inibição competitiva, que utiliza a subunidade proteína de superfície maior-5 (MSP-5) como antígeno, e um anticorpo monoclonal que reconhece o epitopo nesse antígeno como indicador da reação (KNOWLES et al., 1996).

Tratamento

Os compostos mais usados para o tratamento de babesiose ovina e caprina são aqueles à base de quinina e diamidina. A droga de maior eficácia para babesiose é o diaceturato de diminazina. Uma dose de 3,5 mg/kg, intramuscular profunda, normalmente é suficiente. Uma segunda dose poderá ser aplicada 48 a 72 horas depois, caso o animal não responda ao primeiro tratamento. Dose única via intramuscular de 1,2 mg/kg dipropionato de imidocarb (IMDP) tem sido eficaz em controlar infecções de B. ovis em ovelhas. Na ocorrência de recrudescência severa da infecção, pode ser aplicada uma segunda dose de 1,2 mg/kg de IMDP. Com relação à toxicidade do IMDP, há evidências de que essa dosagem é segura. Sinais transientes ou suaves de toxicidade foram vistos com 2,4 mg/kg e 4,8 mg/kg de IMDP, e uma toxicidade severa foi observada em ovelhas tratadas com 9,6 mg/kg (McHARDY et al., 1986).

Para animais infectados com Anaplasma sp., a tetraciclina seria o princípio ativo recomendado. A tetraciclina representa uma das mais importantes famílias farmacológicas e, levando em conta o seu largo espectro de ação antibacteriana, é usada como tratamento de primeira escolha nas infecções causadas por Rickettsia (COUTO et al., 2000). A dose recomendada é de 10 mg/kg, por via intramuscular com repetição após 10 dias (CEBRA; CEBRA, 2004).

Em ambas as infecções sugere-se terapia de suporte, como transfusão de sangue e fluidoterapia, quando necessárias (VIALA; GORENFLOT, 2006). Adicionalmente, podem ser empregados glicocorticoides e vitamina B12 (AYTUG et al., 1990; İMREN; SAHAL, 1991).

Controle e profilaxia

Na maioria das situações, mais do que a eliminação completa, a redução da quantidade de parasitas a níveis inferiores seria a ação mais recomendada (CEBRA; CEBRA, 2004). Os métodos de controle atualmente disponíveis estão alicerçados, quase que inteiramente, no tratamento quimioterapêutico para babesiose e anaplasmose e no uso de acaricidas para o controle de vetores (HASHEMI-FESHARKI, 1997). Bons resultados profiláticos foram obtidos com vacinas feitas com isolados vivos atenuados de B. ovis na Bulgária (LAWRENCE, 1997). No Brasil, não existem vacinas disponíveis no mercado para babesiose ou anaplasmose ovina e caprina.

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Capítulo 11
Pediculose

João Luiz Horácio Faccini
Sandra Batista dos Santos

Introdução

O parasitismo por piolhos (Phthiraptera) nos animais de produção, companhia e silvestres é cosmopolita. Caprinos e ovinos são reconhecidamente hospedeiros de várias espécies de piolhos, independentemente do local onde essas espécies sejam criadas. No entanto, dados sobre a relação parasito-hospedeiro são frequentes na literatura pertinente aos ovinos, provavelmente porque esses animais são criados em países desenvolvidos da Comunidade Europeia, América do Norte e Austrália, enquanto a criação de caprinos é mais frequente em países em desenvolvimento, incluindo alguns do continente sul-americano.

A dinâmica dessa relação é regida por inúmeros fatores abióticos e bióticos, os quais variam regionalmente, como diferentes raças, manejo dos hospedeiros, relevo, temperatura e umidade relativa do ar de determinada região ecológica. Isso impossibilita a extrapolação dos dados entre as regiões, principalmente pela escassez de estudos referentes à relação parasito-hospedeiro entre o piolho e os caprinos e ovinos no Nordeste do Brasil. Com isso procurou-se reunir dados disponíveis na literatura estrangeira e na de outras regiões do País, no intuito de fornecer ao leitor um panorama da situação atual e estimular futuras pesquisas que contribuam para a formulação de programas de controle e para o consequente aumento da produção e produtividade desses pequenos ruminantes, tão importantes para o agronegócio brasileiro, principalmente na região Nordeste.

Etiologia

Os piolhos são insetos ápteros e possuem corpo comprimido dorsoventralmente. Vivem todas as fases do ciclo biológico (ovo, ninfa e adulto) no hospedeiro. Em níveis superiores da escala zoológica, a maioria dos especialistas concorda que os piolhos estão incluídos na ordem Phthiraptera, a qual contém quatro subordens: Anoplura – piolhos hematófagos que parasitam somente mamíferos; Ischnocera e Amblycera – piolhos mastigadores que parasitam aves e mamíferos; e Rhyncophthirina – piolhos mastigadores que parasitam somente elefantes. No entanto, outros autores ainda classificam os piolhos em três ordens: Anoplura, Rhyncophthirina e Mallophaga, esta última constituída por duas subordens Ischnocera e Amblycera.

Os piolhos pertencentes à subordem Anoplura caracterizam-se por medirem no máximo 6 mm de comprimento e apresentarem: metamorfose incompleta, cabeça mais estreita que o tórax; aparelho bucal sugador do tipo especial anopluroide; antenas curtas, constituídas de três a cinco artículos; olhos reduzidos ou ausentes; tórax com segmentos soldados; tarso com um único artículo e com uma garra tarsal oposta ao polegar da tíbia. Os piolhos da subordem Ischnocera apresentam antenas filiformes, expostas, constituídas de três ou cinco artículos; palpos maxilares ausentes; meso e metatórax, geralmente fundidos; já os da subordem Amblycera têm antenas mais ou menos clavadas, constituídas de quatro artículos, geralmente escondidas em sulcos, palpos maxilares presentes, e meso e metatórax geralmente separados (FREITAS et al., 1982).

Em níveis de família, gênero e espécie, algumas controvérsias ainda existem. Por exemplo, espécies de piolhos mastigadores que parasitam caprinos e ovinos estariam incluídas no gênero Bovicola Ewing, 1929 (PRICE; GRAHAM, 1997), porém alguns autores ainda citam o gênero Damalinia Mjöberg, 1910, para algumas espécies (FOURIE et al., 1995; MADEIRA et al. 2000., SANTOS; FACCINI, 1996).

As espécies de piolhos parasitas de caprinos e ovinos são consideradas cosmopolitas tanto em países de clima temperado como tropical, pois são parasitos obrigatórios permanentes, cujo ciclo biológico ocorre no hospedeiro e a transmissão é por contato direto (PRICE; GRAHAM, 1997). No entanto, a diversidade de raças, o manejo e os climas regionais podem alterar a distribuição de determinada espécie. Santos et al. (2006a) diagnosticaram o parasitismo por Linognathus africanus em caprinos no Estado do Rio de Janeiro, entretanto, essa espécie nunca foi encontrada nos caprinos criados no Nordeste do Brasil, a despeito dos inquéritos faunísticos realizados até o presente (BRITO et al., 2005; SANTOS; FACCINI, 1996; SANTOS et al., 2006b).

Os caprinos e ovinos são hospedeiros de espécies incluídas nos gêneros Bovicola Ewing, 1929 (subordem Ischnocera) e Linognathus Enderlein, 1905 (subordem Anoplura) citadas a seguir: Capra hircus Linnaeus, 1758 – caprino doméstico: Bovicola caprae (Gurlt, 1843)*, Bovicola crassipes (Rudow, 1866)*, Bovicola limbatus (Gervais, 1844)*, Linognathus africanus Kellogg e Paine, 1911* e Linognathus stenopsis (Burmeister, 1838)*. Ovis aries Linnaeus, 1758 – ovino doméstico: Bovicola ovis (Schrank, 1781)*, L. africanus*, Linognathus ovillus (Neumann, 1907) e Linognathus pedalis (Osborn, 1896)*. Segundo Pinto (1938), as espécies assinaladas com um asterisco ocorrem no Brasil. Linardi (2001), citando essas espécies, comenta apenas que são cosmopolitas. Considerando os ectoparasitos de pequenos ruminantes, as espécies de piolhos podem ocorrer isoladamente ou em infestações mistas, como relatado por Santos et al. (2006a), que diagnosticaram B. caprae e L. africanus em um pequeno rebanho de caprinos no Município de Seropédica, RJ. No Nordeste do Brasil, foram observados no Estado de Pernambuco, por Torres (1945), e no sertão paraibano, por Santos e Faccini (1996), caprinos parasitados concomitantemente por B. caprae e Demodex caprae. De acordo com Padilha (1982), é comum nessa região do Brasil a ocorrência de casos de otocaríase psoróptica associada a pediculose nos animais, em razão das precárias condições de manejo sanitário. Em Sobral, CE, Costa e Vieira (1984) observaram caprinos e ovinos parasitados pelos seguintes ectoparasitos: Psoroptes cuniculi, B. caprae, Cochliomyia hominivorax e Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Infestações mistas por diferentes espécies de ectoparasitos também foram observadas por Brito et al. (2005), no estado do Maranhão, e por Bezerra (2007), no Rio Grande do Norte.

Em países africanos de clima e manejo semelhantes ao Nordeste do Brasil, com caprino-ovinocultura de subsistência, a pediculose foi observada por Sebei et al. (2004) que diagnosticaram B. caprae, B. limbatus e L. africanus em caprinos na África do Sul; na Líbia, Gabaj et al. (1993) diagnosticaram infestações mistas por L. stenopsis, L. africanus e B. caprae também em caprinos. No entanto, considerando a grande extensão territorial do Brasil, com diferentes ecótopos, onde caprinos e ovinos de diferentes raças ou seus mestiços são criados em diferentes sistemas de manejo, diagnósticos mais detalhados das espécies de piolhos que ocorrem no Brasil se fazem necessários.

Sinais clínicos/patologia e importância econômica

Os principais sinais observados por Padilha (1982), Santos e Faccini (1996), Torres (1945) e Werneck (1950) em caprinos naturalmente parasitados por B. caprae são: pelos eriçados, sem brilho e quebradiços (Figura 1); inquietação dos animais, que se coçam frequentemente nas cercas; prurido; excesso de descamação da pele; e diminuição da ingestão de alimentos.

Figura 1. Área de pele de caprino infestado por B. caprae (pontos claros) em contraste com os pelos escuros.

Foto: Sandra Batista dos Santos

Já em meados da década de 1940, baseando-se em observações do parasitismo em condições naturais, Torres (1945) registrou que as infestações maciças por B. caprae causam extrema irritação, resultando na diminuição do consumo alimentar e, por consequência no emagrecimento dos animais. Essas observações nunca foram comprovadas experimentalmente nas condições de manejo utilizadas no Nordeste brasileiro. Segundo Milness et al. (2003), a amplitude dessas perdas depende da espécie de piolho e da intensidade da infestação. Ainda, de acordo com Taylor (2002), o parasitismo por B. caprae, em caprinos na Inglaterra, causa intensa irritação e alopecia nas infestações intensas, particularmente nas regiões do pescoço, escapular e base da cauda. Chalmers e Charleston (1980) citam que o parasitismo por malófagos pode ser mais prejudicial em animais jovens.

Em relação às perdas na produtividade, os dados são inexistentes, principalmente no que concerne a pesquisas que relacionem os níveis de danos econômicos dessas ectoparasitoses em caprinos e ovinos. Contudo, os exemplos citados a seguir indicam a possibilidade de perdas consideráveis na comercialização de peles. No ano 2000, foram produzidos 6 milhões de unidades de peles caprinas no Brasil (VASCONCELOS; VIEIRA, 2004). De acordo com Portugal (2003), 40% dos defeitos existentes nas peles são ocasionados por ectoparasitos; o que influencia na classificação final e comercialização.

Na Austrália, o parasitismo por B. ovis em ovinos tem grande importância econômica, por causa das perdas ocasionadas na produção de lã (WARD; ARMSTRONG, 1999). Pesquisas sobre a relação parasita-hospedeiro entre B. ovis e ovinos nesse país são bastante elucidativas em relação ao ciclo biológico, patologia e resposta imunológica de ovinos parasitados.

Bioecologia/epidemiologia

Nos estados do Ceará e da Paraíba, Costa e Vieira (1984) e Santos et al. (2006b), respectivamente, verificaram que as infestações por B. caprae se intensificam à medida que progridem os meses secos do ano, provavelmente em virtude da debilidade dos animais, pelo mau estado nutricional resultante da escassez de alimentos, comum nessa região. Aliam-se a isso as precárias condições de manejo adotadas pelos pequenos criadores, traduzidas pela aglomeração dos animais independentemente de idade, sexo e estado fisiológico, tal como a prenhez, favorecendo a transmissão dos piolhos.

Estudos realizados no Ceará por Costa e Vieira (1984), na Paraíba por Santos e Faccini (1996) e Santos et al. (2006b) e no Maranhão por Brito et al. (2005) apontaram prevalências variando entre 40% e 100%. Além do Brasil, a prevalência dessa espécie foi estudada no Norte do Sinai (Egito), onde os autores encontraram 31,6%, além de 24,1% para L. africanus e 10,53% para L. stenopsis (MAZYAD; HELMY, 2001). Na Índia, a prevalência de B. caprae encontrada em caprinos foi de 79,2%; ainda nesse estudo, os autores observaram animais infestados por L. africanus, com prevalência de 38%, sendo que os caprinos adultos foram os mais acometidos (KUMAR et al., 1994).

Observações realizadas em condições naturais indicam que o parasitismo por B. caprae é semelhante em ambos os sexos e que a infestação ocorre mais intensamente na região dorsal (SANTOS; FACCINI, 1996).

Em recente estudo da variação estacional de B. caprae, durante o período de 3 anos, na região do Semiárido do Estado da Paraíba, Santos et al. (2006b) observaram que todas as fases do ciclo biológico (ovos, ninfas e adultos) estão presentes o ano todo e que a fase de ninfa é a mais sensível aos fatores abióticos, principalmente à umidade relativa do ar. As ninfas diminuem em quantidade à medida que a umidade aumenta, em consequência do aumento das chuvas (Figura 2).

Figura 2. Flutuação de ninfas de B. caprae que parasitam caprinos na mesorregião do Sertão Paraibano, entre agosto de 1999 e julho de 2002, e os fatores abióticos – temperatura máxima e umidade relativa.

Fonte: Santos et al. (2006b).

Entretanto, não é possível considerar somente a umidade como responsável pelo aumento ou diminuição da população de piolhos, como proposto por Costa e Vieira (1984) para a região de Sobral, no Estado do Ceará, já que o coeficiente de correlação obtido foi muito baixo (rs=0,332). Esses autores verificaram que a população de B. caprae apresenta picos durante os meses secos e diminui à medida que se iniciam as chuvas. Ressalta-se que a precipitação média registrada no período do estudo por Costa e Vieira (1984) foi superior a 300 mm3, ao contrário da verificada por Santos et al. (2006b), que foi de 62,7 mm3, demonstrando com isso a variação climática entre as duas regiões estudadas, sendo, portanto, necessário caracterizar cada região bioclimatologicamente, antes de estabelecer a relação com o parasitismo por B. caprae.

Pode-se inferir que, na mesorregião do sertão Paraibano, o aumento da infestação durante os períodos secos seja em virtude da debilidade dos animais, pelo mau estado nutricional resultante da escassez de alimentos comum nessa região e pelas precárias condições de manejo adotadas pelos pequenos criadores, traduzidas pela aglomeração dos animais, independentemente de idade, sexo e estado fisiológico (COSTA; VIEIRA 1984). Com o início das chuvas na mesorregião do sertão Paraibano, há maior disponibilidade de alimentos, e os animais melhoram seu estado nutricional, provavelmente aumentando a resistência dos hospedeiros, com consequente diminuição da população de B. caprae.

Dados sobre o ciclo biológico de B. caprae são inexistentes na literatura brasileira. Segundo Butler (1985), o ciclo biológico de B. caprae de ovo a ovo completar-se-ia em cerca de 40 dias, em condições de laboratório. De acordo com Santos et al. (2006b), os ovos de B. caprae permanecem aderidos aos pelos (lêndeas), já as ninfas e adultos movimentam-se na pele formando colônias, uma vez que possuem hábitos gregários (URQUHART et al., 1998). Esse comportamento é semelhante ao verificado para B. bovis, quando parasita bovinos (MATHYSSE, 1944).

Em relação a B. ovis, Madeira et al. (2000) reportaram prevalência de 14% em ovinos lanados no Estado de São Paulo, enquanto Maia et al. (2001) também encontraram B. ovis em ovinos deslanados na região do Sertão Paraibano, com prevalência de 18,94% para machos e de 23,47% para fêmeas. Embora a prevalência fosse bastante diferente, em ambas as situações, os autores observaram baixa intensidade de infestação, o que aparentemente não representou problemas à produtividade dos ovinos. O mesmo fato foi observado por Costa e Vieira (1984) no parasitismo por B. ovis em ovinos de Sobral, CE. No Rio Grande do Sul, o parasitismo por B. ovis é considerado um fator limitante à produção de ovinos lanados, uma vez que há décadas os produtores mantêm programas de controle para essa parasitose (BROCHADO; FRANCI, 1986). Em 1996, na Nova Zelândia, 60% dos cordeiros destinados ao abate estavam parasitados pela espécie B. ovis (HEATH et al., 1996).

À semelhança do que ocorre com B. caprae em caprinos, não existem dados na literatura brasileira sobre o ciclo biológico de B. ovis. Segundo Price e Graham (1997), o ciclo biológico dessa espécie completar-se-ia entre 32 e 34 dias, em condições experimentais.

Controle

A história do controle de piolhos de caprinos e ovinos é semelhante à de outras espécies de artrópodes ectoparasitas em outros hospedeiros. O controle fundamenta-se no uso de produtos químicos, desde os produtos nicotínicos até os mais recentes inibidores do crescimento (TAYLOR, 2001). Como resultado dessa prática, falhas no controle e resistência aos produtos químicos têm sido detectadas, como por exemplo, a resistência de B. ovis a piretroides na Austrália (PLANT, 2006). Para o controle de B. ovis em ovinos, Taylor (2001) cita os seguintes produtos: diazinon, propetamphos, cipermetrina, deltametrina, fenvalarato, permetrina e amitraz, sem, no entanto, mencionar a dosagem recomendada. Ainda, segundo o autor, a doramectina, ivermectina e moxidectina injetáveis ajudariam no controle de B. ovis.

A situação do controle de B. caprae em caprinos é ainda mais grave, por causa do reduzido conhecimento sobre a relação parasito-hospedeiro e da inexistência de testes específicos com produtos químicos. Como consequência, é notória a utilização de doses e vias de aplicações usadas no controle de artrópodes que parasitam outros animais de produção, sem considerar as diferenças anatômicas e fisiológicas entre os caprinos e os outros animais de produção (TAYLOR, 2002). Nesse cenário, a resistência aos produtos químicos utilizados no controle de piolhos de caprinos é desconhecida (TAYLOR, 2002). Na África, o uso de inibidores do crescimento (diflubenzuron) tem demonstrado eficácia no controle de piolhos mastigadores de caprinos (FOURIE et al., 1995). Ressalta-se ainda que, no Nordeste do Brasil, a caprino-ovinocultura é mais intensamente praticada como forma de subsistência das populações pobres e são precárias as condições de manejo adotadas, e os criadores não utilizam nenhum programa específico para controle de piolhos.

Considerações finais

Os dados sobre a relação entre piolhos e caprinos até o presente, embora ainda reduzidos, indicam claramente que a parasitose causada por B. caprae é comum no Nordeste brasileiro e merece estudos mais aprofundados para se determinar sua importância real no segmento do agronegócio local e as consequentes medidas de controle. Dessa forma, dados a serem obtidos a curto prazo são: ciclo biológico, sazonalidade em outras regiões distintas daquelas mencionadas no item Bioecologia/Epidemiologia, intensidade parasitária nos diferentes sistemas de manejo e raças, possível sinergismo com outras ecto e endoparasitoses, perdas reais na produção e produtividade, e testes com piolhicidas químicos e naturais.

Em relação aos ovinos, o quadro ainda é mais precário, pois não se conhece a real extensão do parasitimo por piolhos nesses hospedeiros.

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Capítulo 12
Sarnas

Ana Carolina de Souza Chagas

Introdução

Sarnas são afecções cutâneas, de ampla distribuição geográfica, ocasionadas pela atividade patogênica de diferentes espécies de ácaros (Tabela 1) que acometem caprinos e ovinos de qualquer idade ou sexo, além de outros animais de produção (SANTOS et al., 2004). A sarna sarcóptica, por exemplo, que é a mais comum, ocorre no Brasil e em várias regiões do Oriente Médio, Índia e África (URQUHART et al., 1996).

Tabela 1. Ácaros causadores de sarna em caprinos e ovinos.

Agente etiológico

Hospedeiro

Sarcoptes scabiei var. caprae

Caprino

Sarcoptes scabiei var. ovis

Ovino

Psoroptes equi var. caprae

Caprino

Psoroptes equi var. ovis

Ovino

Psoroptes cuniculi

Caprino/ovino

Demodex caprae

Caprino

Fonte: Costa e Vieira (1984a).

Os custos decorrentes da aquisição de medicamentos e da mão de obra são os prejuízos diretos mais significativos (MARTINEAU et al., 1985). No Brasil, a doença é considerada de maior importância econômica nas criações de ovinos lanados (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006) e na indústria coureira, visto que o País tem um mercado potencial para produtos derivados da pele de pequenos ruminantes (BRITO et al., 2005). Entretanto, grande parte dos couros não atende às exigências de uniformidade e de qualidade do mercado e da indústria de curtimento (VILLARROEL et al., 2004).

Nos animais infestados, podem ser observados nódulos e crostas que abrigam os parasitas. A irritação causada pelo ato de se coçar diminui a ingestão de alimentos, e consequentemente o ganho de peso e a eficiência produtiva do rebanho, além de causar depreciação no couro e queda na produção de lã.

A ocorrência da doença nos animais está diretamente relacionada à atenção dada pelo produtor ao manejo sanitário do rebanho adotado na propriedade. As sarnas são mais frequentemente observadas em sistema de produção intensivo. Segundo Silva et al. (2001), as ectoparasitoses são mais frequentes em animais confinados, pois a proximidade obrigatória imposta pelo sistema facilita a transmissão dessas doenças, que normalmente ocorrem por contato.

Sarna sarcóptica

Esta sarna atinge todos os animais domésticos e também o homem, sendo conhecida como escabiose. O agente etiológico é Sarcoptes scabiei var. caprae e Sarcoptes scabiei var. ovis. É um ácaro de corpo arredondado. As fêmeas possuem comprimento médio de 0,30 mm a 0,35 mm, apresentam caracteristicamente numerosas estrias transversais e escamas triangulares no dorso, e as patas são curtas, ultrapassando a borda do corpo. Quando fertilizada, escava galerias na pele e alimenta-se de linfa no estrato germinativo. Durante 2 meses, ela ovipõe nas galerias em intervalos de 2 a 3 dias. Após 5 dias, as larvas hexápodas eclodem e deslocam-se para a superfície da pele, onde se alimentam e se abrigam. Primeiro ocorre ecdise para ninfas octópodes, depois para machos e fêmeas imaturas, as quais, após a cópula, passam por nova ecdise para fêmeas adultas. Estas, já fertilizadas, reiniciam o ciclo (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006).

A transmissão faz-se por contato, e os ácaros provocam coceira intensa, queda de pelos, escoriações por fricção e arranhaduras, bolhas avermelhadas e secreções que, após secarem, formam crostas ou cascas. Atingem mais a região da cabeça, ao redor dos olhos e narinas. No caso dos ovinos lanados, os ácaros ocorrem preferencialmente em regiões sem lã, como cabeça e extremidades das patas (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006). Em caprinos, a doença pode ser considerada crônica e denominada “doença de pele” por muitos meses, antes de um diagnóstico preciso (URQUHART, 1996).

No tratamento, deve-se retirar as crostas e utilizar solução sarnicida comercial associada à solução oleosa na proporção de 1:3 (uma parte de sarnicida + três de óleo mineral), repetindo em intervalo de 3 ou 4 dias. O banho de imersão é recomendado somente em casos extremos, por causa dos problemas ambientais e do perigo de intoxicação do animal. Pode-se fazer banho de imersão ou aspersão com solução à base de organofosforado ou piretroide e repetir em 10 dias (VIEIRA et al., 1997). Nos casos em que o banho sarnicida se faz necessário, fornecer água e alimentação aos animais pelo menos 5 horas antes, para impedir que bebam ou lambam o líquido. Deve-se evitar banhar animais doentes e banhá-los preferencialmente pela manhã. Fêmeas em adiantado estado de gestação e filhotes com menos de 1 mês de idade não devem ser banhados.

Pode-se utilizar uma única dose de ivermectina 1% injetável (0,5 mL/25 kg) ou de doramectina 1% (1 mL/33 kg) ou duas doses com intervalo de 7 dias de moxidectina 1% (0,5 mL/25 kg), conforme indicação dos fabricantes.

Sarna psoróptica

Psoroptes é um ácaro não escavador com cerca de 0,6 mm, de formato oval e com patas que se projetam além da margem do corpo. Possui peças bucais pontiagudas, tubérculos abdominais arredondados nos machos e pedicelos triarticulados. Nas fêmeas, as patas I, II e IV terminam em longos pré-tarsos, e as patas III terminam em longas setas subterminais (Figura 1). Nos machos, as patas I, II e III terminam em longos pré-tarsos, tendo este último uma longa seta subterminal; as patas IV são menores e sem ventosas. O desenvolvimento de ovo a adulto leva cerca de 10 dias. As fêmeas ovipõem aproximadamente 90 ovos durante quatro a seis semanas (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006). A doença pode ser causada pelo Psoroptes equi var. caprae, Psoroptes equi var. ovis e Psoroptes cuniculi. Este último acomete tanto caprinos quanto ovinos.

Figura 1. P. cuniculi coletado do conduto auditivo de caprino. Momento da cópula (A); fêmea com indicação da longa seta subterminal no terceiro par de patas (B).

Fotos: Ana Carla Diógenes Suassuna Bezerra

Conforme Urquhart et al. (1996), as peças bucais perfurantes e mastigadoras podem lesar a pele dos animais. Estes ácaros acometem mais os ovinos e situam-se preferencialmente no ouvido, mas a localização varia de acordo com a estação do ano na região Sul do Brasil. Na primavera, localizam-se em estado quiescente na axila, virilha, fossa infraorbitária e superfície interna dos pavilhões auriculares, e canal auditivo. No inverno, espalham-se pelo resto do corpo, quando o velo fica mais espesso nos ovinos lanados.

No início, a infecção assemelha-se a uma zona de inflamação com pequenas vesículas e exsudato seroso, o qual se mistura com sujeiras e solidifica-se formando escamas amarelo-acinzentadas. A zona de inflamação pode apresentar também manchas de sangue. As bordas das lesões são úmidas com ácaros em multiplicação, os quais avançam gradativamente. No local, a lã vai ficando mais clara e cai quando o animal se coça. P. equi var. ovis tem grande importância nas criações de ovinos para produção de lã de alta qualidade (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006).

Segundo Vieira et al. (1997), o animal afetado no ouvido por P. cuniculi apresenta coceira intensa no pavilhão auricular e crostas quebradiças na orelha. A infecção pode causar otite e meningite séptica, e os animais podem andar em círculos. Em estudo realizado na Baixada Maranhense (SANTOS et al., 2004), foi observado aumento do cerúmen, secreção purulenta de coloração amarelada, e crostas escamosas secas e úmidas de coloração esbranquiçada. Os sinais clínicos observados nos ovinos foram prurido intenso, movimentos desordenados de cabeça, inquietação, secreção purulenta, além de permanente isolamento do resto do rebanho e conservação da cabeça inclinada para o lado lesionado. Nesse estudo, os autores detectaram 14,77% de prevalência para ectoparasitoses nos 88 ovinos deslanados inspecionados, sem raça definida. Destes, 76,92% eram de Rhipicephallus (Boophilus) microplus e 15,38% de P. cuniculi.

Em outro levantamento feito com ovinos e caprinos na microrregião de Alto Mearim e Grajaú no Maranhão, observaram-se a presença de R. (B.) microplus e do piolho Bovicola caprae e a ausência de ácaros (GUERRA et al., 2004). Bavia et al. (1984) também verificaram em caprinos alguns dos sinais clínicos supracitados. Em levantamento realizado por Cardoso e Oliveira (1993) na Grande Porto Alegre, P. cuniculi foi registrada pela primeira vez em caprinos do estado e foi uma das espécies de ectoparasitas mais prevalentes. Conforme as observadas por Faccini et al. (1981). Os autores não observaram manifestações clínicas, conforme as observadas por Faccini et al. (1981). Segundo Georgi (1988), P. cuniculi produz uma forma menos severa de acaríase em caprinos e equinos.

Os animais com ácaros em fase quiescente são reservatórios da doença quando introduzidos em propriedades livres de infestação, tendo, dessa forma, importância epidemiológica. Os ácaros podem permanecer vivos nas instalações por uma semana. Por medida de segurança, pode-se considerar que as instalações estarão livres de infestação três semanas após a remoção dos ovinos. A doença possui disseminação rápida no rebanho, por isso foram adotadas medidas rigorosas de controle na Europa e em outras regiões, tais como inspeção periódica dos rebanhos, restrição de deslocamento de animais em áreas com diagnóstico da doença e banhos de imersão em épocas prescritas. Essas medidas permitiram a erradicação da doença em muitas regiões (URQUHART et al., 1996).

No caso de infestações pontuais, como no ouvido, deve-se fazer limpeza local, retirando todas as crostas, e utilizar sarnicida comercial em solução oleosa na proporção de 1:3. A aplicação da solução deve ser feita uma vez durante cinco dias, interrompida por três dias e repetida por cinco dias (ROSA, 1996). Se necessário, utilizar demais tratamentos conforme já descrito.

A otocaríase psoróptica causada por P. cuniculi foi registrada em caprinos criados na Bahia (FACCINI; PADILHA, 1980; ROCHA et al., 1984), em Pernambuco e no Piauí (FACCINI; PADILHA, 1980). Costa e Vieira (1984b) encontraram P. cuniculi em 36% dos 551 caprinos examinados na cidade de Sobral, CE, ainda observaram casos clínicos de otocaríase em 1,22% dos caprinos. Verificaram também a redução drástica nas taxas de parasitismo de P. cuniculi com o início das chuvas, em janeiro, e sua maior prevalência nos meses secos. Recentemente, Bezerra (2007) realizou levantamento da prevalência de ectoparasitas em caprinos e ovinos no Município de Mossoró, Estado do Rio Grande do Norte, e detectaram a presença de P. cuniculi em 0,4% dos 494 caprinos examinados.

Sarna demodécica

A sarna demodécica é causada pelo ácaro Demodex, sendo conhecida também como sarna folicular ou do folículo piloso. Esse ácaro tem o corpo afilado e alongado, mede entre 0,1 mm e 0,4 mm e possui 4 pares de patas curtas e telescopadas na região anterior do corpo. Vive todo o ciclo evolutivo preferencialmente nos folículos pilosos e nas glândulas sebáceas. As fêmeas fecundadas aprofundam-se no folículo, alimentam-se do líquido extravasado das células e ovipõem no fundo do folículo. Após a eclosão, as larvas hexápodas migram para a superfície da pele, alimentam-se e mudam para protoninfa, depois para deutoninfa e finalmente para adultos machos e fêmeas. Nesta fase, posicionam-se de cabeça para baixo e penetram cada vez mais na derme, o que dificulta a ação dos sarnicidas (SERRA-FREIRE; MELLO, 2006).

É mais rara em ovinos, restringindo-se à região da face. Já os caprinos afetados por Demodex caprae apresentam nódulos na pele próxima ao pescoço, peito, flancos e tórax, que podem, mais raramente, alcançar todo o corpo. Esses nódulos chegam a medir até 2 cm de diâmetro e possuem em seu interior substância caseosa amarelada com grandes quantidades de ácaros.

Torres (1945) realizou um dos primeiros registros de ectoparasitas de pequenos ruminantes no Nordeste brasileiro: em estudo feito em Pernambuco e Bahia detectou a presença de D. caprae em caprinos. Posteriormente, Silva et al. (1974) também registraram a presença de D. caprae em caprinos no Sertão Pernambucano.

A depreciação do couro caprino foi registrada por Padilha et al. (1980). Parte significativa do couro produzido na Bahia e no Piauí foi classificada na quarta categoria, em razão da presença de demodicose (Tabela 2).

Tabela 2. Classificação de peles procedentes dos estados da Bahia e do Piauí, considerando a presença de demodicose.

Estado

No de peles examinadas

No de peles positivas

(%)

Classificação

2a

3a

4a

Bahia

986

48

4,9

3

9

36

Piauí

1.525

139

9,1

12

23

104

Fonte: Padilha et al. (1980).

Para o tratamento dessa doença, deve-se seguir os procedimentos já descritos. Como este tipo de sarna está associado à imunossupressão, o tratamento pode ser insatisfatório em alguns casos (ROSA, 1996).

Prevenção

No caso específico das ectoparasitoses, o monitoramento constante dos animais é um procedimento extremamente importante no diagnóstico. A visualização de sinais clínicos facilita a detecção da doença no rebanho. Durante o manejo dos animais para pesagem, casqueamento e outros, deve-se observá-los cuidadosamente com relação à existência de crostas, escamas e deformidades no couro ou na lã. O comportamento dos animais também deve ser monitorado, pois inquietação e mordidas no próprio pelo podem ser fortes indicativos de ectoparasitoses. Animais adquiridos devem ser vistoriados antes da sua introdução no rebanho. As instalações devem ser bem arejadas, sem correntes de vento, com baixa variação de temperatura, sem radiação solar direta, sem poeira excessiva e com rotina de limpeza. As medidas preventivas devem ser priorizadas, porque a doença instalada pode comprometer o rebanho como um todo, provocando gastos com medicamentos, mão de obra e apoio técnico, além de prejuízos na atividade.

Referências

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Capítulo 13
Miíases

Maria Elisabeth Aires Berne
Neila Cilene de Medeiros Morais
Tiago Gallina Corrêa

Introdução

Miíase é definida como uma infestação de larvas de diversas espécies de dípteros em animais vivos. É classificada em miíase primária, quando as larvas se desenvolvem em tecidos vivos, e secundária, quando as larvas se desenvolvem em tecidos necrosados.

Miíases primárias

As larvas causadoras de miíases primárias são denominadas de biontófagas, pois somente se desenvolvem em tecidos vivos, em lesões recentes e/ou em cavidades naturais. No Brasil, as miíases primárias de maior importância em pequenos ruminantes são causadas principalmente por larvas dos dípteros: Cochliomyia hominivorax, responsável pela miíase primária cutânea, Dermatobia hominis, causadora da miíase furunculosa, e Oestrus ovis, que causa a miíase nasofaringeana.

Miíase primária cutânea

A miíase primária cutânea é causada por larvas de C. hominivorax, (Coquerel, 1858), que pertence à classe Insecta, ordem Diptera, família Calliphoridae. Esse díptero está presente em todo o continente americano, tendo sido erradicado nos Estados Unidos, México e alguns países da América Central (MOYA BORJA, 2003). As lesões cutâneas causadas por larvas desse díptero nos animais, conhecida popularmente como bicheira, acarretam grandes perdas econômicas à pecuária, em decorrência da desvalorização do couro, perda de peso e morte dos animais, e expressivos gastos com manejo e tratamento.

Esse díptero, na sua fase parasitária (larvas de primeiro, segundo e terceiro ínstares), atinge o tecido vivo a partir de lesões recentes (cortes na pele, castração, descola e marcação) e/ou de cavidades naturais (cavidade gengivo-alveolar, vulva, prepúcio, umbigo de recém-nascidos, narinas e pavilhão auricular) (GUIMARÃES; PAPAVERO, 1999).

Morfologia

Os adultos de C. hominivorax caracterizam-se, principalmente, por serem moscas de tamanho médio, 8 mm a 10 mm, com coloração preto-azulada, de tom intenso, com reflexos verde e violeta. Possuem olhos alaranjados e três faixas longitudinais pretas no tórax; fêmea com basicosto pardo escuro, sem cerdas fronto-orbitais, parafaciália com pelos pretos e porção inferior da parafrontália com pelos amarelos e escuros.

As larvas logo após a eclosão (primeiro ínstar) medem de 1 mm a 1,2 mm. Alimentam-se, crescem e atingem o terceiro ínstar medindo de 15 mm a 16 mm. As larvas têm aspecto vermiforme, de cor branca ou rosada, são segmentadas, com pequenos espinhos no tegumento. As larvas de terceiro ínstar apresentam tubos traqueais pigmentados, facilmente observados nos últimos três ou quatro segmentos (Figura 1), ganchos orais bem desenvolvidos (Figura 2) e espiráculos respiratórios com peritrema incompleto, de cor escura com três fendas retas e ovaladas (Figura 3).

Figura 1. Tubos traqueais da larva de C. homonivorax.

Fotos: Tiago Gallina Corrêa

Figura 2. Ganchos orais da larva de C. hominivorax.

Figura 3. Espiráculos respiratórios da larva de C. hominivorax.

Ciclo biológico

As condições ideais para o desenvolvimento de C. hominivorax são temperaturas médias entre 20 °C e 30 ºC e umidade relativa do ar superior a 70%, portanto a população dessas moscas é maior no período chuvoso (regiões de clima tropical) e nos meses mais quentes do ano (regiões de clima temperado).

O desenvolvimento de C. hominivorax ocorre em duas fases. A fase parasitária inicia-se quando a mosca adulta, atraída por odores de lesões recentes ou secreções dos animais vivos, deposita a média de 200 ovos nas bordas de lesões ou em orifícios naturais (Figura 4).

Figura 4. Postura de ovos de C. hominivorax no canto do olho de um ovino.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

As larvas de primeiro ínstar emergem do ovo de 12 a 24 horas após a oviposição, são pouco visíveis e de coloração branca. Imediatamente após a eclosão, alimentam-se, passando para os ínstares dois e três. O período de desenvolvimento larval ocorre entre 5 e 9 dias. As larvas de terceiro ínstar abandonam o hospedeiro, iniciando nesse momento a fase não parasitária. Por um fototropismo negativo penetram no solo (2 cm a 3 cm) para pupar (FONSECA; OLIVEIRA, 1981). Após 24 horas, já penetradas no solo, apresentam a cutícula enrijecida e de coloração marrom. O solo deve ter umidade moderada para o desenvolvimento dessa fase. Solos muito secos levam à desidratação e morte das pupas; e solos muito úmidos, com excesso de água, também podem ocasionar a sua morte. A duração do período pupal depende das condições de temperatura e umidade, podendo nos meses quentes (verão) ocorrer em 7 a 8 dias e, nos meses frios (inverno), em 43 dias (OLIVEIRA, 1986a). Os adultos emergem do pupário e, em 24 horas, os machos já estão maduros para fertilizar as fêmeas. Estas somente estarão maduras aos 2 ou 3 dias de vida. Quatro dias após a fertilização, podem realizar a oviposição, a qual pode se repetir até quatro vezes, totalizando a média de 3.000 ovos por fêmea.

As fêmeas vivem aproximadamente de três a quatro semanas e têm capacidade de se deslocar por longas distâncias, podendo atingir até 350 km durante seu período de vida (OLIVEIRA, 1986a; MOYA BORJA, 2003).

Patogenia e sinais clínicos

A miíase por C. hominivorax é uma das principais enfermidades da pele dos animais domésticos e caracteriza-se por lesão com várias larvas e presença de secreção serossanguinolenta fétida. As fêmeas depositam grande quantidade de ovos, que eclodem e liberam larvas que se alimentam do tecido subcutâneo, causando lesões nos tecidos vivos. A evolução da doença é muito rápida, as larvas, por meio de seus ganchos e enzimas proteolíticas presentes na saliva, destroem rapidamente o tecido muscular. As lesões formadas exalam odor desagradável, que pode servir de atrativo para novas posturas da mesma mosca e até de outras, responsáveis por miíases secundárias. As lesões, quando não tratadas, evoluem consideravelmente e, em poucos dias, conforme a magnitude da destruição dos tecidos, pode levar à morte do animal. Dependendo da localização, podem causar cegueira, peritonite, manqueira, afecções dentárias, genitais, etc. As infecções bacterianas podem estar presentes nessas lesões (OLIVEIRA et al., 1982).

Os animais infestados apresentam alterações de apetite, mostram-se inquietos e perdem peso. Os recém-nascidos com infestação do umbigo podem morrer em poucos dias se não tratados. Os sintomas mais evidentes nos animais infectados por larvas de C. hominivorax são a presença de feridas abertas com mau cheiro e sangramento e a presença de várias larvas (Figura 5). Também podem ocorrer invasões secundárias (bactérias Gram+ e Gram-), com a instalação de infecção purulenta, levando a um quadro clínico mais grave.

Figura 5. Larvas de terceiro ínstar de C. hominivorax em lesão cutânea.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

Profilaxia

As principais medidas profiláticas baseiam-se na inspeção constante dos animais, principalmente nos meses de maior população de moscas adultas. Nas regiões de clima tropical, ela deve ser realizada no período chuvoso e, nas de clima temperado, nos meses mais quentes do ano. Nessa inspeção, devem ser tratados todos os ferimentos dos animais, utilizando repelentes e cicatrizantes. Os animais com ferimentos devem ser observados diariamente. No caso de animais com miíase, o tratamento com substâncias larvicidas, a limpeza do local com a retirada das larvas e a aplicação de substâncias repelentes e cicatrizantes são recomendadas.

Para evitar as miíases umbilicais, é importante que a parição ocorra em área de fácil acesso para inspeção (pela manhã e tarde) dos recém-nascidos. Todos os umbigos deverão ser submetidos a tratamento com uma solução de iodo a 10%. Nos animais confinados e semiconfinados, manter rigorosa higiene e limpeza das instalações. Animais mantidos livres de miíases e em locais limpos atrairão menos moscas, tanto as causadoras de miíases primárias como as de secundárias.

Cercas de arame farpado deverão ser substituídas por cerca de arame liso ou elétrica, para evitar ferimentos nos animais. As instalações (bretes, mangueiras, porteiras, apriscos, cercas, etc.) deverão ser inspecionadas para a retirada de pregos e outros objetos cortantes.

As pastagens devem ser mantidas limpas, com lotação adequada, e os machos com caráter mais agressivo em separado para evitar brigas. Durante o manejo dos animais, não usar objetos que possam causar lesões e ter cuidado na utilização de cães no manejo.

Tratamento

Antes de iniciar o tratamento com produtos químicos, deve-se realizar a tricotomia e a lavagem com água e sabão da região afetada, fazendo a retirada das larvas. Aplicar solução de iodo a 10% e repelente para evitar que outras moscas façam posturas nas lesões.

No tratamento tópico, devem ser utilizados vários compostos químicos, em diferentes formulações, com ação inseticida (pó, unguento e spray), como os organofosforados (coumafós, o triclorfon e o clorpirifós), associados com produtos bactericidas, antissépticos, cicatrizantes e adstringentes (MOYA BORJA, 2003).

No tratamento sistêmico, são utilizadas as avermectinas, abamectina e doramectina, com ação inseticida sobre as larvas. Esses produtos vêm sendo utilizados como curativo e/ou preventivo nos ferimentos cirúrgicos decorrentes de castração e descorna, e na prevenção de infecções umbilicais nos recém-nascidos (MOYA BORJA, 2003).

Miíase furunculosa

As larvas de D. hominis (Linnaeus Jr., 1781) são conhecidas por causar miíase primária cutânea nodular e furunculosa. Na América Central, é chamada popularmente de torsalo ou moycuil; na América do Sul, recebe diferentes denominações; no Brasil, é conhecida como berne; na Colômbia, como mucha; no Peru, como mirunta; e na Argentina, Paraguai e Uruguai, como ura (FORTES, 1997; URQUHART, 1990; MOYA BORJA, 1979).

A importância econômica desse díptero já é conhecida em toda a América Latina, está presente do México até a Argentina. É considerado o terceiro ectoparasita de vulto no Brasil – 94% dos municípios nacionais têm registrado a sua ocorrência (LOMBARDERO; FONTANA, 1968; ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD, 1983; MARQUES et al., 2000). De acordo com levantamentos realizados na pecuária nacional, no Nordeste do Brasil, região caracterizada por longos períodos de estiagem, a ocorrência desse ectoparasita é predominante no período chuvoso. Apesar da grande incidência no Brasil, sua presença nos estados do Amapá, Rondônia, Acre, Ceará, Rio Grande do Norte e Sergipe está condicionada a animais que já saíram de seus estados de origem infectados (HORN; ARTECHE, 1985).

No Brasil, os meses de maiores índices de parasitismo foram: março a abril no Paraná (MAGALHÃES; LESSKIU, 1982); outubro a dezembro em Minas Gerais (MAIA; GUIMARÃES, 1985); e setembro a janeiro no Rio Grande do Sul (OLIVEIRA, 1987). Essas larvas parasitam o homem e animais domésticos, como caprinos, ovinos, bovinos, caninos, suínos, felinos e raramente equinos (SILVA JÚNIOR et al., 1998).

Morfologia

São moscas grandes, com 10 mm a 13 mm de comprimento, olhos alaranjados, aparelho bucal atrofiado, tórax acinzentado, asas transparentes de cor cinza com célula apical estreita, abdome metálico de coloração azul e pernas pardas.

As larvas dessas moscas são parasitas de tecido subcutâneo de mamíferos e medem 2 cm de comprimento por 0,5 cm de diâmetro, em sua porção mais larga. Na porção posterior, que é a mais afilada, apresentam os espiráculos respiratórios e na porção anterior, a maior em circunferência, apresentam as peças bucais com um par de ganchos orais (Figura 6), para fixação no tecido do hospedeiro. O corpo tem várias fileiras de espinhos curvos e voltados para a parte mais afilada da larva, porém os quatro últimos segmentos não apresentam espinhos (Figuras 7 e 8).

Figura 6. Porção anterior de D. hominis, com os ganchos orais em evidência.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

Figura 7. Vista ventral da larva madura de D. hominis.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

Figura 8. Vista ventral da larva jovem de D. hominis.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

Biologia e ciclo biológico

Todo o alimento da mosca é adquirido durante o período larval, ela não se alimenta na fase adulta. Apresenta metamorfose completa, com fases de ovo, larva, pupa e adulto. Copula logo após o nascimento, e a fêmea fecundada procura outros dípteros para realizar a postura (foresia). Como a mosca só se desloca durante o dia, o vetor de seus ovos deve apresentar hábitos diurnos. Também é necessário que seja de menor tamanho e moderadamente ativo, para facilitar a apreensão, contenção e postura da D. hominis, e tenha características zoofílicas para que, ao eclodirem, os ovos cheguem mais facilmente aos hospedeiros.

Os vetores considerados mais importantes são Sarcopromusca pruna, Stomoxys calcitrans, Musca domestica, Fannia pusio e Haematobia irritans, no entanto são conhecidas mais de 50 espécies de foréticos (BRUM et al., 1996; GOMES et al., 1998; LEITE et al., 1998; MOYA BORJA, 2003; OLIVEIRA, 1986b; RODRÍGUEZ-VIVAS; DOMÍNGUEZ-ALPIZAR, 1998). São depositados de 20 a 40 ovos, que aderem à região ventral do abdome do vetor graças a uma substância cimentante, da qual os ovos já saem embebidos, solidificando-se rapidamente ao entrar em contato com o ar. Os ovos têm um período médio de incubação de 5 a 7 dias, com temperatura em torno de 27 oC e umidade relativa do ar de 80%.

As larvas permanecem nos ovos até o vetor pousar no hospedeiro e, quando estimuladas pela temperatura corpórea externa do animal, abandonam a casca e penetram na pele íntegra ou lesada, alojando-se no tecido subcutâneo; causando a miíase furunculosa. As larvas dentro do tecido do hospedeiro sofrem duas mudas e, quando maduras, abandonam o hospedeiro, caem ao solo; e então ocorre o período pupal, que dura uma média de 25 a 132 dias, dependendo da temperatura (temperaturas baixas aumentam o período pupal). As moscas adultas emergem do pupário nas horas mais quentes do dia e, poucas horas depois de emergirem, já estão aptas à cópula, que pode ocorrer várias vezes ao dia. A postura começa já no dia imediatamente à cópula. O ciclo completo da D. hominis dura em torno de 77 dias.

Patogenia e sinais clínicos

A fase larval deste díptero desenvolve-se no tecido subcutâneo, provocando o aparecimento de um nódulo parasitário na área onde a larva está localizada. Se vários destes se unem, forma-se uma placa com tecido conjuntivo fibroso que prejudica a irrigação local, podendo haver contaminação secundária, o que debilita o animal parasitado. Externamente, a lesão tem aspecto nodular, com orifício central. A penetração da larva causa dor, inflamação local e formação gradual de pus. A movimentação da larva causa dor, inquietação e irritação. Esses nódulos podem ulcerar e ser invadidos por bactérias ou mesmo larvas causadoras de miíases secundárias (CRAMER-RIBEIRO et al., 2002; FORTES, 2004; SILVA et al., 1995; VIDOTTO, 2002).

Curiosamente, a larva deste díptero, quando parasita caprinos, promove uma reação inflamatória, caracterizada pela presença de um nódulo que não pode ser tratado. Nesse caso, a tentativa de retirar a larva do berne não apresenta bons resultados, pois ocasiona uma infecção bacteriana local.

Diagnóstico

O diagnóstico clínico é feito pela visualização dos nódulos ou lesões, de onde se pode extrair a larva de D. hominis; e o diagnóstico laboratorial, pela identificação da larva mediante os caracteres morfológicos (FORTES, 2004).

Tratamento controle

A D. hominis até o presente momento não foi erradicada em nenhum país, como já ocorreu com outros dípteros causadores de miíases, em razão da falta de conhecimento de muitas variáveis biológicas desse inseto.

Atualmente o controle da miíase causada por D. hominis é feito basicamente com produtos químicos. As formas de aplicação são as mais variadas: pour on, spot on, oral, subcutânea, intramuscular e pulverização. Entretanto, em virtude da diversidade de hospedeiros e de foréticos, bem como do tipo de exploração, que na maioria das regiões é extensivo, apresentam resultados variáveis. (MOYA BORJA, 2003).

As avermectinas são utilizadas para controle do berne e deixam os animais livres de infestação por até 70 dias (SILVA NETTO et al., 2001). Doses de 200 mcg/kg, peso vivo, seja de abamectina, ivermectina ou doramentina, mostram-se eficazes no controle de todos os ínstares deste díptero (GUIMARÃES; PAPAVERO, 1999). Os organofosforados ainda não apresentaram resistência, sendo utilizados frequentemente em diferentes formulações (MOYA BORJA, 2003).

Em relação ao controle biológico, têm sido encontrados alguns microimenópteros, tais como Trichopria (Ashmeadropia) mendesi, Spalangia nigroaenea e Tachinaephagus zealandicus parasitando pupas de D. hominis.

Algumas espécies de formigas, como Solenopsis germinata, S. invicta, Steatoma quadridens e Pheidola fallax, já foram observadas predando larvas e pré-pupas deste díptero. O ácaro Macrocheles muscadomesticae foi encontrado sobre pupas e adultos de D. hominis, e é possível que um grande número desses ácaros possam dificultar a cópula e a captura de vetores (MOYA BORJA, 2004).

Miíase nasofaringeana

Oestrose é uma miíase primária causada por larvas da mosca Oestrus ovis (Lineu, 1761), da família Oestridae, cuja enfermidade é conhecida como falso torneio, ou popularmente, como bicho da cabeça. Larvas de primeiro, segundo e terceiro ínstares localizam-se nas fossas nasais e seios frontais de ovinos e caprinos.

O parasitismo por larvas deste díptero ocorre, especialmente, em áreas do sul da Europa, América do Sul e África (BAUER et al., 2002), associado à presença de rebanhos ovinos e caprinos. Este díptero causa perdas econômicas expressivas nas regiões criadoras de ovinos. O desconforto causado pelo inseto adulto, ao se aproximar das narinas dos animais, e o desenvolvimento das larvas nas cavidades nasais e seios frontais pode produzir danos severos para a saúde do animal e, em consequência, para a produção de carne e leite (ALCAIDE et al., 2003).

Morfologia

Os adultos de O. ovis apresentam cabeça larga com antenas curtas, asas transparentes, pernas curtas e com tonalidade amarelada, abdome preto com brilho prateado e numerosos pelos finos e longos na face ventral e extremidade distal. Medem cerca de 10 mm a 12 mm de comprimento. As larvas de primeiro e segundo ínstares medem 1 mm e 4,5 mm de comprimento respectivamente; já as larvas de terceiro ínstar medem em torno de 20 mm a 25 mm de comprimento e, quando maduras, apresentam faixas transversais escuras no dorso de cada segmento (Figura 9). A extremidade anterior é atenuada, e a posterior truncada. Na face ventral, encontram-se espinhos, dispostos em nove fileiras (Figura 10). No último segmento, estão as placas estigmáticas, que têm o formato da letra “D” (Figura 11). Ganchos orais são bem desenvolvidos (FORTES, 2004).

Figura 9. O. ovis, com faixas escuras à mostra.

Fotos: Tiago Gallina Corrêa

Figura 10. O. ovis, vista ventral, com ganchos orais e espinhos ventrais em evidência.

Figura 11. O. ovis, porção posterior da larva com os espiráculos respiratórios em forma de "D".

Biologia e ciclo biológico

As larvas de primeiro, segundo e terceiro ínstares são parasitos obrigatórios dos seios frontais e fossa nasal dos hospedeiros, que são os ovinos e caprinos, principalmente. Os insetos adultos têm maior atividade no período do verão e, sobretudo, nas horas mais quentes do dia, quando pousam sobre as instalações agropecuárias, durante o amanhecer e entardecer (ALCAIDE et al., 2003).

A fase parasitária inicia-se quando as moscas adultas de O. ovis depositam as larvas de primeiro ínstar nas narinas dos ovinos e caprinos. As larvas deslocam-se em direção aos cornetos nasais e, posteriormente, aos seios nasais e frontais, completando o período de parasitismo entre 25 a 35 dias, o qual pode atingir de 4 a 5 meses. Os períodos mais longos devem-se à fase de quiescência das larvas de primeiro ínstar durante o inverno. No estágio final de seu desenvolvimento no hospedeiro, as larvas de terceiro ínstar são expelidas para o ambiente, onde iniciam o estágio de pupa, que dura em média três a seis semanas em temperaturas entre 20 °C e 30 ºC e pode se estender por mais alguns meses em temperaturas baixas (FORTES, 2004). Os adultos que emergem das pupas não se alimentam e vivem em média duas semanas, período em que buscam, nas horas mais quentes do dia, os ovinos e caprinos para depositarem suas larvas nas fossas nasais. Cada fêmea pode larvipor cerca de 500 larvas durante a vida (RIBEIRO et al., 1998).

Patogenia e sinais clínicos

Os animais mostram-se inquietos pela aproximação das moscas, que tentam depositar suas larvas nas narinas dos hospedeiros, o que os leva a esconder as narinas na lã de outros ovinos, na vegetação ou no chão, deixando inclusive de se alimentarem (RIBEIRO et al., 1998).

A migração das larvas pela mucosa nasal provoca intensa irritação e prurido, desencadeando a produção de secreção serosa, que pode chegar a um esxudato mucopurulento. Os animais espirram constantemente.

Os sinais neurológicos, como andar cambaleante, inquietação, vertigem e movimentos bruscos da cabeça, são relativos à compressão ocasionada pelo processo inflamatório dos seios frontais, desencadeado pela irritação dos tecidos, causada pela presença abundante das larvas. Há perda de apetite e de peso, que, em casos mais graves, em altas infestações, pode levar ao estado de caquexia e à morte (FORTES, 2004).

Diagnóstico

O diagnóstico é feito pelos sinais clínicos e pela identificação das larvas. Deve-se sempre levar em conta o diagnóstico diferencial de coenurose ou torneio verdadeiro, causado pela presença da forma larval do cestódeo Multiceps multiceps, o Coenuros cerebralis. Este, alojado no cérebro, provoca compressão local, e o animal tende a girar, porém, sempre para o mesmo lado.

Além disso, deve ser considerada a verminose pulmonar por Dictyocalus, pois sinais clínicos do sistema respiratório superior, como espirros provocados pela presença de secreção e larvas desses helmintos, podem confundir o clínico durante o exame físico do animal. Para o diagnóstico diferencial, deve-se fazer a busca de larvas de Dictyocalus filaria, usando a técnica de Baermann.

Controle

As medidas de controle baseiam-se na eliminação das larvas da cavidade nasal, com a utilização de produtos químicos à base de closantel, nitroxinil, rafoxanida, ivermectin, doramectina, moxidectin e organofosforados, como: triclorfon e diclorvós (RAMOS et al., 2006).

Em regiões de clima frio, nas propriedades com casos de oestrose, recomenda-se tratar os animais no início do inverno, visto que a possibilidade de reinfecção é menor nesse período (RAMOS, 2006).

Miíases secundárias

No grupo das miíases secundárias, provocadas por larvas necrobiontófogas, as quais se desenvolvem em carcaças e em tecidos necrosados de animais vivos, as mais importantes são as causadas por larvas da família Calliphoridae, com as espécies Chrysomya albiceps e Cochliomyia macellaria. (GOMES et al., 2000; GUIMARÃES et al., 1978). Com menor frequência, podem ocorrer miíases secundárias por C. megacephala e Lucilia sericata (OLIVEIRA, 1985).

Em termos econômicos, a miíase cutânea primária causada por C. hominivorax é a mais importante, entretanto as moscas responsáveis por miíases secundárias, por parasitarem os tecidos necrosados de mamíferos vivos, agravam o quadro das miíases primárias já instaladas.

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Capítulo 14
Dermatite alérgica causada por Culicoides

Tiago Gallina Corrêa

Introdução

Culicoides são dípteros pertencentes à grande família Ceratopogonidae, cujos membros são conhecidos como mosquitos pólvora, maruins ou mosquitinho do mangue. Segundo Mellor et al. (2000), mais de 1.400 espécies de Culicoides são conhecidas em todo o mundo, das quais 96% atacam obrigatoriamente mamíferos (inclusive humanos) e aves. Esse gênero ocorre em todas as grandes massas de terra e, com exceção dos extremos polares, é encontrado do nível do mar até 4.000 m de altitude. Esses dípteros são vetores importantes de diversos patógenos, como vírus, protozoários e filarídeos. Além disso, sua picada dolorosa provoca intenso prurido e desconforto (CORRÊA et al., 2007).

Morfologia

Culicoides são dípteros pequenos, que medem de 1 mm a 4 mm de comprimento, têm pernas relativamente curtas e robustas, particularmente o par anterior, e antenas finas e filiformes, com 14 a 15 segmentos nas fêmeas; plumosas nos machos e não plumosas nas fêmeas. Os adultos podem ter coloração cinza a castanho-escura, com reflexos iridescentes. O tórax apresenta corcova dorsalmente coberta com marcas pretas em muitas espécies. A cabeça é pequena e os olhos são proeminentes, as asas são curtas e relativamente largas, cobertas de cerdas microscópicas. Em repouso, as asas dobram-se uma sobre a outra no abdômen e apresentam veia medial bifurcada (M1 e M2), mostrando padrões distintos nas células radiais da veia r-m (GUIMARÃES et al., 2001).

Biologia

Os ovos são pequenos, escuros e cilíndricos, e medem de 350 µm a 500 µm de comprimento. São depositados em massas de 30 a 450 ovos, dependendo do clima e do tipo de sangue do hospedeiro. Geralmente são depositados em locais úmidos, como pântanos e manguezais (Culicoides insignis, Culicoides furens e Culicoides maruin), e em vegetação em decomposição (MARCONDES, 2001). Eclodem, na maioria das espécies, dentro de 2 a 9 dias em condições favoráveis de temperatura, passando por quatro estádios larvais. As larvas são aquáticas, ocorrem numa variedade de habitats semissólidos, incluindo margens de lagos e riachos, água acumulada em orifícios de árvores, mangues e banhados, e alimentam-se de uma grande variedade de microrganismos e de material orgânico em decomposição. Em geral, Culicoides explora uma grande variedade de habitats úmidos, porém tende a utilizar áreas específicas nos locais de criação, distribuindo-se em áreas de maior ou menor concentração de umidade de acordo com a espécie (GUIMARÃES et al., 2001).

O desenvolvimento larval pode levar mais de 7 meses e, em regiões temperadas, há uma geração por ano. Em climas tropicais e subtropicais, ocorrem três ou quatro gerações por ano e o ciclo ovo-adulto leva cerca de 2 meses, dependendo da temperatura e da umidade (MARCONDES, 2001).

Somente as fêmeas são hematófagas e infligem uma picada dolorosa. Postura sem alimentação prévia, processo chamado autogenia, pode ser comum, porém todas as espécies anautógenas geralmente necessitam de uma alimentação sanguínea para a maturação da segunda postura e das posturas subsequentes. Os adultos de Culicoides não conseguem voar grandes distâncias, de modo que são encontrados geralmente próximos ao substrato larval. Contudo, foi registrado um alcance de vôo de 4 km para Culicoides variipenis (LILLIE et al., 1981).

Os adultos de Culicoides alimentam-se especialmente em dias nublados, úmidos, com pouco vento, e tendem a ser crepusculares ou noturnos (BISHOP et al., 2004), porém, algumas espécies alimentam-se durante o dia (FADOK; GREINER, 1990). As fêmeas são atraídas pelo odor e pelo calor dos hospedeiros, e algumas espécies são específicas e atacam exclusivamente ovinos, bovinos ou equinos (GUIMARÃES et al., 2001).

Importância médico-veterinária

São vetores biológicos de várias arboviroses de importância econômica, como vírus da Língua Azul, originária da África e hoje presente em quase todas as regiões zoogeográficas, acometendo principalmente ovelhas. O vírus da Língua Azul pode infectar o gado bovino, contudo a maioria das infecções é subclínica nesse hospedeiro. Em ovinos susceptíveis, essa enfermidade apresenta alto índice de morbidade (75%) e de mortalidade (20% a 50%). Algumas espécies de Culicoides demonstraram infecção experimental em laboratório, porém poucas foram capazes de transmitir o vírus, entre elas, as mais importantes são C. variipenis (América do Norte) e Culicoides imicola (África, Oriente Médio e sul da Europa) (MELLOR, 1990).

Culicoides e outros culicídeos podem ser vetores do vírus da Akabane Disease, que é uma arbovirose epizoótica que causa aborto, nascimentos prematuros, parto lento, artrogripose (malformação das articulações) e hidroencefalia em bovinos, ovinos e caprinos. Existem surtos epizoóticos descritos no Japão, Austrália, África, Ásia e Argentina (GUIMARÃES et al., 2001; MARCONDES, 2001).

Dermatite alérgica causada por Culicoides spp.

É uma dermatopatia estacional associada à picada desses insetos e afeta principalmente equinos e ovinos, além de bovinos, muares, caprinos, felinos e o homem (BRUMMER-KORVENKONTIO et al., 1994; EVANS, 1991; MASON; RIEK, 1953; YERUHAM et al., 1993).

No Rio Grande do Sul, a enfermidade tem sido diagnosticada em ovinos de vários municípios e de diversas raças, como Ideal, Corriedale, Crioula, Hampshire Down, Romney Marsh e Texel, com prevalência variável, podendo chegar a 80% (CORRÊA et al., 2007; SCHILD et al., 2003; SOUZA et al., 2005).

Os animais afetados apresentam dermatite, caracterizada pela presença de eritema multifocal e pápulas e pelo espessamento da pele com formação de crostas e alopecia. As áreas de pele mais frequentemente afetadas são ao redor dos olhos (Figura 1), orelhas, focinho, lábios, abdômen, períneo e membros; os pelos e a lã desprendem-se com facilidade nas regiões do corpo afetadas. Observam-se, também, prurido intenso, perda de peso, corrimento ocular e, em alguns casos, queratite com opacidade da córnea, podendo ocorrer infecções e miíases secundárias nas lesões de pele.

Figura 1. Ovino da raça Hampshire Down com lesão de dermatite alérgica na região periocular.

Foto: Tiago Gallina Corrêa

Em climas temperados, como no Estado do Rio Grande do Sul, os animais melhoram total ou parcialmente durante o inverno e, em climas tropicais, durante a seca. As lesões histológicas caracterizam-se por dermatite com infiltração da derme por eosinófilos, mastócitos e células mononucleares, edema e proliferação de tecido fibroso. Na epiderme, observam-se acantose e hiperqueratose, principalmente quando as lesões se tornam crônicas. A enfermidade foi diagnosticada como dermatite alérgica sazonal, e as lesões histológicas são características de um processo de hipersensibilidade tipo-I (CORRÊA et al., 2007; SCHILD et al., 1993).

A mortalidade é baixa, porém as perdas econômicas são consideráveis, uma vez que as lesões se disseminam pelo corpo do animal, danificando a lã e causando seu desprendimento. Observa-se acentuada perda de peso nos ovinos doentes, e alguns podem morrer em consequência de infecções secundárias graves.

Diagnóstico diferencial

A dermatite alérgica deve ser diferenciada de outras enfermidades que causam lesões de pele em ovinos, como a fotossensibilização causada pelas intoxicações por Brachiaria spp., Lantana spp. e Mioporum laetum. Nesses casos, as lesões são observadas principalmente nas áreas de pele desprovidas de lã e expostas ao sol.

Os sinais clínicos caracterizados por prurido intenso são semelhantes aos observados na sarna sarcóptica (SOUZA et al., 2005), na sarna psoróptica (BERNE; FARIAS, 2001) e, também, no scrapie (DRIEMEIER, 2001). Em animais jovens acometidos por ectima contagioso, podem ser observadas lesões crostosas ao redor do focinho e lábios, que podem, também, ser confundidas com dermatite alérgica.

Tratamento, controle e profilaxia

Nos Estados Unidos, o tratamento com ivermectina não resolveu lesões na região ventral de equinos afetados pela enfermidade (FADOK; GREINER, 1990). Esses autores observaram resposta variável ao utilizarem repelentes e corticoides. A estabulação dos animais a partir do período crepuscular e à noite é sugerida, pois coincide com o período de maior atividade de Culicoides spp. O uso de anti-histamínicos também tem sido recomendado, com resposta satisfatória (PORTUGAL et al., 1996; RIEK, 1953). Imunoterapia com antígenos preparados a partir de Culicoides spp. foi utilizada em equinos afetados pela enfermidade, entretanto, os resultados obtidos não confirmaram a eficiência do tratamento (BARBET et al., 1990). O mesmo procedimento foi utilizado em equinos, no Canadá, com redução significativa das lesões (ANDERSON et al., 1996).

Como medida profilática, deve-se restringir o acesso dos animais a locais de criadouros permanentes desses insetos, como áreas alagadiças, banhados e lavouras de arroz. A capacidade de voo desses dípteros é limitada tanto para longas distâncias (superiores a 4 km) como para velocidade de ventos superiores a 10 km/h. A pulverização dos ovinos com piretroides reduz o número de casos novos da doença, porém há necessidade de se repetir as aplicações semanalmente em épocas chuvosas e com altas temperaturas.

Referências

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Capítulo 15
Resistência parasitária

Marcelo Beltrão Molento

Introdução

A criação de pequenos ruminantes apresenta um momento particular no Brasil, com diversificação de subprodutos, importação de animais, produção orgânica e melhor consciência em relação ao bem-estar animal. Mesmo produtores que desenvolvem a atividade de maneira tradicional já observaram a necessidade de acompanhar as novas propostas. O controle sanitário é de responsabilidade do médico-veterinário, que deve estar atento às dificuldades inerentes ao emprego de técnicas hoje em desuso. Da mesma forma que o mercado pecuário enfrenta mudanças constantes, várias indicações técnicas geradas antes dos anos 1980 devem ser detalhadamente revisadas quanto a sua aplicabilidade (SANGSTER, 1999). O surgimento de compostos químicos capazes de eliminar grandes quantidades de parasita (internos e externos) dos hospedeiros é considerado um marco da tecnologia e é fator indispensável quando se estabelece um programa de controle. Embora exista alta tecnologia em relação ao desenvolvimento de compostos químicos lançados para controle parasitário, não se pode fazer a mesma afirmação quanto ao emprego desses produtos no campo (CHARLES; FURLONG, 1996, MOLENTO; ALMEIDA, 2004). Hoje, sabe-se que a frequência de utilização e a rápida alternância das drogas promovem a seleção de organismos aptos a suportar elevadas doses medicamentosas. Echevarria et al. (1993) determinaram que essa seleção pode ocorrer em poucas gerações no caso do parasita abomasal Haemonchus contortus.

A resistência às drogas demonstrada nos organismos é uma adaptação evolutiva que põe em risco todo e qualquer agente pesticida e parasiticida, independentemente de seu mecanismo de ação (SHOOP, 1993). No Brasil, após o primeiro relato de resistência em ovinos (SANTOS; GONÇALVES, 1967), outros casos foram descritos em vários estados de diferentes regiões do País (BARRETO et al., 2002; CHARLES et al., 1989; MELO, 2001; RAMOS et al., 2002; THOMAZ-SOCCOL et al., 2004; VERÍSSIMO et al., 2002; VIEIRA; CAVALCANTE, 1999). Atualmente buscam-se alternativas para sua rápida determinação, a fim de que seja feita a tomada de decisão, tanto no laboratório como no campo. Entre as novas estratégias, destaca-se a utilização do tratamento seletivo, realizado com base em uma avaliação clinicossanitária individual, seja pela coloração da conjuntiva para infecções causadas por H. contortus, seja pela determinação do escore da condição corporal do animal em casos de infecção por parasitas não hematófagos (MOLENTO et al., 2004a; VAN WYK; BATH, 2002). É imperativo que os médicos-veterinários e demais profissionais envolvidos com a saúde animal entendam como e porque ocorre o fenômeno da resistência parasitária e tenham condições de propor alternativas para controlá-la.

Resistência parasitária

Como definição, a resistência parasitária é o fenômeno que impede uma droga de manter a mesma eficácia contra os parasitas, se utilizada nas mesmas condições e após um determinado período de tempo. O diagnóstico será positivo para “resistência” quando determinada droga que apresentava redução acima de 99% da carga parasitária obtém redução inferior a 80% contra dado organismo depois de certo período de tempo (WOOD et al., 1995). Nesse mesmo caso, quando o percentual de redução no teste da contagem de ovos é próximo a 90%, sugere-se que o composto esteja em processo de resistência.

Existe consenso mundial de que a situação referente à resistência parasitária é alarmante, pois prejudica a produção de carne, leite e lã e a oferta de animais jovens. Preocupada com esse fato, a indústria farmacêutica continua fazendo grandes investimentos no desenvolvimento de drogas mais eficazes. No entanto, quanto maior a pressão de seleção da droga, mais acentuado será o processo de seleção para organismos resistentes (BARGER, 1995). E como não existem drogas 100% eficazes na eliminação de parasitas, em todas as ocasiões, em todos os animais, mesmo um pequeno número de parasitas sobreviventes será capaz de transmitir essa característica. No caso do H. contortus, se 50 fêmeas sobreviverem a determinado tratamento, logo após este, elas poderão eliminar, pelas fezes, mais de meio milhão de ovos por dia. Sabendo que a resistência parasitária é transmitida geneticamente, todos esses novos parasitas serão aptos a tolerar o composto, caso utilizado novamente.

Seleção natural versus seleção química

O processo natural de evolução criou uma enorme diversidade genética (organismos com equilíbrio polimórfico) nas populações parasitárias. Contudo, a sobrevivência dessa população dependia unicamente de dois fatores básicos: superar os desafios ambientais e encontrar uma população de hospedeiros para seu desenvolvimento e reprodução, com o singular objetivo de perpetuar a espécie. Observou-se que, após a ocorrência de algum efeito externo negativo – por exemplo, alteração climatológica drástica prolongada ou extinção de uma espécie animal ou ingestão de substância tóxica –, a população era obrigada a se adaptar às novas condições. Assim foram identificados organismos mais aptos a sobreviver sob determinados desafios, os quais transmitiriam essa informação a seus descendentes – a chamada seleção natural; desde então levando milhares de anos para que alguma característica mais marcante fosse alterada no genoma do organismo e gradativamente na população.

Com o surgimento dos compostos químicos, capazes de eliminar grandes quantidades de parasitas dos hospedeiros, todo esse processo foi acelerado. Contrário à seleção natural, esse tipo de “seleção” pode ocorrer após poucas gerações, em virtude principalmente da exposição constante desses organismos a altas doses de medicamentos (ECHEVARRIA et al., 1993).

O fenômeno da resistência parasitária química é inevitável, e a seleção é iniciada logo após a primeira exposição ao fármaco. O intervalo inicial (meses/anos) para que esse fenômeno aconteça irá depender da espécie do parasita, da pressão de seleção exercida pela droga utilizada e do tipo de manejo escolhido para cada situação. A resistência é, assim, transferida de geração para geração, dentro de uma determinada população.

O comportamento ideal de um produto antiparasitário deve obedecer principalmente duas características fundamentais: a) atingir índices de eliminação próximos a 99,99%; b) possuir longa persistência de seu efeito tóxico, com eliminação rápida dos metabólitos que comprovem a sua presença, isto é, ter efeito tóxico sem deixar resíduo por tempo prolongado. A isso se chama de efeito cauda, nesse caso “cauda curta”. Entretanto, a característica de eliminação rápida (b) só foi estabelecida com a chegada dos produtos na forma de bolus, de liberação constante e lenta, com efeito tóxico acima de 15 semanas, em que o fármaco é liberado por dissolução (Figura 1A). O efeito de cauda longa ocorre em produtos com ação prolongada, sendo a droga liberada por difusão (Figura 1B). Os produtos que atuam por difusão apresentam efeito tóxico entre duas a oito semanas contra parasitas adultos. O efeito tóxico da cauda longa, que é comum nas formulações comerciais disponíveis no mercado, foi apresentado como uma vantagem duradoura. A surpresa foi observar o aparecimento da resistência parasitária após pouco tempo de utilização desses compostos. Esse tipo de tecnologia promove dupla vantagem na permanência de indivíduos resistentes, por causa da eliminação de ovos resistentes por parasitas que sobreviveram ao tratamento e da intoxicação e eliminação de larvas susceptíveis durante a persistência de contrações tóxicas muito reduzidas da droga: efeito cauda longa (Figura 1B).

Figura 1. Característica da cinética plasmática para compostos com alta eficácia. Droga de liberação lenta e cauda curta (A); e droga com absorção rápida e cauda longa (B).

Fonte: Hennessy (1997).

Processo de seleção

A seleção parasitária ocorre de maneira gradativa e, caso não diagnosticada precocemente, somente será detectada quando forem observados sinais clínicos nos animais. Os primeiros relatos do aparecimento de organismos resistentes datam da década de 1960, com a diminuição da eficácia do benzimidazole ao H. contortus (DRUDGE et al., 1964). Logo em seguida surgiram relatos para as drogas do mesmo grupo químico, albendazole e mebendazole, caracterizando o que se denomina de resistência lateral. No Brasil, no decorrer dos anos 1970 e 1980, surgiram relatos de diminuição da eficácia de diferentes bases farmacológicas em uma mesma propriedade. Hoje, esse fenômeno ocorre ante todos os compostos químicos, com graves consequências econômicas no mundo todo (Tabelas 1 e 2). A esse fenômeno dá-se o nome de resistência cruzada, quando são envolvidas duas drogas distintas, e resistência múltipla ou ainda resistência anti-helmíntica múltipla (RAM), quando mais de duas bases farmacológicas são diagnosticadas (CONDER; CAMPBELL, 1995).

Tabela 1. Primeiros relatos de resistência anti-helmíntica em nematodas de ovinos com modo de ação diferente.

Ano

País

Produto

Espécie

1957

Estados Unidos

Fenothiazina

Haemonchus contortus

1964

Estados Unidos

Tiabendazole

Haemonchus contortus

1968

Estados Unidos

Organofosforados

Teladorsagia circumcincta

1976

Austrália

Levamisole e Morantel

Haemonchus contortus

1980

África do Sul

Rafoxanida

Haemonchus contortus

1987

África do Sul

Ivermectina

Haemonchus contortus

Fonte: Dr. Adriano F. Vatta1.

Tabela 2. Relatos de resistência anti-helmíntica em caprinos na África.

País

Anti-helmíntico

Raça

Referência

Gênero

Camarões

Fenbendazole
Thiabendazole

Cruzas nativas

Ndamukong et al. (1992)

Strongylus spp.

Quênia

Thiabendazole

East African,
Galla, cruzas
Toggenburg v.
East African

Njanja et al. (1987)

Haemonchus
contortus

Quênia

Fenbendazole
Ivermectin
Levamisole

Galla, Small
East African

Mwamachi et al. (1995)

Haemonchus contortus
Trichostrongylus spp.
Oesophagostomum spp.

Tanzânia

Thiophanate (1)

–

Ngomuo et al. (1990)

H. contortus

Tanzânia

Albendazole
Fenbendazole
Thiabendazole

Black Head
Persian

Bjørn et al. (1991)

H. contortus

(1) Eficácia não foi testada em caprinos, porém eles permaneciam em pastagem junto com ovinos.

Fonte: Dr. Adriano F. Vatta2.

O envolvimento do número de genes irá depender do grupo químico. Quando o anti-helmíntico pertencer ao grupo dos benzimidazóis, a resistência será denominada monogênica, que é controlada por somente um gene (beta-tubulina), incidindo de forma rápida na população de parasitas. A resistência será denominada poligênica quando for controlada por mais de um gene (canal de cloro, P-gp, beta-tubina, GABA) e pertencer ao grupo das lactonas macrocíclicas, incidindo de forma mais lenta na população de parasitas.

As populações são compostas por organismos homozigotos susceptíveis e resistentes, SS e RR respectivamente, e, na sua maioria, por indivíduos heterozigotos, SR ou RS. Como dito, o processo de seleção inicia-se tão logo seja usado o composto “A”. Embora tardiamente, uma vez detectada resistência para aquele produto, inicia-se o tratamento dos animais com o produto “B”, o qual passa por processo de seleção semelhante. E assim sucessivamente, até que a população desenvolva resistência múltipla e seja composta de elementos em sua maioria RR, esgotando todo o arsenal químico (Figura 2).

Quando a frequência do alelo resistente (R) é baixa, a maioria dos alelos R presentes em uma determinada população de parasitas será de resistente-recessivo (RS). Nesse caso, parasitas que são resistente-dominante (RR) serão raros, com uma frequência aproximada abaixo de 0,001%. Assim, uma droga de boa eficácia que remova quase todos os RS deixará uma população menor do alelo RR pós-tratamento, quando comparada a um tratamento que remova somente alguns R codominantes e nenhum RS tolerante. Entretanto, a eficácia dos anti-helmínticos contra esses genótipos pode variar de acordo com a dosagem escolhida ou o tempo que o parasita ficará exposto à droga. De certo modo, o conceito de dominância pode ser confundido em populações que manifestam certo grau de tolerância contra agentes nocivos (PRICHARD, 1990).

Embora se utilize o termo dominância, é preferível examinar esse efeito como um caráter seletivo do tratamento; o que ocorre é uma mudança proporcional, com velocidade variável, de alelos R (Figura 2). Estimar, por meio da biologia molecular, a frequência de R em parasitas após o tratamento anti-helmíntico (parasitas que sobreviveram ao tratamento) com a frequência de R antes do tratamento, é um meio de se avaliar o efeito da seletividade imediata do tratamento (VAN WYK, 2008a).

Figura 2. Relação inversa “em degraus” entre o aumento progressivo da dose de um produto e a eficácia deste para as categorias homozigoto susceptível e resistente e heterozigoto susceptível e resistente de helmintos.

Obs.: Quanto maior o tamanho da letra, maior será a proporção do gene (susceptível ou resistente) na população parasitária.

Fonte: Van Wyk (2008a).

O ritmo da evolução da resistência dependerá do número de parasitas SS, SR, RS e RR que sobreviverem ao tratamento. A resistência aumentará mais rapidamente quando for dominante, mais lentamente quando for codominante e muito lentamente quando for recessiva (DOBSON et al., 1996). Esse fato influenciará diretamente a população total de parasitas. No caso de uma população de parasitas, para qualquer eficácia fixa contra parasitas RS, existe a possibilidade de aumento da eficácia contra parasitas SS, porque poucos parasitas com alelo S sobreviverão ao tratamento, e isso poderá iniciar o aparecimento da resistência. Inversamente, para qualquer eficácia fixa contra parasitas SS, a proporção entre a população S e R diminui, pois muitos R sobreviverão, inclusive aqueles associados ao gene S. Se a eficácia contra RS for aumentada, poucos alelos R sobreviverão ao tratamento, restando somente os dominantes RR, que influenciarão ainda mais o aparecimento da resistência (PRICHARD, 1990).

Implicações para a relação inversa

A eliminação de parasitas homozigotos SS é lenta e gradual. Entretanto, quanto mais eficaz for o efeito tóxico de um produto, maior será a seleção para homozigotos resistentes (RR), com significativa eliminação de parasitas SS, SR e RS. O processo de seleção poderá ser mais lento quando existir um grande número de parasitas em refugia (ver título Refugia), mesmo com um medicamento que apresente eficácia próxima de 100%. Porém, essa relação de nada adiantará caso todos os animais sejam tratados e transferidos para um pasto não contaminado, levando somente o gene RR.

Resistência múltipla

O uso intensivo dos compostos é o fator mais importante para o aparecimento da resistência parasitária. Isso é agravado pela facilidade que tem o produtor de adquirir tais medicamentos. A RAM foi detectada em vários países da América do Sul (Tabela 3), sendo amplamente disseminada no Brasil (WALLER et al., 1996).

Tabela 3. Resistência do H. contortus a vários produtos em ovinos: comparação entre a África do Sul e quatro países sul-americanos.

País

Fazenda

Anti-helmíntico(1) e percentual de fazendas
com cepa resistente

ABZ

IVM

LEV

RFX

CLO

BEZ+LEV

Média(2)

África do Sul

80

79

73

23

89

NO(3)

NO

98

Paraguai

37

70

67

47

NO

NO

NO

–

Uruguai

242

61

1

29

NO

NO

NO

93

Brasil

182

68

7

19

NO

20

15

97

Argentina

65

37

2

8

NO

NO

5

46

(1) ABZ = albendazol; IVM = ivermectina; LEV = levamisol; RFX = rafoxanida; CLO = closantel; combinação BEZ+LEV = benzimidazol e levamisol.

(2) Percentual indica a média geral de eficácia nos rebanhos analisados.

(3) NO: não observado.

Fonte: Waller et al. (1996), Van Wyk et al. (1999).

Causas predisponentes ao aparecimento da resistência parasitária

• Tratar o rebanho em intervalos curtos, inferiores ao período pré-patente dos parasitas.

• Alternar diferentes famílias de medicamentos em intervalos inferiores a 1 ano.

• Utilizar produtos de ação prolongada com grande frequência no ano (acima de três vezes).

• Adquirir animais contaminados com parasitas resistentes (lateral, cruzada ou múltipla).

• Tratar o rebanho todo (tratamento massal), impedindo a sobrevivência de parasitas em refugia.

• Usar medidas de manejo sanitário de forma inadequada (jejum e posição da cabeça).

Refugia

O termo refugia, ou refúgio, refere-se a todas as fases evolutivas do parasita que não têm contato com o composto antiparasitário; compreende, em sua vasta maioria, os estádios de vida livre: de ovo a larva infectante. O grupo de larvas que permanece na pastagem e recebe o nome de estoque de larvas pode, ou não, ser composto por larvas em refugia. Estas larvas permanecem com seu caráter susceptível, pois ficam livres de qualquer medida de seleção para resistência.

Essa hipótese foi determinada em estudo in vivo, com graus variados de infecção artificial de ovinos com H. contortus susceptível ou resistente ao thiabendazole. Os animais foram tratados com o composto e depois reinfectados com larvas susceptíveis por seis gerações de larvas. Testes de eclodibilidade in vitro demonstraram que a refugia pode retardar o desenvolvimento da resistência em H. contortus. A resistência foi determinada de forma rápida quando a infecção apresentou menos de 5% de larvas em refugia (MARTIN et al., 1981).

O aparecimento da resistência está intimamente ligado ao sucesso da progênie que sobreviveu ao tratamento. Assim as larvas em refugia podem contribuir para a diluição dos genes que codificam para resistência as próximas gerações (VAN WYK, 2001). Logo após um tratamento dito eficaz (eficácia > 98%) com a droga “A”, a geração dos parasitas sobreviventes irá se desenvolver junto com os vermes livres em refugia. Desse modo, o tamanho da população em refugia tem papel fundamental no estabelecimento da seleção para a resistência a tal medicamento. Outro aspecto importante é que a pressão de seleção para a resistência será maior quando os animais forem tratados em pastagens limpas do que quando mantidos em pastagens contaminadas. Práticas de tratamento dos animais do rebanho e de movimento deles para pastos limpos devem ser revistas e discutidas para cada caso. Uma alternativa muito válida é deixar um lote pequeno de animais (até 5% do rebanho) sem tratamento algum, com o intuito de propagar parasitas susceptíveis (BESIER, 1997).

Deve-se considerar a refugia em todo planejamento anti-helmíntico. Proprietários e técnicos devem estar atentos a esse detalhe e dar a devida importância quando forem prescrever um programa de controle parasitário, de modo que se sustente a eficácia dos produtos existentes, retardando o fenômeno da resistência.

Mecanismos de resistência em diferentes compostos antiparasitários

A resistência parasitária às drogas desenvolveu-se muito rapidamente. Essa situação é alarmante quando se nota a distribuição mundial da resistência em todas as espécies animais, causando prejuízos ainda pouco conhecidos. A questão agora é conhecer profundamente o mecanismo de resistência dessas drogas e, como era esperado, o mecanismo de resistência pode ou não estar ligado ao mecanismo de ação dessas drogas (LE JAMBRE et al., 2000). Outra dificuldade é descrever, com precisão, esses processos, pois sabe-se que os organismos podem alterar seu funcionamento rapidamente, elegendo substitutos para sobreviver à pressão de seleção.

Por razões econômicas e éticas, os estudos in vitro e os modelos matemáticos têm possibilitado o estudo de eficácia das drogas e podem ser interpretados com aceitável margem de confiança. No entanto, deve-se conhecer seus limites quando a intenção é extrapolar para estudos in vivo e incluir a relação parasita-hospedeiro. Dobson et al. (1996) sugerem que os exames em laboratório poderiam ser utilizados com mais frequência, no intuito de monitorar a eficácia dos compostos e auxiliar estudos em genética, associados à resistência parasitária. Da mesma forma, os modelos matemáticos devem ser analisados com muito critério, porque podem enfatizar fatores pouco relevantes da relação parasita-hospedeiro. O maior exemplo disso é a valorização de estratégias que deixam de enfatizar o papel das larvas em refugia como contribuição fundamental ao aparecimento da resistência parasitária (VAN WYK, 2001).

Benzimidazole

Estudos revelaram que a herança da resistência ao grupo dos benzimidazóis é transmitida de forma dominante ou incompleta recessiva em H. contortus e Trichostrongylus colubriformis (HERLICH et al., 1981; MARTIN et al., 1988), utilizados em medicação de curta ou longa ação.

Levamisole

No caso do T. colubriformis, a resistência é uma característica intimamente ligada ao sexo; sendo XX para fêmeas e XO para machos (LE JAMBRE, 1985). A resistência recessiva é manifestada de forma dominante em machos, pois eles possuem somente uma cópia do cromossomo X. Martin e McKenzie (1990) determinaram que a resistência é controlada por um só gene ou por um grupo de genes intimamente ligados, demonstrando que outros genes autossômicos têm pouca influência.

A resistência do H. contortus ao levamisole é transmitida de forma autossômica recessiva em larvas, isto é, um outro cromossomo não ligado ao sexo. No entanto, a manifestação da resistência em parasitas adultos é ligada ao sexo, sendo mais marcante em fêmeas do que em machos (LE JAMBRE et al., 2000). Essa diferença crucial pode ser a razão maior para os diferentes níveis de resistência encontrados para ambas as espécies em investigações de campo.

Lactonas macrocíclicas

O desenvolvimento da resistência às macrolactonas foi de certa forma muito rápido e inesperado. Por causa disso, o conhecimento do mecanismo de herança da resistência para esse grupo de droga é crucial. Além de ser o grupo de drogas mais comercializado, também apresenta uma diferença fundamental quanto a sua farmacologia: droga com persistência e cauda longas. Foi determinada que a resistência do H. contortus é uma característica transferida de modo totalmente dominante, sendo a geração F1 reciprocamente resistente a seus progenitores (LE JAMBRE et al., 1995). Essas determinações contribuem para o esclarecimento dos resultados de campo em relação à rápida seleção de organismos resistentes a esses produtos (BARNES et al., 1995).

Como suspeitar do aparecimento da resistência parasitária?

A maior dificuldade encontrada por parasitologistas do mundo todo está na incapacidade de diagnosticar a resistência quando ela se apresenta em baixos níveis (CONDER; CAMPBELL, 1995). Para o produtor, que necessita de orientação técnica, o fenômeno da resistência só irá ser revelado quando ele detectar animais fracos, cambaleantes ou outros sinais clínicos logo após o tratamento.

Existem algumas técnicas utilizadas em laboratório para o diagnóstico da resistência a todos os grupos químicos, porém nenhuma delas pode ser levada a campo buscando um resultado rápido. Exames laboratoriais podem ser realizados utilizando técnicas in vitro de eclodibilidade de ovos e vários testes de motilidade e desenvolvimento de larvas. No entanto, a técnica mais empregada no monitoramento da resistência é o teste de redução na contagem de ovos por grama de fezes (OPG).

Uma maneira mais eficaz de determinar a presença da resistência às drogas é a utilização da contagem de vermes adultos, na necropsia, em animais naturalmente infectados. Somente assim será possível determinar com precisão as espécies de parasitas resistentes para determinada droga. Outra técnica utilizada é a infecção artificial de animais com parasitas suspeitos para resistência. Esses animais são posteriormente sacrificados e procede-se à contagem dos vermes adultos após o tratamento. A desvantagem dessas técnicas é o alto custo de aquisição de animais e o grande aparato laboratorial necessário para as contagens. Animais de laboratório (gerbilos e camundongos) têm sido cada vez mais utilizados para realizar determinados testes, como forma de minimizar os custos operacionais desses procedimentos.

Métodos que empreguem ferramentas da biologia molecular podem trazer melhores entendimentos com relação à dimensão da resistência e mais agilidade nos diagnósticos. A técnica de polimerase chain reaction (PCR) vem sendo aplicada para o diagnóstico da Teladorsagia circumcincta resistente ao benzimidazole (ELARD et al., 1999). Assim que as conclusões estiverem disponíveis, será possível identificar criteriosamente o grau de resistência e prescrever estratégias de controle com mais antecedência.

Avaliação da resistência com o teste de redução de ovos em amostra de fezes

Para o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) devem ser utilizados animais saudáveis da mesma categoria (jovens ou adultos), naturalmente ou experimentalmente infectados, identificados e de pesos conhecidos. Os animais devem ser distribuídos em grupos tratados e não tratados (controle), sendo necessário de 6 a 10 animais para cada grupo. Para que haja interpretação confiável dos resultados, na formação dos grupos não é indicado incluir animais que apresentem OPG abaixo de 200. Para drogas de curta duração (benzimidazole, levamizole e closantel), deve-se colher amostras de fezes para contagem de OPG no 10º dia após o tratamento; já, para drogas de longa duração (somente as lactonas macrocíclicas), deve-se adotar os mesmos procedimentos, porém as coletas devem ser realizadas no 14º e 21º dia pós-tratamento (COLES et al., 1992).

Em seguida, compara-se o percentual de redução na eliminação de ovos nas fezes dos dois grupos pelo programa Reso (média aritmética). A eficácia pode ser calculada utilizando a fórmula (VIZAR; WALLACE, 1987), pela qual se compara a média do grupo tratado com a média do grupo controle após o 10º ou 14º dia:

Apesar de amplamente utilizado para monitorar a resistência parasitária, o teste de redução de OPG caracteriza-se por apresentar baixa sensibilidade, pois não oferece uma correlação aceitável entre a ovipostura e o número de parasitas adultos no hospedeiro; com exceção do H. contortus, cujo potencial biótico é elevado (TAYLOR et al., 2002). Entretanto, esse teste apresenta as seguintes vantagens: avaliação simultânea de vários produtos, baixo custo e obtenção relativamente rápida dos resultados. Deve-se evitar utilizar um único grupo, para que ele não seja o controle dele mesmo.

Considerações sobre o aparecimento da resistência parasitária e seu controle

Frequência entre tratamentos

A frequência de tratamentos antiparasitários é uma importante causa do aparecimento da resistência parasitária, especialmente quando associada à utilização de medicação com longa persistência. Essa estratégia foi testada em cordeiros, por meio da avaliação de três formatos de “cauda”, durante o período de 4 meses. Foram realizados três tratamentos com anti-helmínticos de persistência curta (menos de 15 dias), dois tratamentos com anti-helmínticos de persistência média (entre 15 e 30 dias) e somente um tratamento com drogas de longa persistência (mais de 30 dias). Verificou-se que, no grupo tratado com medicamento de cauda curta, a resistência foi baixa enquanto a eficácia contra parasitas adultos foi alta; o grau de resistência foi moderado quando a persistência do composto foi de 10 a 15 dias; e as drogas de longa persistência apresentaram resistência mais cedo do que as anteriores (DOBSON et al., 1996).

Como foi observado, um composto de longa persistência pode apresentar grande vantagem em relação ao tempo de eliminação parasitária. Porém sua utilização deve ser otimizada, na tentativa de preservar a longevidade de sua eficácia. Para determinar o impacto da frequência de utilização de produtos antiparasitários, 51 produtores de ovinos e caprinos, em todo Brasil, responderam a um questionário. Entre os produtores, 7,2%, 20,4%, 25% e 18,2% administraram tratamentos mensais ou em intervalos de 2, 3 e 4 tratamentos ao ano, respectivamente. Desses, 71,3% alternavam mais de uma família de droga anualmente. As bases farmacológicas utilizadas na última, penúltima e antepenúltima aplicação foram ivermectina (38,2%), moxidectina (23,5%), closantel (17,6%) e levamisole (11,8%) (MOLENTO ALMEIDA, 2004). Essa pesquisa inédita e surpreendente para o Brasil revela que o produtor tem pouco conhecimento sobre o assunto, assim como boa parte do corpo técnico de campo. Esse relato indica a necessidade de se promover programas de transferência de tecnologia que visem alertar sobre os potenciais fatores ligados ao aparecimento da resistência parasitária.

Um outro aspecto relevante da frequência do uso de antiparasitários está relacionado ao emprego do tratamento estratégico no Brasil. Esse método de controle é usado na redução das infecções, quando a população de parasitas está em menor número na pastagem. No entanto, se esse programa for realizado durante muito tempo, toda a população de parasitas será selecionada e somente os indivíduos resistentes serão capazes de contaminar a pastagem. Donald (1983) demonstrou que a pressão de seleção pode ser reduzida, caso os animais sejam tratados em períodos que a presença de larvas na pastagem é elevada. Os períodos de alta translação são favoráveis, pois não prejudicam o potencial de adaptação, reprodução e infectividade das larvas susceptíveis.

Anti-helmínticos com longa persistência

Existem algumas vantagens em se utilizar medicamentos de longa persistência: a) longa proteção durante a estação de maior contaminação; b) redução no número de tratamentos; c) melhor relação entre mão de obra e manejo; d) menos alternância de medicamentos; e) melhor eficácia contra organismos resistentes. No entanto, a correlação entre o efeito seletivo dos compostos de longa persistência e o aparecimento da resistência parasitária é muito grande. Esse efeito é marcante quando se observa que o tempo de eliminação de algumas drogas, que pode ser de quatro a oito semanas, é prejudicial ao estabelecimento e desenvolvimento das larvas susceptíveis, contudo não afeta as larvas resistentes recém-ingeridas.

Esse caráter seletivo deve-se à longa persistência da cauda e favorece os parasitas adultos resistentes que sobreviveram no hospedeiro (BARNES et al., 1995). Isso significa que, durante esse período de tempo, tanto os parasitas adultos contribuirão mais para a contaminação da pastagem com larvas resistentes (refugia inimiga) como as larvas susceptíveis morrerão ao ser ingeridas. As consequências são claras e danosas, e comprometem a manutenção da eficácia a médio e longo prazo.

Como o parasita pulmonar Dictyocaulus viviparus em bovinos contribui com número reduzido de larvas em refugia ao longo do ano, pesquisadores já temiam pelo aparecimento da resistência desse parasita, principalmente contra medicamentos de longa persistência. Esse fato foi determinado após a utilização intensiva da abamectina 1% genérica, durante 3 anos consecutivos em um rebanho de bovinos, em um teste de contagem de larvas nas fezes, utilizando o método de Baermann (MOLENTO et al., 2006). Após esse teste, ficou evidente que a utilização supressiva da abamectina ocasionou a perda de eficácia de vários medicamentos da mesma família (outro produto à base de abamectina 1%, quatro produtos com ivermectinas 1%, uma ivermectina 3,15%, uma doramectina 1%, uma moxidectina 1%, um produto à base da combinação ivermectina 2,25% e abamectina 1,25%).

Eficácia contra parasitas adultos

Este é o fator mais importante para se evidenciar o aparecimento da resistência, pois os parasitas adultos apresentarão grande vantagem reprodutiva, durante o período de persistência, perante o restante da população (DOBSON et al., 1996). Nesse caso, os descendentes dos parasitas que sobreviverem ao tratamento representarão 100% da população, que contaminará a pastagem. E, mesmo após o término do período de persistência de um produto, as larvas SS necessitarão de aproximadamente duas semanas até tornarem-se adultos reprodutivamente aptos.

Seleção decorrente da persistência (cauda longa)

Hennessy (1994) sugere que o caráter farmacológico das drogas que apresentam longa persistência, eliminando grande parte dos fenótipos resistentes, proporciona um atrativo, como drogas de melhor escolha e utilização. No entanto, este é o segundo fator mais importante na disseminação da resistência em uma população.

De acordo com Dobson et al. (1996), a evolução da presença da droga no hospedeiro, seguida de sua ação seletiva, pode ser dividida em três fases (Figura 3). A soma dessas fases corresponde ao período de persistência da droga. A fase mais curta é a que compreende a eliminação de todos os genótipos (RR, RS e SS). Como foi definido, caso um pequeno percentual de parasitas sobreviva (0,001%) à fase 1, nas fases seguintes o caráter seletivo será acentuado. A cauda é “perfeita” quando todas as larvas são eliminadas, independentes de seu genótipo. Porém, pode ocorrer a cauda “negativa”, que elimina os genótipos RS somente na primeira metade superior da cauda, permitindo a sobrevivência na metade inferior. Esse tipo de cauda permite a sobrevivência total do alelo RR. É importante notar que o formato cauda e o tipo de seleção independem da eficácia das drogas contra parasitas adultos no hospedeiro.

Figura 3. Efeito do declínio da concentração de uma droga (efeito cauda) sobre os alelos sobreviventes, RR, RS, SR e SS, em larvas infectantes recém-ingeridas por um hospedeiro após tratamento.

Fonte: Molento e Prichard, (1999).

Associação de bases químicas

A utilização de drogas de diferentes princípios ativos em um mesmo momento, não misturadas ou disponíveis em solução comercial, tem demonstrado grande eficácia, sendo indicado para situações de resistência parasitária grave (SANGSTER, 2001). É imprescindível que ambas as drogas possuam alta eficácia, quando utilizadas isoladamente (BARNES DOBSON, 1990), e eliminem uma grande quantidade de parasitas, sendo a imensa maioria SS e um grande número RS. As drogas podem também eliminar a maioria de alelos R da droga utilizada em conjunto e vice-versa, suprimindo significativamente a possibilidade do aparecimento da resistência.

No caso do aparecimento de cepas resistentes, Terril et al. (2001) e Molento (2004) demonstraram que a utilização de compostos de forma associada pode não apresentar redução elevada e ainda prejudicar o produto com efeito tóxico superior. No primeiro estudo, a combinação do albendazole (20 mg/kg) e ivermectina (0,4 mg/kg) apresentou eficácia de 88%, sendo semelhante à eficácia demonstrada apenas pela ivermectina (78%) e superior à demonstrada pelo albendazole (62%). No segundo estudo, foi evidenciado que a associação de produtos do mesmo grupo químico (ivermectina e abamectina) também pode apresentar baixa redução na OPG.

Outra possível forma de aumentar a eficácia das drogas é a utilização de compostos capazes de bloquear o mecanismo de resistência, alterando a farmacocinética do composto antiparasitário no hospedeiro, de modo que esse composto tenha efeito nos parasitas em questão. Isso foi demonstrado após a associação do verapamil, que é um bloqueador de cálcio, com a ivermectina. A combinação resultou em um aumento de 83% no pico da concentração plasmática (Cmax) e 54% na área abaixo da curva para a ivermectina, em comparação com a administração apenas da ivermectina (MOLENTO et al., 2004b).

Além do planejamento inicial, existem outros fatores importantes com relação ao uso da combinação de drogas, por exemplo: vias de aplicação, dosagens iniciais, especificidade de cada droga, tolerância do hospedeiro e custo da combinação.

Tratamento parcial seletivo

O tratamento de todos os animais do rebanho com doses anti-helmínticas preconizadas pela indústria é amplamente utilizado e tem o objetivo de remover toda a carga parasitária, prevenindo a fuga inclusive de alguns parasitas resistentes (DASH et al., 1985). Uma outra opção mais prática é não tratar um número reduzido de animais do rebanho, no intuito de aumentar a população em refugia na pastagem (MARTIN, 1985), reduzindo a pressão de seleção para resistência. Deixar 20% dos animais sem tratamento pode reduzir o aparecimento da resistência por um longo período. Se todos os animais receberem um tratamento ao desmame e 20% não receberem os tratamentos subsequentes, o nível de parasitismo será semelhante ao cenário codominante, porém a resistência será retardada por até 5 anos. Além disso, os autores (DASH et al., 1985; MARTIN, 1985) apresentam o custo da medicação como outra vantagem. A Figura 4 mostra claramente que a frequência de R pode ser retardada em até três vezes quando 20% dos animais não recebem tratamento antiparasitário (BARNES et al. 1995).

Figura 4. Efeito da estratégia de tratamento e consequente herança genética no desenvolvimento da resistência.

Fonte: Barnes et al. (1995).

A eficácia da medicação antiparasitária nos animais tratados três vezes (80%) foi de 99%, 50% e 10% para alelos SS, RS e RR, respectivamente; e de 20% nos animais que não receberam tratamento (linha sólida). A eficácia da medicação foi semelhante para os outros 100% dos animais que receberam o primeiro tratamento ao desmame, porém 20% desses não receberam tratamento adicional (linha tracejada). Os animais não tratados foram escolhidos aleatoriamente, permanecendo o mesmo lote até o término do período. O valor estimado da frequência de R foi de 0,01% para as duas situações e a eficácia inicial foi estipulada em 99%.

Momento do tratamento e a relação entre o número de aplicações e a seleção para resistência

Van Wyk (2008b) enfatiza que para realizar tal comparação é importante inicialmente esclarecer que a maioria dos técnicos e parasitologistas assume de forma errônea que o número de tratamentos pode ser avaliado de modo semelhante a uma unidade comum. Isso sugere que, ao recomendar a redução de tratamentos ao produtor, a seleção parasitária seja reduzida na mesma proporção da redução do número de vezes que o composto não for utilizado. Dessa forma, o pesquisador poderá concluir que o experimento obteve êxito porque a quantidade de tratamentos foi reduzida sem que ocorresse uma redução na produção animal.

Entretanto esse procedimento pode não ser válido, como sugere Leathwick et al. (1995). Nesse caso, a seleção será mais evidente se um esquema de quatro tratamentos táticos em períodos curtos e em momentos de alta translação (taxa de infecção por L3) – com produtos de curta persistência, feito em animais em pastagem contaminada e sem a mudança para pasto novo – for substituído por somente um tratamento imediatamente antes de mover para um pasto novo, sem larvas em refugia, ou for trocado por um medicamento de altíssima persistência, mesmo sem a mudança de pasto (VAN WYK, 2008b). Outro fator que aumenta a pressão de seleção é tratar animais adultos no período final das chuvas (fim do inverno no Nordeste brasileiro), pois assim só irão sobreviver adultos e larvas resistentes formadoras da geração seguinte infectante.

Isso significa que muito embora não se tenham métodos de avaliar a pressão de seleção dessas estratégias, o momento no qual se decide tratar um rebanho deve receber mais atenção dos técnicos. Leathwick et al. (1995) destacaram que alguns resultados de pesquisas podem ter chegado a conclusões semelhantes, contudo a simples contagem do número de tratamentos administrados é um indicador pouco confiável para calcular a pressão de seleção para a resistência e apresenta uso limitado na decisão de qual combinação de produtos ou estratégias de manejo devem ser aplicadas para minimizar a seleção. Os benefícios da contagem de tratamentos seriam a redução de dejetos lançados no meio ambiente e a melhora na relação custo-benefício da produção, visto que se gastará menos com a compra de insumos, a manutenção dos níveis produtivos e o custo de mão de obra.

Nesse debate, os pesquisadores assumem o tratamento em todos os animais do rebanho. O tratamento pode ser alterado caso exista a iniciativa de implantação de um programa de tratamento parcial seletivo com base no conhecimento epidemiológico dos parasitas. Embora o programa que inclui avaliações clínicas individuais com o método Famacha seja pouco prático em rebanhos e em áreas muito grandes, existe a possibilidade de realizar amostragens de parte dele. Nesse caso, após a amostragem (10 a 50 animais), é feita uma média de escore para determinar o grau de saúde do rebanho. Essa ação é mais indicada em épocas mais propícias de transmissão do H. contortus (início e final do verão), somente quando a média de anemia aumenta de 1,5 é que se deve examinar todos os animais. Essa amostra pode não ser significativa, entretanto aqueles animais mais debilitados podem ser avaliados, a fim de que sirvam como alerta do rebanho. Essa estratégia pode ser suficiente nos locais onde os tratamentos táticos funcionam de forma aceitável e no período pré-parto e desmama (CRAIG, 2008). Nas outras condições, o método Famacha deve ser útil ao longo do ano, juntamente com o uso de medicamentos eficazes.

É imperativo ressaltar que as propriedades contribuem de forma severa para o aumento da pressão de seleção quando usam a medicação em todas as categorias animais de forma regular ou mantêm os cordeiros isolados. Mesmo entrando em uma área de ampla contestação no que se refere à praticidade de manejo, sugere-se que se reduza significativamente o número de tratamentos em ovelhas adultas, para que elas, em sistema de rotação de pasto com cordeiros, possam diluir parasitas selecionados durante o manejo sanitário desses, com o objetivo de manter por períodos prolongados o efeito tóxico dos compostos.

Estratégias de reversão da resistência parasitária

Reversão natural

Embora na estratégia de reversão natural seja indicada a retirada dos medicamentos por períodos acima de 10 anos, o processo de reversão é considerado extremamente lento, podendo ocorrer somente após duas décadas. Borgsteede e Duyn (1989) não obtiveram nenhum retorno na eficácia do benzimidazole contra um isolado resistente de H. contortus após 6 anos sem o uso desse composto. Barnes et al. (1995) determinaram que a interrupção do uso de uma droga pelo período de 10 anos reduziu somente em 25% a 30% a frequência do alelo resistente para o helminto.

Borgsteed et al. (2005) investigaram a reversão para susceptibilidade do triclabendazole contra Fasciola hepatica após 3 anos de uso regular de closantel (três vezes ao ano) em uma propriedade de ovinos. Com o objetivo de não carrear parasitas antigos e resistentes, os pesquisadores retiraram todos os animais da propriedade na metade do período e introduziram a mesma quantidade de animais não infectados. Foi realizado teste de eficácia e sorologia específica para F. hepatica, após 6 meses, nos animais introduzidos com positividade de 100%. Após esse período, o triclabendazole apresentou eficácia de 9,6%, sem nenhum aumento significativo quando comparado ao teste anterior (15,3%) de 1998–1999, demonstrando que a simples utilização de um medicamento fasciolicida com modo de ação diferente não resultou em reversão para susceptibilidade.

Em relação à seleção parasitária, os trematodas com reprodução assexuada e sem uma população em refugia, resultante do tratamento de todo o rebanho, podem ser selecionados mais rapidamente com a eliminação dos genes susceptíveis. Embora exista a possibilidade de a propriedade ficar, durante intervalo mais longo, sem animais à espera da morte dos estádios, no hospedeiro intermediário, ou mesmo da introdução de fasciolas susceptíveis, é possível que animais silvestres, como coelhos, mantenham o parasita, assegurando a continuidade de populações resistentes.

Retirada dos animais susceptíveis

Por causa do pouco conhecimento sobre a característica fenotípica e genotípica dos hospedeiros em relação à herdabilidade dos caracteres de resistência, o descarte de animais sensíveis às parasitoses sem critérios técnicos é considerado pouco viável. No entanto, o método Famacha é uma estratégia que vem recebendo grande atenção e tem demonstrado resultados consistentes no campo (MALAN et al., 2001; VAN WYK; BATH, 2002). Molento et al. (2007) utilizaram o método Famacha em 120 ovinos (Texel e Ile de France), por um período de 12 meses, totalizando 18 avaliações. Nesse período, apenas 9,5% dos animais necessitaram ser tratados em todas as avaliações. Esse estudo permitiu adotar critérios individuais para a seleção de animais resistentes e resilientes e descartar em média 5% dos animais susceptíveis por ano. Hoste et al. (2002) demonstraram a possibilidade de selecionar animais que receberam tratamento antiparasitário, eles basearam-se no potencial produtivo e na idade de cabras leiteiras na França.

Reversão pela diluição dos genes RR: infecção natural

Este tipo de reversão consiste na introdução de animais naturalmente infectados em uma população parasitária susceptível, que deverá ser testada previamente. Somente após esse procedimento, adicionam-se os animais ao rebanho local. Essa estratégia causa muita perda de larvas SS no novo ambiente, em razão da grande presença de larvas RR na pastagem, da pouca migração das larvas e da chance reduzida de infecção (VAN WYK et al., 2001). Para se obter maior êxito com essa medida sanitária, é imperativo que a introdução de animais infectados com parasitas susceptíveis (SS) ocorra quando existirem poucas larvas no ambiente, isto é, no período de baixa translação e após tratamento dos animais oriundos da propriedade.

Reversão pela diluição dos genes RR: infecção artificial

Van Wyk e van Schalkwyk (1990) demonstraram que existe a possibilidade de a reversão ser realizada in vivo, no momento que houver reduzido número de larvas na pastagem. Entretanto, Eysker e Ogunsusi (1980) recordam que existe o fenômeno de desenvolvimento interrompido tanto nos períodos de seca quanto nos de frio e, caso as larvas apresentem uma característica resistente, todo o protocolo de reversão poderá ser prejudicado no período seguinte a essa estratégia, por causa da possibilidade de ciclos rápidos em períodos mais chuvosos. Pesquisadores da África do Sul trataram todos os animais com uma combinação de produtos, até obter uma eficácia acima de 99,9%. Depois, os animais foram infectados artificialmente com um isolado susceptível ao albendazole (acima de 99,9%), observando-se um aumento significativo na eficácia do isolado resistente (29,4%) para a nova população parasitária mista (96%), predominantemente SS (VAN WYK; VAN SCHALKWYK, 1990).

Os resultados apresentados mostram a possibilidade de substituição das populações de nematódeos resistentes por outras susceptíveis em países de clima temperado, onde o pasto não é utilizado durante os meses de inverno, tornando-se praticamente livre de larvas infectantes. Em países de clima tropical, a aplicação dessa técnica pode ser dificultada em virtude do hábito de pastejo contínuo, sendo mais viável a técnica de diluição de genes previamente descrita.

Reversão pela combinação de medicamentos: antiparasitários + moduladores

Mesmo reconhecendo a possibilidade do envolvimento de vários genes/mecanismos (GABA, GLUCl, b-tubulina e P-gp), muitos estudos têm sido realizados para comprovar o envolvimento da glicoproteína-P (P-gp). A P-gp é uma proteína de transporte ativo que retira a droga da célula para o meio exterior, o chamado efluxo, reduzindo sua concentração. Para bloquear o mecanismo de efluxo da P-gp e reverter o quadro de resistência, usam-se drogas moduladoras em conjunto com a terapia original. O agente reversor clássico utilizado é o verapamil, um bloqueador dos canais de cálcio que possui afinidade pela P-gp (WATANABE, 1995). O verapamil age ligando-se à P-gp, desse modo, é retirado da célula, ao invés da droga principal; assim, possibilita que o efeito sinérgico das drogas beneficie e restaure o efeito tóxico da segunda.

Sangster (1993) relatou a presença de ao menos quatro genes que codificam para a P-gp em H. contortus, localizados predominantemente ao longo do trato intestinal e corados mais intensamente na musculatura e glândulas da faringe e na porção anterior do intestino (SMITH; PRICHARD, 2002). Xu et al. (1998) observaram que os níveis de RNA mitocondrial de P-gp eram mais altos em isolados resistentes a ivermectina do que em cepas susceptíveis.

O gerbil é o único modelo animal capaz de facilitar a comparação da infecção por H. contortus em ovinos ou caprinos. Os animais devem ser imunossuprimidos com hidrocortisona para o estabelecimento do H. contortus. Preliminarmente, foi determinada resistência cruzada nas duas cepas selecionadas separadamente (MOLENTO et al., 1999). Foi testado o efeito do uso do verapamil e do CL 347,099, análogo do verapamil, associados à ivermectina e à moxidectina em animais infectados com 1.000 larvas selecionadas de H. contortus. A moxidectina (0,017 mg/kg) e a moxidectina em combinação com o verapamil (20 mg/kg) mostraram efeito significativamente diferente na redução parasitária (P=0,02), com eficácia de 70% e 90%, respectivamente. A ivermectina (0,028 mg/kg) e a ivermectina em combinação com o verapamil também indicaram diferença significativa de eficácia de 80% e 93% (P=0,02) (XU et al., 1998). Recentemente, Borges et al. (2005) determinaram que a combinação ivermectina e verapamil aumentou em 430% o efeito tóxico da ivermectina contra cepa resistente a ivermectina de H. contortus, em ovinos naturalmente infectados. Apesar de os dados clínicos comprovarem os benefícios da associação dessas drogas, os experimentos in vivo não determinaram nem o real envolvimento da P-gp nem o metabolismo das drogas nos parasitas e nos hospedeiros.

Molento (2004b) iniciou estudos, usando HPLC em soro de ovinos não infectados, para determinar a alteração da cinética da ivermectina e da moxidectina associadas ao verapamil. O tratamento ivermectina combinado com o verapamil resultou em um aumento significativo na concentração plasmática da ivermectina ao longo de todo o período de detecção da droga. Aos 12 dias pós-tratamento foi obtido aumento de 57%, comparado ao tratamento com a ivermectina. O verapamil também aumentou a área abaixo da curva da ivermectina (P=0,022), e a sua concentração máxima, em comparação com a ivermectina, foi 83% (P=0,048) maior.

Alvinerie et al. (1999) estudaram, também por HPLC, a influência do tratamento em aplicação pour-on em ratos Sprague-Dawley (n=24/grupo). Eles determinaram que o pico máximo de concentração (Cmax) da ivermectina foi significativamente menor (4,62 ng/mL) quando comparado ao tratamento ivermectina + verapamil (7,49 ng/mL), e o tempo (Tmax) para atingir a concentração máxima foi maior (24h versus 8h). Esses resultados demonstram que a concentração e a velocidade de absorção da ivermectina pode ser alterada, após a adição do verapamil, tanto em formulações injetáveis como em pour-on.

Conclusão

O aparecimento da resistência parasitária a todas as famílias de drogas disponíveis alerta para um período de grande insegurança no que se refere à transferência de tecnologia entre pesquisadores e técnicos de campo. A pergunta que se faz hoje em dia não é qual a melhor droga antiparasitária, e sim qual o melhor método a ser utilizado.

É senso comum entre os pesquisadores a ideia de se revisar as estratégias tradicionais de controle parasitário. No entanto, para que esse conjunto de técnicas funcione, o médico-veterinário deve entender a nova filosofia, de que é necessário conviver com um nível aceitável de parasitas, sem que haja prejuízo para os animais, mudando o conceito de erradicação. Da mesma forma, outros métodos de controle devem ser incentivados, para que sua eficácia seja comprovada e sua utilização disseminada. Os ensaios em laboratório e os modelos matemáticos têm auxiliado na descoberta das falhas relativas à utilização deste ou daquele procedimento. Isso é importante porque os parasitas, assim como seus hospedeiros, não respondem uniformemente ao tratamento, revelando grande variação dos resultados em virtude da diversidade genética.

Como também já foi demonstrada em modelos matemáticos e comprovada no campo, a reversão de cepas resistentes para a susceptibilidade é impossível ou, no mínimo, inviável no momento. Dessa forma, as estratégias de controle com possível impacto – hospedeiros resistentes, controle biológico e fitoterápicos, tratamento seletivo, combinação de drogas eficientes, novas tecnologias de liberação dos fármacos e drogas com mecanismo de ação diferenciado – podem ser as únicas alternativas em curto e médio prazo. A metodologia de combinação com drogas de efeito não parasiticida é nova para a parasitologia veterinária e é necessário mais conhecimento sobre o mecanismo de efluxo das proteínas, de como e quando utilizá-la e como melhor instruir os usuários finais.

Embora as pesquisas tenham alcançado nível de excelência, como é o caso do diagnóstico molecular da resistência aos antiparasitários, a atividade de criação ovina e caprina corre o risco de ser economicamente inviável se essas propostas não se concretizarem em futuro próximo. Espera-se que kits moleculares comerciais, cujo custo deve ser acessível, venham a ser um procedimento rotineiro em laboratórios, pois de outra forma deixarão de atender as necessidades dos técnicos consultores. Relatos da resistência parasitária no mundo alertam para a necessidade de abordagem e de investimentos em pesquisa e desenvolvimento mais significativos, por causa do custo e da segurança com a sanidade e o bem-estar animal.

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Capítulo 16
Método Famacha no controle de Haemonchus contortus

Marcelo Beltrão Molento

Introdução

A atividade de criação de ovinos e caprinos apresenta uma clara divisão no Brasil. Uma é caracterizada como extensiva, de média e pequena escala, chamada tradicional, e outra é mais intensiva e dinâmica. A entrada de raças exóticas, a adoção de novas tecnologias de processamento da carne e a diversificação da atividade têm promovido uma verdadeira revolução nos conceitos de criação e investimento nos últimos 10 anos. Entretanto, essas mudanças ampliaram as diferenças entre as atividades e impulsionaram sobremaneira o produtivismo e a precocidade dos animais.

Entre os fatores que podem retardar esses objetivos, as infecções parasitárias têm papel central, porque causam efeitos danosos, como baixa produtividade e altos índices de morbidade e mortalidade. Sabe-se que as infecções parasitárias afetam todos os rebanhos, e muitos animais apresentam considerável contaminação. A grande variedade de climas encontrados no Brasil também favorece a sobrevivência das larvas de vida livre dos parasitos na pastagem, mantendo as taxas de contaminação elevadas praticamente durante o ano todo.

Na tentativa de evitar tais perdas e no intuito de minimizar o grau de infecção do rebanho, os produtores das diferentes formas de produção animal buscam a mesma saída para o problema e utilizam drogas antiparasitárias em períodos curtos e regulares. O uso intensivo dos compostos químicos, aliado ao tratamento de todos os animais do rebanho, é o principal fator que ocasiona a perda da eficácia dos medicamentos antiparasitários, denominada de resistência parasitária e comum no Brasil e em todo o mundo (WALLER et al., 1996; VAN WYK et al., 1999).

No Brasil, o exemplo mais drástico foi encontrado em Restinga Seca, RS, em 550 ovinos das raças Ile de France e Texel e suas cruzas, que recebiam tratamento antiparasitário em intervalos regulares de 21 dias, com rápida alternância de produtos. Esse fato, além de prejudicar a relação custo-benefício para a atividade, também promoveu a seleção de parasitas tolerantes a vários produtos. O teste Reso – programa que compara a contagem de ovos por grama de fezes (OPG) na avaliação do produto –, desenvolvido por Wursthorn e Martin (1989) e modificado por Le Jambre (1995), foi utilizado para determinar a eficácia dos produtos. Na coprocultura foi revelado 100% do parasita abomasal Haemonchus contortus após o período de colheitas (MOLENTO, 2004).

Os dados demonstram altos índices de resistência para todos os produtos, inclusive a resistência lateral para aqueles que nunca tinham sido utilizados na propriedade, como o caso da moxidectina, a combinação ivermectina e abamectina e a doramectina (MOLENTO, 2004).

Maciel et al. (1996) relataram que a situação da resistência no Paraguai era a pior do mundo. Entretanto, Van Wyk et al. (1999) demonstraram que a situação na África do Sul é ainda mais grave, pois os animais apresentaram resistência aos cinco grupos de anti-helmínticos (benzimidazole, imidazothiazole, macrolactonas, organofosforados e salicilanilidas). O relato descrito acima coloca o Brasil em situação semelhante a esses países.

Objetivo

Pensando em atender essa situação alarmante, pesquisadores da África do Sul propuseram e realizaram os primeiros experimentos com o método Famacha, nome que significa “Faffa Malan Chart”, uma homenagem ao Dr. François (Faffa) Mallan. Os testes foram idealizados na tentativa de comprovar a viabilidade do tratamento seletivo contra H. contortus, aplicando o conhecimento de que os animais manifestam diferentes respostas ao ataque parasitário. Logo no início, os hospedeiros foram caracterizados e subdivididos em três grupos distintos: um pequeno grupo entre 5% a 20% de animais susceptíveis, os quais apresentavam sinais clínicos da infecção e eliminavam grande quantidade de ovos nas fezes; uma parcela maior entre 60% a 70% do rebanho, que eliminavam uma quantidade variável de ovos nas fezes e não manifestavam clinicamente os efeitos da infecção, animais resilientes; e ainda um outro grupo de animais, de 5% a 10%, altamente resistentes às agressões parasitárias.

Nesse caso, a identificação dessas categorias dentro de um rebanho tem o objetivo de reduzir o número de tratamentos antiparasitários e auxiliar a manutenção da população parasitária com característica susceptível: refugia1. Dobson et al. (2002) determinaram que quanto maior o número de animais não tratados no rebanho, maior será a redução do processo de seleção parasitária, podendo alcançar uma diminuição de até 40 vezes. Esse estudo foi realizado em ovinos sob clima mediterrâneo, e essa comprovação reforça a proposta de utilização do tratamento seletivo, mesmo para outras famílias de parasitas (endo e/ou ectoparasitas).

A maior consequência da manutenção da população parasitária susceptível, tanto de adultos no local de parasitismo como de larvas na pastagem, é a diminuição do processo de seleção, que irá preservar a toxicidade das drogas em longo prazo. Essa diminuição é uma característica prática muito importante do método Famacha, que foi difundido rapidamente nas regiões onde existe predominância de infecções por H. contortus, pois beneficia o produtor diretamente com uma relação custo-benefício positiva.

Avaliação clínica individual

Embora existam vários métodos laboratoriais para diagnóstico parasitário e para avaliação da eficácia das drogas, muitos deles apresentam grande variação no momento de sua interpretação. O teste mais aplicado, porém com significativa margem de variação, é o que determina a redução na quantidade de OPG, realizado antes, e 7 e 14 dias após o tratamento. Vlassoff et al. (1999) verificaram que a variação da contagem de OPG é consideravelmente alta entre indivíduos, assim como entre amostragens em um mesmo animal. Os autores estudaram essas variações em caprinos da raça Angorá, após infecção artificial e natural com Trichostrongylus colubriformis, e perceberam que existem vários componentes que podem influenciá-las, inclusive a pouca capacidade dos animais de desenvolver resistência às infecções. Resultados semelhantes foram encontrados para ovinos da raça Merino, infectados com H. contortus (BARGER; DASH, 1987). Os testes de migração, eclodibilidade e desenvolvimento de larvas e hematócrito, e as técnicas sorológicas podem ser utilizados sob condições laboratoriais, atentando para suas limitações.

Entretanto, o método Famacha foi idealizado como uma forma prática de se avaliar um animal, ou mesmo todo o rebanho, por meio de informações que correlacionam dados clínicos e comprovações laboratoriais. A região de Badplass, na província de Mpumalanga, na África do Sul, foi escolhida para a realização dos primeiros testes de avaliação do grau de anemia da mucosa ocular de causa parasitária (MALAN, VAN WYK, 1992). Nesse momento, as variações de cores foram medidas de maneira subjetiva, sem que existisse uma padronização criteriosa, de modo que os autores observaram a existência de correlação entre a coloração da conjuntiva ocular, o percentual no exame do hematócrito (células vermelhas) e a incidência de H. contortus. As colorações da conjuntiva ocular foram preestabelecidas com auxílio de computação gráfica, representando cinco graus de anemia, com pequenas variações para cada grau, e somente após resultados promissores é que foi possível desenvolver o cartão contendo diferentes tons de cores da mucosa, que pode ser aplicado em ovinos e caprinos (BATH et al., 1996). Os autores comprovaram que os diferentes graus de anemia apresentaram correlação de 0,8 – com grau de confiabilidade superior a 95%, para infecções causadas por H. contortus (VAN WYK et al., 1997). Nos primeiros estudos realizados no Brasil, foi demonstrada a correlação de 0,78 para essas variáveis (MOLENTO et al., 2004).

No Quênia, o método Famacha foi utilizado em pequenas propriedades de caprinos, e a média de escores falso-negativo foi de 0,7% e 1,6% entre propriedades. O percentual de animais não tratados ficou entre 77% e 89%, sem a ocorrência de morbidade e mortalidade (EJLERTSEN et al., 2006). A utilização do método em caprinos, em São Paulo, foi testada em animais Saanen puros e mestiços ¾ Boer x ¼ Saanen, criados em sistema de pastejo com diferentes lotações (3,75 UA/ha ou 6,85 UA/ha). Foram utilizadas 65 cabras, sendo 21 da raça Saanen e 44 mestiças. No tratamento de alta lotação, foram utilizados 10 animais Saanen e 32 animais mestiços e, no de baixa, 11 cabras da raça Saanen e 12 cabras mestiças. Os resultados de sensibilidade e especificidade do Famacha© para animais mestiços foram de 51,57% e 48,32%, respectivamente (P<0,01). Para as cabras Saanen, a sensibilidade e a especificidade do Famacha© foi de 16,67% e 82,56%, respectivamente (P<0,01), com alta predominância de Haemonchus sp. (Tabela 1). Concluiu-se que a aplicabilidade do método Famacha© em cabras ¾ Boer x ¼ Saanen é um bom indicador de anemia e, em cabras Saanen, pode ser uma ferramenta auxiliar no diagnóstico diferencial de outras helmintoses (SILVA, 2008).

Tabela 1. Índices de avaliação da eficiência do método Famacha em cabras Saanen e em ¾ Boer x ¼ Saanen.

Variável

Constituição genética

Média (%)

Qui-Quadrado

Verdadeiro negativo

Saanen

17,86

0,002

¾ Boer x ¼ Saanen

32,14

Falso negativo

Saanen

11,80

0,92

¾ Boer x ¼ Saanen

21,53

Verdadeiro positivo

Saanen

3,07

0,003

¾ Boer x ¼ Saanen

46,93

Falso positivo

Saanen

5,51

0,001

¾ Boer x ¼ Saanen

44,50

Sensibilidade

Saanen

16,67

0,04

¾ Boer x ¼ Saanen

51,57

Especificidade

Saanen

82,56

0,006

¾ Boer x ¼ Saanen

48,32

Valor preditivo positivo

Saanen

16,04

0,02

¾ Boer x ¼ Saanen

62,68

Valor preditivo negativo

Saanen

74,95

0,60

¾ Boer x ¼ Saanen

81,52

Fonte: Silva (2008).

Cartão Famacha

Assumindo que a resposta ao desafio parasitário e à manifestação clínica ante o H. contortus é variável entre animais de uma mesma raça e/ou de um mesmo rebanho; a avaliação e a decisão de tratamento são feitas por meio de exame visual, para definir a coloração da conjuntiva, diante de um cartão ilustrativo que acompanha a técnica (Figura 1) e que auxilia na determinação do grau dos animais. A técnica consiste em utilizar o cartão no momento da avaliação, e este foi idealizado como parte integrante do método. O novo formato do cartão é menor e tem informações em várias línguas.

Figura 1. Cartão Famacha (A), lançado em 1999 como segunda versão, após modificações básicas e de conceito; e cartão Famacha pequeno em várias línguas (B), lançado em 2005.

Fonte: Van Wyk et al. (1997).

O cartão Famacha tem a finalidade de guiar o técnico de forma prática e ilustrativa, definindo padrões e orientando para a necessidade ou não do tratamento. Todas as informações podem ser utilizadas inclusive por pessoas não alfabetizadas ou com dificuldade de interpretação. Na Tabela 2, estão descritas as cinco variações de coloração da mucosa e os respectivos valores de hematócrito (VAN WYK et al., 1997).

Tabela 2. Grau Famacha de anemia, coloração aproximada, valor correspondente do hematócrito e indicação para os diferentes graus.

Grau Famacha

Coloração(1)

Variação do hematócrito (%)

Atitude clínica(2)

1

Vermelho-robusto

Acima de 28

Não tratar

2

Vermelho-rosado

23 a 27

Não tratar

3

Rosa

18 a 22

Tratar

4

Rosa-pálido

13 a 17

Tratar

5

Branco

Abaixo de 12

Tratar

(1) O avaliador deve ser treinado para estimar corretamente a coloração e evitar a divergência de interpretação no momento do exame clínico.

(2) A indicação do tratamento antiparasitário no cartão é baseada unicamente na coloração da conjuntiva.

Fonte: Van Wyk et al. (1997).

O método Famacha sofreu três grandes alterações no final dos anos 1990, houve a troca das letras A até E por números de um a cinco, a exclusão da versão em africâner no cartão e, principalmente, a definição do tratamento obrigatório em animais que apresentam o grau 3. Essa indicação inicialmente era reservada a animais que apresentavam algum outro comprometimento clínico, como edema submandibular ou perda de peso, e dependia do julgamento do médico-veterinário responsável. Um fator que contribuiu para a decisão de alterar essa indicação foi a ocorrência de mortalidade em estudos de campo com intervalos entre avaliações de mais de duas semanas. Pode-se dizer que a técnica foi atualizada em seus pontos críticos e hoje apresenta amplas condições de aplicabilidade e treinamento.

Exame da conjuntiva

O examinador deve iniciar o julgamento individual com a correta exposição da conjuntiva inferior dos animais. Para tanto, deve expor a conjuntiva, pressionando levemente a pálpebra superior com um dedo polegar e afastando para baixo a pálpebra inferior com o outro. Deve-se evitar a exposição parcial da membrana interna da pálpebra (terceira pálpebra) e do olho. O ideal é observar e julgar a coloração na parte medial da conjuntiva inferior e determinar o grau com o auxílio do cartão (Figura 2A). A exposição completa do olho do animal de forma incorreta pode gerar conflito entre avaliadores por causa da ausência de vasos sanguíneos em varias regiões da conjuntiva (Figura 2B).

Figura 2. Exposição correta (A) e local ideal para observação (seta). Exposição incorreta (B) da conjuntiva em pequenos ruminantes.

Fotos: Marcelo Beltrão Molento

Alguns fatores são fundamentais para a boa utilização da técnica, como: observar os animais sob luz natural, evitar a avaliação nos períodos mais quentes do dia e a movimentação excessiva e outras possíveis causas de estresse ou outro tipo de transtorno para os animais.

O método Famacha foi testado em caprinos de produtores de baixa renda durante 2 anos na África do Sul. Vatta et al. (2001) concluíram que o teste apresentou a capacidade de identificar corretamente entre 76% e 85% dos animais que necessitavam de tratamento antiparasitário, sendo tratados 49% deles. Esses autores afirmaram que o ponto de corte para o grau 3 aumentou consideravelmente a sensibilidade do teste, reduzindo sua especificidade (possibilidade de falso-positivo). Contudo, a avaliação pode ainda não incidir corretamente sobre essa espécie animal, porque a coloração da conjuntiva de caprinos sadios tem menor intensidade e menor variabilidade do que a de ovinos sadios. Molento et al. (2004) identificaram corretamente 7 entre 11 animais; desses, somente 2 poderiam sofrer sérias consequências com o uso do método, caso o parâmetro adotado fosse a contagem de OPG (2.700 e 1.100). A avaliação clínica determinou que alguns fatores podem comprometer a condição sanitária do rebanho, como o estado nutricional, a condição reprodutiva e o período periparto, prejudicando a correta avaliação e a alta correlação. Também foi observado que ocorre melhor diferenciação da coloração da conjuntiva em caprinos quando se espera aproximadamente de 6 a 8 segundos após a exposição da conjuntiva (MOLENTO et al., 2004). Acredita-se que o preenchimento capilar nessa espécie seja mais lento no momento do preenchimento dos vasos microcapilares presentes na conjuntiva.

Benefícios do método

Conforme mencionado, uma das principais vantagens de se utilizar o método Famacha é a possibilidade de identificar animais que apresentam algum grau de anemia, assumindo a condição de infecção pelo H. contortus.

Outros benefícios são praticidade de utilização da técnica após capacitação técnica, tratamento individualizado/seletivo dos animais, redução do índice de mortalidade, seleção intrarrebanho dos animais (susceptíveis-resilientes-resistentes), produção zootécnica semelhante entre animais tratados e não tratados, economia com a redução da compra de compostos químicos (Tabela 3), capacidade de treinamento de mão de obra técnica e possibilidade de, com a redução do número de tratamentos, em curto prazo, reduzir significativamente o processo de seleção parasitária.

Tabela 3. Estimativa da redução de custo ou doses de medicação antiparasitária em dez propriedades na África do Sul(1).

Redução nos custos (doses-valores)

Propriedade

Antes do Famacha
(1997)

Após o Famacha
(1998)

Redução

1

3.520 (doses)

200

96%

2

5.000 (rands(2))

1.000

80%

3

Valor estimado

Valor estimado

66%

4

Valor estimado

Valor estimado

50%

5

10.669 (rands)

5.988

44%

6

Valor estimado

Valor estimado

50%

7

6.021 (rands)

3.588

40%

8

Valor estimado

Valor estimado

60%

9

Valor estimado

Valor estimado

60%

10

16.000 (rands)

10.000

38%

Média das propriedades

58,4%

(1) Valores estimados foram fornecidos pelos proprietários.

(2) Rand: moeda oficial da África do Sul.

Fonte: Bath e Van Wyk (2001).

Aplicação do método

O método Famacha tem história recente no Brasil, foi utilizado no campo em 2000 e validado no ano de 2001 e 2002, com o objetivo de comprovar sua eficiência em rebanhos de ovinos e caprinos. Molento e Dantas (2001) verificaram que, durante um período de 120 dias, foi possível reduzir em 79,5% as aplicações com medicação antiparasitária em ovinos. A eficácia da ivermectina, avaliada por testes seriados de contagem de OPG, manteve-se inalterada (90%) durante o período experimental.

O método Famacha tem sido utilizado em propriedades com rebanhos de diversos tamanhos e raças no Brasil e no mundo. Em estudo utilizando 36 animais naturalmente infectados, Molento et. al. (2004) determinaram que o método pode ser aplicado quando ocorre o percentual de 60% de Haemonchus sp. Foi observada a redução de custos com tratamento na ordem de 75,6%, quando comparado ao esquema de tratamento profilático/preventivo adotado anteriormente em Umuarama, PR. Durante o experimento, somente dois animais apresentaram hematócrito abaixo de 22%. Foi observado o percentual entre 10% e 43% de animais tratados (Figura 3). Ao final, 29 animais necessitaram ser tratados 1 vez, 5 animais 2 vezes e somente 2 animais 3 vezes.

Figura 3. Determinação dos diferentes graus Famacha em ovinos entre os períodos de 20/10/2001 a 26/3/2002, em Umuarama, PR.

Fonte: Molento et al. (2004).

Kaplan et al. (2004) validaram o método Famacha no sul dos EUA em 847 ovinos. Foi determinada uma alta correlação entre hematócrito e Famacha, hematócrito e contagem de OPG e Famacha e contagem de OPG (P<0,001). Os autores observaram que o método foi extremamente viável para identificar animais anêmicos e possibilitou uma redução no número de tratamentos, quando comparado ao tratamento tradicional/profilático de tratar todos os animais do rebanho. Veríssimo et al. (2004) demonstraram que o método Famacha pode ser utilizado na integração de criações, como ovinos e bovinos, com significativa contribuição. Matrizes da raça Poll Dorset (n=125) dividiram a pastagem com 120 bovinos da raça Nelore e Nelore x Caracu em São Paulo. Os bovinos foram manejados em lotação rotacionada, e os ovinos tiveram livre acesso a 17 piquetes em sistema rotacionado. O método Famacha foi aplicado quinzenalmente, e todos os ovinos nas categorias três a cinco e/ou que apresentaram condição corporal abaixo de 2 receberam suplementação nutricional de 400 g/dia de concentrado com 18% de proteína. Os animais que apresentaram grau 4 e 5 receberam suplemento de vitamina B12 e K. Os animais acometidos foram monitorados até atingirem grau Famacha 1 ou 2. No período de 26/4/2003 a 25/4/2004, foi necessário administrar medicação antiparasitária com moxidectin 1% (Cydectin NF, Fort Dodge) em somente um animal, no periparto, cuja suplementação alimentar foi insuficiente. O consórcio com bovinos e ovinos, nesse sistema de produção, permitiu o controle parasitário com uma frequência insignificante de tratamentos.

Vieira et al. (2006) avaliaram o método Famacha em 33 ovinos das raças Suffolk, Ile de France e suas cruzas, em Passo Fundo, RS. Os animais foram divididos em 3 grupos de 11 animais, sendo um tratado a cada 30 dias, outro a cada 60 dias e o seguinte, avaliado somente por meio do método Famacha, a cada 14 dias. Mensalmente foram colhidas amostras de fezes e sangue dos animais para exames laboratoriais e realizadas avaliações de ganho de peso e condição corporal. O exame da OPG revelou não ter havido diferença estatística entre as médias dos três grupos (G1= 842, G2= 742 e G3= 1428), prevalecendo H. contortus. Todas as outras avaliações (volume globular, hemoglobina e ganho de peso) não apresentaram diferença entre os tratamentos. Somente 35% dos animais do grupo 3 apresentaram grau Famacha 3. Os resultados com o uso do método Famacha demonstraram uma redução de 91,5% em relação ao custo de tratamentos antiparasitários e uma diminuição de tratamentos de 93,4% em relação aos grupos 1 e 2. No Estado de São Paulo, Dal Corso (informação pessoal) utilizou o método Famacha em um rebanho ovino da raça Suffolk, considerado pequeno (50 animais), e posteriormente da raça Santa Inês. A Figura 4 ilustra a transição entre essas raças durante o período de 2 anos (16/7/2003 a 29/8/2005), com avaliações em intervalo médio de duas a três semanas. É possível observar claramente o melhor desempenho da raça Santa Inês sob infecção natural de H. contortus (100%), mesmo durante épocas de alto risco epidemiológico (23a avaliação).

Figura 4. Frequência do grau Famacha em rebanho Suffolk (1ª a 22ª avaliação) e Santa Inês (23ª a 43ª avaliação), em São Paulo.

Fonte: Fernando Dal Corso (Informação pessoal)2.

Situação semelhante pode ser descrita em uma propriedade de 63 ha no Município de Dumont, SP, com 400 matrizes Santa Inês e reprodutores Dorper (rebanho médio-grande), e frequente parasitismo de H. contortus (60% a 80%), Trichostrongylus spp. (20% a 30%) e Oesophagostoum spp. (2%) ao longo do ano. Antes da adoção do método Famacha, todo o plantel era tratado com moxidectina 1% injetável (Cydectin NF, Fort Dodge) em intervalos de 60 dias. Atualmente o manejo do rebanho segue um calendário fixo, em que as ovelhas prenhes são tratadas 30 dias antes do parto e 5 dias após. Somente dois tratamentos táticos são realizados em todo o plantel ao longo do ano, no início do período chuvoso e no início do período seco. Entretanto, no ano de 2005, em virtude da seca prolongada, não foi realizado o tratamento do início do período chuvoso. O método Famacha tem sido aplicado quinzenalmente, desde julho de 2003. No ano de 2005, após 22 avaliações, foram tratados, em média, seis animais por data, demonstrando uma redução de aproximadamente 94% (2.400 doses versus 133 doses) em comparação com os anos anteriores. Esse índice é considerado um dos mais altos já encontrados no Brasil e demonstra a segurança e a economia que se pode alcançar em nível de campo após treinamento técnico. Anteriormente o índice médio de mortalidade em borregos era de 8% (até 10 dias pós-nascimento) e de menos de 2% para animais de outras categorias, ocorreu uma redução para menos de 1% (borregos) após a adoção dessa nova estratégia.

Vatta et al. (2002) avaliaram a condição da mucosa de caprinos em cinco regiões de clima parcialmente seco (539 mm3/ano a 935 mm3/ano) na África do Sul e obtiveram alta correlação com a incidência de hemoncose (novembro a abril), redução no percentual de hematócrito e diagnóstico de anemia clínica (Famacha). Os autores enfatizam que, quando a incidência de H. contortus é elevada, deve-se adotar o método Famacha como parte de um programa integrado de controle. Nesse estudo, foram tratados em média 50% a 55% dos animais.

É importante lembrar que mesmo os animais que recebam tratamento químico não devem ser separados do rebanho. O intuito é fazer com que os ovos resistentes, eliminados por parasitas adultos que sobreviveram ao tratamento, sejam diluídos com a população em refugia, mantendo assim uma proporção significativamente maior do gene para susceptibilidade ao composto utilizado, disponível na pastagem.

Embora a estação de chuva (inverno) seja curta em grande parte da região Nordeste do Brasil, a falta de investimento na formação técnica, o baixo grau de instrução dos produtores e o uso indiscriminado de produtos antiparasiticidas somente agravam a situação da resistência parasitária. A implantação do método Famacha foi realizada por meio de um projeto da Secretaria de Estado da Agricultura, da Pecuária e da Pesca do Rio Grande do Norte, na região Central e Cristalino-Seridó, entre setembro de 2005 e agosto de 2006. O intuito foi atender produtores de baixa renda e aumentar a fonte de proteína na dieta. O projeto atuou em 33 cidades com 12 técnicos treinados, atendendo 240 propriedades. No total, foram acompanhados 16 mil ovinos e 18 mil caprinos. A média de animais tratados foi de 44,7% para ovinos e 52,3% para caprinos, totalizando mais de 100 mil avaliações. Durante a vigência do projeto, foram treinados mais de 100 técnicos para exercer as funções de campo. Essa forma de transferência de tecnologia foi bem aceita pelos produtores locais, pois consolidou e difundiu a estratégia de controle parcial seletivo contida no Sistema Integrado de Controle Parasitário – Sicopa (MOLENTO et al., 2007a).

Ganho de peso em cordeiros: Famacha versus tratamento supressivo

Mahieu et al. (2007) verificaram a eficiência do método Famacha, feito quinzenalmente com a contagem da OPG e coprocultura (H. contortus), e o crescimento pós-desmama (70 dias) em 230 cabras da raça Creole e suas crias, criados em pastagem irrigada. O grupo não tratado apresentou OPG semelhante ao grupo tratado (Netobimina), comprovando o possível e importante papel da refugia para o grupo não tratado e demonstrando, assim, que animais desse grupo apresentam OPG em níveis aceitáveis; embora sejam necessários mais estudos para esclarecer alguns mecanismos de resposta imune em animais resistentes e resilientes/tolerantes. O grupo tratado recebeu três tratamentos, e 60% dos animais no grupo Famacha permaneceram sem tratamento. Comparado ao grupo não tratado Famacha (P<0,0001), o hematócrito foi menor para o grupo tratado. A média final de ganho de peso foi significativamente maior para o grupo não tratado (6,03 kg) em contraposição ao grupo tratado (6,77 kg) (P<0,0001). Após o desmame, as diferenças na taxa do crescimento deviam-se ao peso aos 75 dias, sem acumular os efeitos do método Famacha.

O peso de 34 cordeiros (n=17/grupo), desmamados e submetidos ao mesmo manejo, foi determinado utilizando duas estratégias de controle parasitário: G1, método Famacha, e G2, tratamento preventivo com intervalo de 30 dias, durante 120 dias em São Martinho da Serra, RS (DEPNER et al., 2007). Os animais do grupo G1 foram avaliados em intervalos médios de 14 a 21 dias. Para tais avaliações, foram utilizados o método Famacha, o escore de diarreia (Dag Score) e o escore de condição corporal. Foram tratados com moxidectina 1% (Cydectin NF, Fort Dodge Saúde Animal) os animais que apresentaram algum comprometimento em relação às observações clínicas e aos graus 3 a 5 do guia Famacha. Os animais do grupo G2 receberam tratamento com o mesmo composto do grupo G1 até o final das avaliações. Amostras de fezes de todos os animais foram colhidas, para que se realizasse exame de OPG e coprocultura, avaliação de ganho de peso e de condição corporal em intervalos mensais para ambos os grupos.

Comparados aos animais submetidos ao método de tratamento preventivo (G2), os animais acompanhados pelo método Famacha (G1) obtiveram uma redução de 87,5% no custo dos tratamentos (base de R$ 0,45/tratamento/animal). Os dados de ganho de peso e escore corporal mostraram a ausência de efeitos negativos na produtividade (Figuras 5 e 6). Os animais do grupo G1 demonstraram rendimento significativamente maior (P<0,03) do que os do grupo G2 durante o segundo intervalo de avaliação (DEPNER et al., 2007).

Figura 5. Médias mensais de peso (kg) do grupo preventivo e tratamento Famacha durante o período de 4/11/2004 a 5/3/2005.

Fonte: Depner et al. (2007).

Figura 6. Condição corporal dos grupos preventivos (tratamento mensal) e tratamento Famacha durante o período de 4/11/2004 a 5/3/2005.

Fonte: Depner et al. (2007).

Os resultados da OPG em ambos os grupos, entre os meses de novembro a janeiro, apresentaram grande semelhança. O número de larvas potencialmente infectantes encontradas na pastagem nesse mesmo período foi acima de 1.000 larvas/kg/MS. Os resultados da coprocultura demonstraram a predominância do gênero Haemonchus spp. de 64,1%, no tratamento preventivo, e de 58,2% no Famacha. Também foram observados gêneros Trichostrongylus sp., Ostertagia sp. e Cooperia sp.

Com base nos resultados obtidos nesse trabalho, concluiu-se que o ganho de peso e os valores de escore corporal não foram comprometidos ao se adotar o sistema de tratamento parcial seletivo, deixando aproximadamente 91% dos animais sem tratamento. Os dados apresentados reafirmam a aplicabilidade do método Famacha, como alternativa de controle sanitário em criações extensivas, quando existe alta prevalência do parasita H. contortus.

Cuidados ao utilizar o método Famacha

O método Famacha deve ser utilizado como uma ferramenta acessória, fazendo parte do Sicopa (MOLENTO, 2004). Esse método é restrito à ocorrência de infecção por H. contortus, para o qual pode ser eficazmente monitorado. Entretanto, deve-se observar demais sinais clínicos característicos de outras parasitoses, como Fasciola hepatica e/ou outras causas de anemia, por exemplo a subnutrição. Ainda, a irritação ocular local, por corpo estranho ou até mesmo em razão de momentos de estresse dos animais, causa aumento da circulação nos pequenos vasos. O avaliador deve estar atento para que esses fatores sejam levados em consideração, a fim de que não negligencie o tratamento em animal suspeito.

Jaeger et al. (2003) revelaram que a avaliação pelo método Famacha em ovelhas pré e pós-parto pode apresentar baixa correlação entre o grau determinado visualmente e a contagem de OPG. O exame do grau de anemia impôs tratamento a 33% dos animais e a OPG a somente 13%. O fato de ter havido um alto índice de animais tratados no experimento não prejudica a aplicação da metodologia, pois é possível envolver essa categoria animal que necessita de tratamento dentro do grupo e apresenta a palidez fisiológica durante esse período, não caracterizando sinal de patologia. No entanto, é prudente quantificar a presença do H. contortus na propriedade para melhor alcançar os objetivos.

Salles et al. (2001) dividiram três grupos de 30 animais: a) grupo supressivo: com tratamento antiparasitário de todo o rebanho a cada 30 dias; b) grupo estratégico: com três tratamentos em todo o rebanho; c) grupo Famacha: com apenas tratamentos individuais. O hematócrito, a coprocultura, o peso vivo e a condição corporal foram avaliados durante 2 anos no Uruguai. Nesse período, o ano de 1999 foi atípico e isso pode ter favorecido a aplicação do método Famacha. Já no período seguinte, as condições ambientais favoreceram o aparecimento de uma carga de H. contortus mais intensa, demonstrada pela alta correlação entre o hematócrito e a coloração da conjuntiva. Em virtude dessa intensa infecção, foi relatada a ocorrência de 13 mortes causadas por verminose, 10 do grupo Famacha e 3 do grupo estratégico (Tabela 4). É imperativo ressaltar que a metodologia de tratamento utilizada foi a da primeira versão do método Famacha, em que somente animais com grau 4 e 5 receberam medicação.

Tabela 4. Número de tratamentos, peso da lã suja (PVS) e peso vivo (PV)(1).

Ano

Esquema

Tratamento

PVS(2)

PV(2)

Morte (%)

Supressivo

300

111a

111a

0

1999

Estratégico

90

100b

100b

0

Famacha

11

95b

100b

0

Supressivo

225

114a

109a

0

2001

Estratégico

100

100b

100b

3

Famacha

66

101b

91c

10

(1) Calculado sobre a base 100 do grupo estratégico e o número de mortes em porcentagem dos animais por grupo, durante 2 anos.

(2) Letras diferentes na mesma coluna indicam diferenças estatísticas (P<0,05).

Fonte: Salles et al. (2005).

A categoria mais sensível às parasitoses é a de cordeiros e cabritos a partir da 3ª semana de vida até o 8º e 12º mês, por causa da baixa resposta imune e grande susceptibilidade. Para essa categoria, sugere-se que os animais sejam avaliados a partir de 20 a 25 dias de idade, seguindo uma rotina em períodos curtos e diferenciados dos animais adultos.

Apesar de Noya et al. (2005) determinarem que o método Famacha não pode ser aplicado em bovinos naturalmente infectados, em virtude da ausência de relação entre o valor do hematócrito (29%) e a cor da mucosa conjuntival (80% de animais brancos/anêmicos), esse trabalho foi realizado em um período de seca prolongada, em que os animais permaneceram por até 15 horas sem alimento ou água, provavelmente desencadeando uma hemoconcentração. Os autores ainda afirmam que o método Famacha pode ser insuficiente quando fatores externos, como clima e nutrição, afetam os animais. Entretanto, o maior descuido desse experimento foi a baixa taxa de infecção parasitária nos animais. É necessário testar a confiabilidade e a especificidade do método Famacha em outros animais, como lhamas e alpacas, entre outros cervídeos infectados com Haemonchus sp.

Treinamento de avaliadores

O treinamento para observadores, por meio de cursos teórico-práticos, é fundamental para que o avaliador possa aprender a julgar as variações da coloração da mucosa. Ele deve ser ministrado por médicos-veterinários devidamente treinados e deve abordar a epidemiologia dos parasitas sugadores de sangue e suas patologias (haemoncose), a biologia do H. contortus, a resistência parasitária, a refugia e os fundamentos do método Famacha. A demonstração prática com avaliação clínica deve ser realizada para esclarecer como expor a conjuntiva corretamente e também para permitir a observação, pelos alunos, de animais que tenham diferentes tons de coloração.

Os participantes devem observar animais saudáveis e aprender a expor a conjuntiva de forma correta (ver tópico anterior). Os autores do método afirmam que alguns animais devem ser preparados quando não houver as cinco tonalidades (vermelho a branco) no rebanho. Essa preparação consiste na retirada de determinado volume de sangue de animal saudável, provocando nele uma anemia clínica artificial. Contudo, a opção de preferência é utilizar outras técnicas didáticas, como vídeos e fotos, ou outros locais de avaliação para tal demonstração. Proponho a utilização de técnicas didáticas alternativas. Essa proposta recebe apoio dos participantes de cursos e de Comitês de Ética no Uso de Animais em Ensino e Pesquisa e remete de forma consciente ao tema do bem-estar animal.

As variações entre os graus estimados pelo guia Famacha e os valores de hematócrito diminuem quando o avaliador adquire certa prática no método, discutindo suas dúvidas e permitindo-se mudar de opinião. Com base em relatos pessoais, pode-se concluir que essa fase ocorra entre cinco a oito avaliações para caprinos e ovinos. É importante relembrar que o avaliador deve aprender os conceitos e dar importância para os exames laboratoriais sempre que existir a necessidade do conhecimento do gênero parasitário presente e da determinação quantitativa do grau de infecção.

O técnico deve entender que o método Famacha é uma prática facilitadora e a observação da coloração da mucosa é um sinal clínico específico, porém não só da infecção por H. contortus. O cartão de cores é autoexplicativo, pois possui símbolos e cores que indicam a gravidade de cada situação. Bath et al. (2001) esclarecem que o cartão deve ser compreendido inclusive por pessoas não alfabetizadas.

Relação dos dados do Famacha e características de produção (fenotípica e genotípica)

A introdução de produtos antiparasitários de alta eficácia e largo espectro de ação praticamente anulou o processo de seleção natural nas populações parasitárias. Associado a isso, surgiu o conceito de se eliminar/erradicar os parasitas, tratando todo o rebanho de forma intensiva.

O método Famacha e o valor de hematócrito são as únicas formas de estimar com menor variação a herdabilidade da característica de tolerância quando os animais estão acometidos de H. contortus. Quando se utiliza o método Famacha de tratamento parcial seletivo, pode-se observar que vários animais se comportam de forma saudável, mesmo na ausência de tratamento químico, como mostra a Tabela 5 (BISSET et al., 2001). Esses animais são chamados resilientes e resistentes, porque podem manifestar sua resposta ao ataque de forma diferente dos animais susceptíveis. Animais resistentes têm a habilidade de suprimir o estabelecimento dos parasitas, enquanto os resilientes podem manter níveis aceitáveis de produção, mesmo apresentando certo grau de infecção (RIFFKIN; DOBSON, 1979).

Como se observa nos dados da Tabela 5, todos os aspectos examinados diferem significativamente entre os grupos comparados. Essas informações sugerem que o percentual de hematócrito, assim como o método Famacha, identifica eficazmente os animais resistentes (OPG negativo) e os resilientes (OPG positivo, ganho de peso, entre outros). Isso demonstra a possibilidade de diminuir o número de tratamentos no rebanho e de transmitir essas características para uma nova geração de hospedeiros, selecionando gradativamente animais por heterose intrarrebanho. Desse modo, ocorreria também o aumento das chances de se identificar animais mais aptos para a resistência e a resiliência, os quais poderão permanecer no rebanho. Eles poderão tornar-se reprodutores, pela precocidade no ganho de peso e qualidade da carcaça. Espera-se que o técnico que utiliza o método Famacha pelo período de no mínimo 6 meses possa identificar os animais mais susceptíveis (anêmicos e parasitados) e programar a substituição e/ou retirada deles do rebanho.

Tabela 5. Comparação (valores de P) entre peso vivo, ganho de peso (15/12/98 a 16/2/99), escore corporal, percentual de hematócrito, grau Famacha e contagem de ovos nas fezes entre reprodutores Merino, tratados ou não.

Característica

Tratado

Não tratado

Diferença (P<)

Peso vivo (kg)

43,35

45,95

0,01

Ganho de peso (kg)

2,48

3,92

0,01

Escore corporal

2,33

2,47

0,05

Hematócrito (%)

15,7

24,0

0,01

Grau Famacha

3,48

2,20

0,01

Contagem OPG (unid.)

22,400

11,559

0,01

Fonte: Bisset et al. (2001).

Vlassoff et al. (1999) acompanharam os valores da OPG e sugeriram que a seleção de animais resistentes para programas reprodutivos seja feita em animais com idade entre 12 e 18 meses, em razão do bom índice de repetibilidade para esse parâmetro. Esse critério também diminuiria as chances de encontrar variações na OPG, que normalmente ocorrem em animais muito jovens e fêmeas grávidas, por causa do fenômeno de aumento peripuerperal.

Molento et al. (2007b) afirmaram, após 18 avaliações (ago/2003 a jul/2004), que somente 9,5% do rebanho de fêmeas Ile de France e Texel em reprodução foram tratadas, o que representou um benefício de 450%, quando comparado ao manejo preventivo/supressivo adotado anteriormente. Foram observadas a manutenção dos índices reprodutivos, como taxa de parto e natalidade, e peso e mortalidade de cordeiros, e a diminuição de 80,4% no número de doses de medicamentos durante 2002 e 2003, com manejo supressivo, e de 2004 a 2006 com o Sicopa/Famacha (Tabela 6). Os autores sugerem a existência de um efeito importante intraespécie, que permite o equilíbrio entre o número de larvas disponíveis no pasto e a taxa de infecção em médio prazo. Essas observações evidenciam o caráter resistente e resiliente em fêmeas adultas em reprodução e a possibilidade da utilização do método Famacha como metodologia de seleção por heterose no rebanho.

Tabela 6. Comparação de parâmetros reprodutivos e econômicos em animais da raça Texel e Ile de France utilizando o controle parasitário supressivo (2002 e 2003) e o Sicopa (2004, 2005 e 2006), em Santa Maria, RS.

Parâmetros reprodutivos
e econômicos

2002

2003

2004

2005

2006(1)

Ovelhas vazias no período (%)(2)

–

15,6a

5,8b

–

–

Taxa de parto (%)

87,5a

83,9a

93a

90,6a

89,5a

Taxa de natalidade (%)

118,2a

104,3a

127a

120,5a

125a

Taxa de mortal. cordeiro (%)

4,0a

7,2a

6,0a

5,7a

3,0a

Peso de cordeiros (kg)

4,1a

4,0a

4,5a

4,2a

4,0a

Frequência de tratamentos (dias)

45/45

45/45

Seletivo

Seletivo

Seletivo

Número de doses/antiparasitário

568

965

214

73

46

Percentual de redução(3)

–

–

77,8

89,4

75,3

Total de animais no rebanho

70

119

94

85

85

(1) Valores representativos do primeiro semestre de 2006.

(2) Letras iguais na mesma linha indicam ausência de diferença estatística (P<0,05).

(3) Valores calculados com base na média dos anos 2002 e 2003.

Fonte: Molento et al. (2007b).

Programa preventivo versus tratamento parcial seletivo

É imperativo esclarecer as diferenças básicas entre os programas sanitários preventivos, em que se tratam todos os animais do rebanho, e o tratamento parcial seletivo. Essas diferenças são técnicas e também conceituais, e a prioridade no caso do controle preventivo é tratar todos os animais do rebanho em períodos regulares, em virtude do curto período de proteção dos medicamentos antiparasitários, da constante reinfecção dos animais ao longo do ano (ovinos e caprinos não adquirem imunidade etária completa contra parasitas) e do chamado “efeito Iceberg”, quando o técnico ou proprietário observa que uma pequena porção do rebanho se apresenta debilitada e decide tratar todo o rebanho.

Os programas preventivos foram difundidos em uma época em que a farmacologia dos produtos permitia uma proteção de até 30 dias. Posteriormente, e com novas tecnologias, foram desenvolvidos produtos com capacidade de proteção acima de 100 dias. Entretanto, produtores e técnicos adotaram uma rotina de utilização frequente, com pouca variação entre intervalos (30, 45 ou 60 dias), pouco respeitando a cinética dos produtos e a variação entre raças, vias de aplicação, espécies de parasitas, etc. O “efeito Iceberg” fundamenta-se no conceito de que as parasitoses são enfermidades de rebanho e todos os animais estarão, em diferentes graus, parasitados/infectados após o término da proteção química. Assim, o técnico, ao observar alguns animais com sinais clínicos indicativos de uma parasitose, recomenda o tratamento de todos os animais, com o objetivo de eliminar os parasitas dos animais mais acometidos e de prevenir a contaminação no restante do rebanho, por causa da possível contaminação subclínica dos animais (Figura 7 – Conceito tradicional).

Figura 7. Conceito do tratamento tradicional preventivo (efeito Iceberg) e do parcial seletivo com o método Famacha.

Fonte: adaptado de Armando Nari (Informação verbal3).

Na visão crítica do produtor, o “efeito Iceberg” é coerente, e a solução adotada de prevenir/erradicar é a mais lógica, visto que se pode ter efeitos econômicos demasiadamente prejudiciais caso venha a ocorrer óbitos de animais aparentemente sadios.

No caso do tratamento parcial seletivo, recomenda-se que os animais sejam avaliados individualmente, de maneira que se identifiquem aqueles com sinais clínicos aparentes (anemia, diarreia, edema submandibular e baixa condição corporal), e seja feita a contagem de ovos nas fezes, e, com base nesta, sejam definidos os animais que serão tratados ou não (Figura 7 – Famacha). Dessa forma, permite-se que certa quantidade de animais (resistentes e resilientes), possivelmente da mesma categoria ou raça e que recebem o mesmo manejo, seja mantida sem necessidade de tratamento. Bisset et al. (1996) confirmam que programas reprodutivos com vistas à resiliência – por meio dos parâmetros sem tratamento ou com valores binários de seletividade –, embora lentos, promovem o desenvolvimento de rebanhos de cordeiros com melhor crescimento e menor grau de diarreia em períodos de desafio parasitário, ainda requerem menor número de tratamentos antiparasitários.

Essa avaliação deve ocorrer em intervalos inferiores ao período pré-patente dos parasitas, a fim de que se previna a ocorrência de casos de infecção hiperaguda e se alcance resultados significativos. Também, sugere-se que o técnico tenha conhecimento das condições climáticas locais, julgando, quando adequado, a alteração nos intervalos entre as avaliações/exames.

As discussões acerca da viabilidade de implantação do tratamento parcial seletivo em propriedades de criação de ruminantes e até de equinos têm despertado interesse não só dos envolvidos com a manutenção e criação animal, como também das indústrias de agronegócio e dos pesquisadores, no que se refere a embasar os dados com a visão crítica, para divulgação desses, e a comparar os sistemas sanitários. Outro objetivo é desenvolver estratégias e modelos para avaliação dos ganhos nas áreas de epidemiologia, clínica, genética e zootecnia.

Considerações finais

As estratégias de controle sanitário apresentam grande variação e dependem do grau de conhecimento do profissional técnico envolvido e da disponibilidade financeira para cada situação. A rotina do método Famacha faz com que o produtor, o técnico de campo, os agentes de extensão e principalmente os novos profissionais desenvolvam habilidades e passem a oferecer serviços diferenciados, sem alterar demasiadamente o manejo das propriedades, inclusive propondo ações que reduzam os gastos com medicação antiparasitária e mantenham a eficácia desses produtos com a utilização do tratamento seletivo.

Aconselha-se desenvolver um sistema de registro das ocorrências com a marcação dos animais tratados, para que se possa interpretar os dados mais facilmente e, na sequência, adotar medidas pertinentes. O técnico e o produtor devem estar atentos ao benefício que as estratégias de tratamento seletivo promovem mediante a diminuição da pressão de seleção na população parasitária, a fim de preservar a eficácia das drogas e auxiliar na manutenção de populações em refugia.

Os autores do método, assim como todas as entidades parceiras durante o desenvolvimento das pesquisas na África do Sul e na Organização das Nações Unidas para Agricultura e Alimentação (FAO), informam ser essencial que o usuário interprete atentamente todas as informações para melhor compreender as instruções e obter a máxima vantagem. Embora o material reunido para a confecção deste capítulo contenha informações oriundas de fontes científicas e técnicas, o objetivo dele é informar o leitor sobre essa técnica inovadora.

Referências

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BATH, G. F.; HANSEN, J. W.; KRECEK, R. C.; VAN WYK, J. A.; VATTA, A. F. Sustainable approaches for managing haemonchosis in sheep and goats. Rome: FAO, 2001. 129 p. Final Report of Food and Agriculture Organization (FAO), Technical Co-operation Project No. TCP/SAF/8821(A).

BATH, G. F.; MALAN, F.; VAN WYK, J. A. The Famacha ovine anemia guide to assist with the control of haemonchosis. In: CONGRESS OF THE LIVESTOCK HEALTH AND PRODUCTION, 7., Port Elizabeth, África do Sul, 1996. Proceedings... Port Elizabeth: Associação Sul-africana de Medicina Veterinária, 1996. 5 p.

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Capítulo 17
Controle biológico

Jackson Victor de Araújo

Introdução

Entre os fatores que interferem no desenvolvimento pleno da atividade pecuária, as helmintoses gastrintestinais ocupam lugar de destaque (MacRAE, 1993). Os prejuízos estão relacionados à queda da produtividade, aos custos com tratamentos profiláticos e curativos e, em casos extremos, à morte dos animais. O conhecimento sobre a epidemiologia dos parasitas e sua interação com os hospedeiros em um determinado ambiente é requerimento importante no estabelecimento de um programa de controle efetivo no sistema produtivo. A falta dessas informações pode levar à utilização inadequada de anti-helmínticos, provocando rápido desenvolvimento de resistência e, consequentemente, aumento de casos clínicos, perdas produtivas e ecotoxicidade.

Os programas de controle parasitário eficientes estão baseados em informações sobre a disponibilidade de larvas no ambiente, as fontes de infecção, e as exigências climáticas para eclosão de ovos e viabilidade larval. Medidas preventivas baseadas nessas informações podem diminuir a frequência de tratamentos químicos e, associadas a outras formas de controle, podem reduzir a dependência em relação aos anti-helmínticos (BARGER, 1999; STROMBERG, 1997; STROMBERG; AVERBECK, 1999).

Controle biológico

Como regra de manutenção dos sistemas biológicos, toda população é regulada por antagonistas. Esse processo ocorre espontaneamente na natureza, e não depende da interferência humana. A ausência de controladores naturais pode levar a população de determinado organismo a aumentar indiscriminadamente. Normalmente, o termo “controle biológico” aplica-se à utilização de antagonistas naturais, disponíveis no ambiente para diminuir, a um limiar subclínico e economicamente aceitável, a população de um agente causador de perdas produtivas à atividade pecuária ou agrícola (GRØNVOLD et al., 1996). Na prática, o controle biológico não atua sobre estágios internos de parasitas, ele concentra suas ações sobre os hospedeiros intermediários, paratênicos, vetores e estágios larvais de vida livre, diminuindo a fonte de infecção para os hospedeiros finais; além disso, é menos impactante para o ambiente quando comparado aos métodos químicos.

Os microrganismos selecionados como antagonistas naturais devem possuir especificidade de ação e alta capacidade reprodutiva, e ainda suportar as condições ambientais no local em que o controle é realizado. A seleção de um agente que possa ser empregado comercialmente como controlador biológico de parasitas gastrintestinais de ruminantes está baseada na capacidade de produção do antagonista em escala industrial, nos custos relacionados a essa produção, na competitividade com as drogas estabelecidas no mercado e no tempo de sobrevivência do organismo em formulações comerciais. Essas formulações devem oferecer segurança a produtores, consumidores, animais tratados e ambiente, e, finalmente, devem ser efetivas no controle do organismo-alvo (GRØNVOLD et al., 1996).

Existem diversos agentes antagonistas de nematoides, tais como anelídeos, protozoários, helmintos, artrópodes, fungos, bactérias e vírus. A aplicabilidade do uso de fungos nematófagos para o controle tem sido muito investigada, com resultados promissores. O controle biológico não tem o objetivo de substituir a quimioterapia nem o de eliminar o organismo-alvo, e sim o de reduzir o número deste a níveis aceitáveis, para manter um balanço entre o patógeno e o antagonista. Além disso, ao contrário do controle químico, o biológico é direcionado para os estádios de vida livre dos parasitas no meio ambiente.

Fungos nematófagos

Os fungos nematófagos estão catalogados com mais de 150 espécies (BARRON, 1977). Eles são divididos em três grupos e podem ser isolados do solo, das fezes, do esterco e de outros ambientes ou materiais pelo método de espalhamento do solo de Duddington (1955).

O primeiro grupo, composto por fungos predadores de nematoides (Figura 1), possui a maioria das espécies. Esses fungos produzem estruturas em forma de anéis constritores e não constritores, hifas, botões e redes tridimensionais adesivas ao longo do micélio. O aprisionamento na armadilha é seguido pela penetração das hifas na cutícula do nematoide, dentro do qual ocorrem o crescimento das hifas e a digestão dos conteúdos internos.

Figura 1. Clamidósporos de Duddingtonia flagrans em placa de Petri, em meio ágar-água 2% (aumento de 10 x 10).

Foto: Jackson Victor de Araújo

O segundo grupo, denominado fungos endoparasitas (Figura 2), é capaz de infectar os nematoides por meio dos esporos que, uma vez ingeridos, desenvolvem hifas responsáveis pela absorção do conteúdo interno do nematoide. Estes fungos não produzem hifas vegetativas fora do corpo do hospedeiro, somente hifas férteis ou conidióforos com esporos.

Figura 2. Fungo Drechmeria coniospora atacando larva infectante de Haemonchus spp.

Foto: Jackson Victor Araújo

O terceiro grupo de fungos é denominado oportunista ou parasita de ovos (Figura 3) (ARAÚJO et al., 1995b). As hifas penetram na casca do ovo pelos pequenos poros existentes na camada vitelínica, causando alteração na permeabilidade da casca, que sofre expansão do volume. A hifa aumenta de tamanho ao passar pela camada vitelínica e atravessa a camada adjacente quitínica e lipídica. Como consequência do processo, a camada vitelínica divide-se, a camada de quitina torna-se vacuolizada e a camada de lipídios fica dispersa. Hifas endógenas emergem do ovo e produzem conidióforos, funcionando como fonte de conídios. Esses tipos de fungos colonizam o conteúdo do ovo ou, ainda, a larva em desenvolvimento no seu interior (MORGAN-JONES; RODRÍGUEZ-KÁBANA, 1988).

Figura 3. Fungo Verticilium chlamydosporium interagindo com ovo de Fasciola hepatica.

Foto: Jackson Victor Araújo

Os fungos predadores nematófagos são os organismos mais pesquisados, pois têm mostrado capacidade de reduzir efetivamente as populações de nematoides em condições de laboratório e no campo (LARSEN, 1999). A formação de armadilhas, ao longo de suas hifas, ocorre em resposta à presença de nematoide ou de seus excretas e de compostos biológicos, ou é induzida por condições de estresse fisiológico, como na escassez de nutrientes e de água (BALAN; GERBER, 1972). O processo de diferenciação das armadilhas dá-se dentro de 24 horas após a interação fungo e nematoide (PRAMER, 1964). Quanto maior a motilidade dos nematoides, maior o estímulo ao fungo para a produção de armadilhas (NANSEN et al., 1986, 1988), que também pode ser atribuída aos esporos (DACKMAN; NORDBRING-HERTZ, 1992).

Alguns experimentos falharam na tentativa de indicar os requerimentos nutricionais para o desenvolvimento de culturas de fungos nematófagos (COSCARELLI; PRAMER, 1962). Entretanto, foi demonstrado que eles crescem bem no meio de cultivo contendo ácido oleico e o aminoácido D-alanina como fonte de carbono e energia para o processo de formação de armadilhas (DIJKSTERHUIS et al., 1993; ROSENWEIG, 1983). O crescimento rápido e a produção abundante de micélio são dois importantes fatores para a disseminação e sobrevivência dos fungos em condições ambientais (DACKMAN et al., 1987).

Os fungos nematófagos podem apresentar esporos bastante diversificados no tamanho, coloração, forma e resistência ao ambiente. A maioria apresenta esporos secos, que emergem de estruturas de frutificação, denominadas conidióforos, essenciais na dispersão aérea dos conídios. Algumas espécies produzem conidióforos contendo apenas um conídio em sua extremidade, outras apresentam cachos de conídios em toda a estrutura do conidióforo. Estruturas denominadas clamidósporos também podem ser produzidas. Esses são esporos de parede espessa, diferenciados a partir das hifas, os quais aparecem em condições de estresse extremo e podem dar origem a hifas, conidióforos e conídios (BARRON, 1977).

Os fungos nematófagos, em sua maioria, são mitospóricos e antigamente eram classificados na divisão Deuteromycetes, classe Hyphomycetes, ordem Hyphomycetales e família Moliniaceae. Apresentam micélio septado e bem desenvolvido, e reproduzem-se agamicamente por esporos exógenos, que são formados sobre ramificações do micélio (DRECHSLER, 1937).

Até 1964, a maior parte dos fungos era classificada como pertencente aos gêneros Arthrobotrys, Dactylaria, Dactylella e Trichothecium. Posteriormente, novos gêneros foram descritos, entre eles Duddingtonia, Monacrosporium, Genicularia e Dactylariopsis (GRAY, 1987). Os estágios de reprodução sexuada desses fungos foram observados para algumas espécies que estão sendo reconhecidas como pertencentes ao filo Ascomycota (GRIFFIN, 1994). Scholler et al. (1999) têm sugerido a classificação deles pelas armadilhas que produzem e denomina-os de orbiliáceos.

O gênero Arthrobotrys Corda foi descrito por Corda em 1839 (HAARD, 1968), porém, nessa época, a capacidade de predar nematoides não foi mencionada. Todos os isolados do gênero são capazes de produzir armadilhas na presença de nematoides de vida livre, como Panagrellus redivivus ou Turbatrix aceti. O gênero é classificado como nematófago facultativo (COOKE; GODFREY 1964). A espécie Arthrobotrys robusta possui conidióforo ereto, algumas vezes ramificado, com cerca de 300 mm de comprimento e extremidade aumentada de tamanho, em que carrega normalmente seis conídios. É capaz de produzir clamidósporos e redes adesivas para predar nematoides (VAN OORSCHOT, 1985).

As espécies do gênero Monacrosporium são caracterizadas por produzirem apenas um conídio na extremidade do conidióforo. A espécie Monacrosporium thaumasium preda nematoides por meio de redes adesivas. O conidióforo é ramificado próximo à extremidade, e cada extremidade carrega um conídio (LIU; ZHANG, 1994; ZHANG et al., 1996). Normalmente é evidenciada a presença de clamidósporos em culturas de placa com meio de cultura sólido limitante (SAXENA; MITTAL, 1995).

O gênero Duddingtonia é caracterizado por produzir vários conídios na extremidade dos conidióforos (VAN OORSCHOT, 1985). Os conídios apresentam formato que varia entre elíptico e ovoide e têm septo mediano. D. flagrans é a espécie mais estudada no controle das helmintoses gastrintestinais de animais domésticos, no entanto, isso não quer dizer que seja a mais promissora, visto que isolados da mesma espécie e oriundos de localidades diferentes podem apresentar variações em sua eficácia sobre nematoides. Ademais, estudos de eficácia têm apresentado resultados similares entre diversos fungos (GOMES et al., 1999; ARAÚJO et al., 2004b e 2005a).

Esses fungos predam nematoides por meio de hifas adesivas. Produzem conídios com morfologia de 25 µm a 50 µm de comprimento por 10 µm a 15 µm de largura (COOKE; GODFREI, 1964). Geram grande quantidade de clamidósporos em matéria seca e podem ser isolados das fezes de animais e da matéria orgânica presente no solo. A combinação de fungos nematófagos Duddingtonia, Monacrosporium e Harposporium foi testada por Waghorn et al. (2002) sobre estádios de vida livre de Ostertagia circuncincta e apresentou resultados promissores. Considera-se que fungos isolados, pelo menos em seu próprio país, têm maior chance de sucesso em um programa de controle da verminose, uma vez que pertencem ao nicho ecológico em que podem ser utilizados e estão adaptados às condições ambientais.

Interação entre fungos e nematoides

O papel dos nematoides na nutrição dos fungos nematófagos ainda não é claro, e a maior parte dos fungos apresenta comportamento nematófago facultativo. Fungos predadores são capazes de invadir e consumir a carcaça de nematoides em decomposição, porém o processo de invasão é mediado apenas por hifas vegetativas em orifícios naturais, numa velocidade muito menor do que a invasão mediada por armadilhas em nematoides vivos (NORDBRING-HERTZ; STÄLHAMMAR-CARLEMALM, 1978).

Inicialmente, o nematoide é mantido aderido ao fungo por meio de uma substância fibrilar adesiva, rica em fosfatase ácida, que também é responsável pela degradação da cutícula. O processo de penetração acontece em 1 hora e está associado à presença de corpos densos ricos em enzimas, os quais atuam como peroxissomos e são encontrados apenas nas armadilhas (Figura 4), nunca em hifas vegetativas. Esses corpos são detectados na primeira hora do processo de penetração e depois desaparecem (JANSSON; NORDBRING-HERTZ, 1988). A fase final de penetração da cutícula parece ser resultado de força mecânica (VEENHUIS et al., 1985).

Figura 4. Armadilhas do fungo Duddingtonia flagrans.

Fotos: Jackson Victor Araújo

A segunda cutícula das larvas infectantes (L3) dos nematoides parece não protegê-los da predação pelos fungos, pois estes são menos hábeis em predar L3 sem cutícula externa (WHARTON; MURRAY, 1990). Contudo, em experimentos mais recentes, foi verificado que isolados de Arthrobotrys spp. tiveram mais capacidade predatória sobre larvas infectantes sem cutícula externa, o que demonstra a complexa relação entre receptores de superfície dos nematoides e ligantes presentes na parede celular dos fungos (ARAÚJO, 1998). Uma serinoprotease denominada de PII foi evidenciada como fator importante na morte e colonização dos nematoides por Arthrobotrys oligospora. Ela foi encontrada em níveis relativamente altos, principalmente nas fases finais de adesão e penetração, e não nas iniciais (AHMAN et al., 2002).

Testes de interação em condições laboratoriais

Não há normas consensuais estabelecidas entre os pesquisadores quanto à padronização dos testes para validar os fungos nematófagos. Os diversos testes seguem métodos realizados em condições laboratoriais, passagem pelo trato gastrintestinal dos animais, e em condições a campo, e nesses dois últimos mede-se a carga parasitária. Em condições laboratoriais, obtém-se o número de larvas capturadas pelos fungos ao longo do tempo.

Os estudos iniciais, utilizando fungos nematófagos como controladores biológicos de parasitas gastrintestinais, foram realizados no início do século 20, na França. Esses estudos mostraram a ação de fungos predadores sobre larvas infectantes de Strongyloides papillosus e Bunostomum phlebotomum em condições laboratoriais e no campo (DESCAZEAUX, 1939, DESCAZEAUX; CAPELLE, 1939; ROUBAUD; DESCAZEAUX, 1941).

Um dos experimentos pioneiros observou o efeito antagônico de diversos fungos predadores dos gêneros Arthrobotrys, Dactylaria, Monacrosporium e Trichothecium sobre larvas infectantes de Ostertagia ostertagi e Trichostrongylus axei (PANDEY, 1973). A avaliação da interação in vitro entre A. oligospora e larvas de Cooperia spp. e O. ostertagi resultou na diminuição da população de nematoides e gerou algumas conclusões sobre necessidades de crescimento dos fungos (GRONVOLD et al., 1985, GRONVOLD, 1989).

Foi verificada a capacidade da espécie D. flagrans de produzir armadilhas e clamidósporos, assim como a sua taxa de crescimento em presença de L3 de O. ostertagi. Os estudos indicaram ser ela uma espécie promissora no controle biológico (Grønvold et al., 1996). Vários isolados do gênero Arthrobotrys foram testados sobre L3 de H. contortus, e foi obtida redução significativa de larvas nas placas tratadas em comparação com as placas do grupo controle (MENDONZA DE GIVES et al., 1992, 1994).

Em um experimento de interação entre L3 de H. contortus de caprinos e fungos M. thaumasium e Arthrobotrys conoides, observou-se que os dois isolados são capazes de reduzir a população de larvas infectantes, porém M. thaumasium mostrou-se mais eficiente (MOTA et al., 2000). As conclusões desses estudos foram favoráveis à utilização de fungos como controladores biológicos, bem como à associação entre eles; no entanto, deve-se atentar para uma possível competição entre os fungos utilizados (ARAÚJO et al., 2004b; 2005a).

Testes de passagem dos isolados pelo trato gastrintestinal e testes a campo

As fezes frescas têm se mostrado o melhor local de atividade dos fungos nematófagos. Isso porque os nematoides gastrintestinais têm de passar do estádio de ovo aos estádios larvais iniciais antes de migrar para a pastagem como L3. Há necessidade de se determinar quais espécies fúngicas são capazes de sobreviver à passagem pelo trato gastrintestinal dos animais, germinar nas fezes e capturar o parasita.

O fungo sofre elevado estresse no trato gastrintestinal em virtude da ação enzimática e das condições anaeróbicas. Nessa passagem, ele não age sobre os parasitas existentes, pois requerem ambientes aeróbicos para o seu crescimento. Também não há multiplicação ou crescimento do fungo no trato gastrintestinal, somente trânsito.

Micélios dos fungos A. oligospora, Arthrobotrys oviformis e Geniculifera eudermata passaram pelo trato gastrintestinal de pequenos ruminantes sem perder a capacidade de predar L3 de H. contortus (WALLER et al., 1994). Isso ainda aconteceu para a espécie M. thaumasium (MELO et al., 2003) e para Monacrosporium sinense e Monacrosporium appendiculatum (ASSIS et al., 2005).

Muitas vezes, pesquisadores são questionados quanto à dosagem mínima ideal para a administração fúngica. Essa prática deve prever que seja fornecida por longos períodos e tenha como alvo as formas dos parasitas presentes no bolo fecal e possua quantidade suficiente para realizar uma “inundação ambiental” com as estruturas fúngicas. Por exemplo, embora haja variação entre os fungos, uma cobertura fúngica significativa nos bolos fecais gira em torno de 2 g de fungo para cada 100 kg de peso vivo, administrada duas vezes por semana por um período de 4 a 6 meses (ALVES et al., 2003; ARAÚJO et al., 2004a), ou mesmo uma vez por semana em experimento realizado, em caprinos, no Semiárido nordestino (SILVA et al., 2003; ARAÚJO et al., 2007).

A diminuição da carga parasitária nos animais pode ser acompanhada por exames coprológicos. Muitas vezes, o insucesso da eficácia de muitos fungos pode ser creditado à quantidade insuficiente fornecida aos animais, como observado em ovinos que receberam o fungo Arthrobotrys musiformis (GRAMINHA et al., 2005). A quantidade e qualidade dos alimentos fornecidos aos animais também podem diluir as formas fúngicas existentes no bolo fecal.

Cuidados adicionais devem ser tomados quando fungos forem associados às formulações anti-helmínticas, uma vez que os benzimidazoles e os imidothiazoles, como o levamisole, são dotados de atividade antifúngica (ARAÚJO et al., 1995a). Bons resultados com a utilização de fungos nematófagos sobre ovinos e caprinos foram obtidos por Araújo et al. (2007), Chandrawathani et al. (2003), Fontenot et al. (2003) , Paraud et al. (2007) e Wrigth et al. (2003). Resultados pouco significativos foram alcançados por Chandrawathani et al. (2004), Eysker et al. (2006), Faessler et al. (2007), Graminha et al. (2005), Maingi et al. (2006) e Rocha et al. (2007). As justificativas dos autores para o possível insucesso dos fungos foram:

• Recusa do animal em ingerir o suplemento contendo fungos (CHANDRAWATHANI et al., 2004).

• Consumo de um único alimento contendo fungos (PARAUD et al., 2007).

• Variações na prevalência dos helmintos por causa das condições climáticas (PARAUD et al., 2007).

• Diluição dos clamidósporos nas fezes (EYSKER et al., 2006).

• Dosagem insuficiente (GRAMINHA et al., 2005).

• Estresse ocasionado pela forma de preservação (MOTA et al., 2003a, 2003b).

• Variação da eficácia entre isolados da mesma espécie e alta taxa de lotação (ARAÚJO et al., 2004a).

Formulações a serem utilizadas no controle biológico de nematoides

Poucas formulações comerciais desenvolvidas para o controle de parasitas de animais utilizando esses fungos obtiveram resultados promissores (STIRLING et al., 1998). Em muitos estudos, esses fungos têm sido produzidos em substratos sólidos, como grãos de cereais, e em substrato colonizado fornecido aos animais (LARSEN et al. 1995, WALLER et al., 2001).

Os produtos Royal 300 e Royal 350 foram desenvolvidos na França (CAYROL et al., 1978, CAYROL; FRANKOWSKI, 1979), baseados no cultivo de fungos do gênero Arthrobotrys em grãos de centeio. O obstáculo a esse tipo de formulação concentra-se na obtenção dos clamidósporos em grandes quantidades e no alto custo do seu cultivo em grãos de cereais (STIRLING et al., 1998).

Recentemente, formulações à base de alginato de sódio (depósito de patente no Instituto Nacional da Propriedade Industrial (Inpi): PI04053168., 2004) têm sido avaliadas e vêm demonstrando bons resultados em condições laboratoriais e a campo (ALVES et al., 2003; ARAÚJO; SAMPAIO, 2000; ARAÚJO et al., 2000; 2004a; 2005a; SILVA et al., 2003). O fungo peletizado em alginato de sódio pode ser mantido em estoque e é confeccionado com materiais inertes, o que mostra seu potencial de utilização em rebanhos.

O fornecimento do material fúngico incorporado em blocos de suplementos minerais tem sido estudado na Austrália. Formulações minerais contendo clamidósporos do fungo D. flagrans têm obtido resultados positivos (WALLER; FAEDO, 1996). Adaptação de dispositivo intrarruminal para liberação controlada de clamidósporos tem reduzido significativamente o número de larvas infectantes nas pastagens. Foi avaliado um protótipo desse mecanismo, que somente conseguiu liberar os esporos por três semanas, período ainda considerado curto (WALLER et al., 2001). O maior ou menor tempo de eliminação do fungo está relacionado com o tempo de excreção nas diferentes espécies animais. O intervalo de tempo de eliminação dos fungos nematófagos reflete o período de ação predatória sobre as larvas nas fezes. Pesquisas que visam produzir material fúngico de maneira economicamente viável são extremamente necessárias e importantes para viabilizar a produção comercial de fungos nematófagos.

Preservação da capacidade predatória dos isolados selecionados como controladores biológicos

Para facilitar a produção em escala e dinamizar a rotina laboratorial, devem ser desenvolvidas metodologias capazes de preservar, por período prolongado, as características selecionadas dos fungos nematófagos a fim de que sejam usados em programas de controle biológico.

A preservação de culturas de microrganismos utilizados em programas de controle biológico é pré-requisito para um grande número de procedimentos industriais e de pesquisa. Os critérios de escolha para um método específico de preservação recaem na manutenção de características morfológicas e bioquímicas e na estabilidade genética, pois, caso os fungos sejam mantidos de modo a se adaptarem às condições de armazenamento, propriedades fundamentais dos isolados podem ser perdidas. Técnicas que possibilitem apenas uma pequena taxa de sobrevivência de amostras podem resultar também na seleção de organismos variantes (BROWN; GILBERT, 1995). Além disso, deve-se atentar para que o processo seja seguro e barato e ainda proporcione ao inóculo ser transportado, estocado e reconstituído com facilidade.

Há três categorias de métodos para estoque e preservação de isolados fúngicos: crescimento contínuo, secagem e suspensão do metabolismo. As técnicas de crescimento contínuo envolvem constantes transferências de um meio saturado para um meio nutritivo, propiciando ótimas condições de crescimento, podendo esses isolados serem estocados em temperatura ambiente, refrigerador ou sob camada de água ou óleo mineral. As técnicas de secagem utilizam normalmente as formas de resistência dos fungos, como esporos. Baseiam-se na redução da atividade da água e são caracterizadas por reduzir o metabolismo das células durante o período de armazenamento. Podem ser realizadas com sílica-gel, grãos de cereais e amostras de solo estéreis. Finalmente, há a possibilidade de suspensão do metabolismo a níveis basais, por meio de técnicas de liofilização e manutenção em nitrogênio líquido, que propiciam redução de atividade de água por desidratação ou congelamento (SMITH; ONIONS, 1994). Esses métodos favorecem o armazenamento dos fungos por muitos anos (MOTA et al., 2003a, 2003b).

Considerações finais

Apesar de todos os avanços realizados na pesquisa de utilização de fungos nematófagos como controladores biológicos de parasitas gastrintestinais de animais domésticos, alguns obstáculos impedem a sua completa implementação. Empresas produtoras de fármacos anti-helmínticos são relutantes em investir em pesquisas emergentes, em virtude da incerteza de sucesso e de retorno dos resultados gerados. Algumas perspectivas de pesquisa no uso de fungos para controle biológico de nematoides são: o desenvolvimento de formulações comerciais que contenham um ou mais isolados fúngicos e sejam viáveis para fabricação em escala industrial e de fácil administração aos animais; a pesquisa de outros modelos de interação entre novos parasitas e isolados de fungos nematófagos com capacidade predatória comprovada; a mensuração do impacto provocado pela introdução em grande escala de um ou mais fungos nematófagos no ambiente e a avaliação de métodos para retorno da capacidade predatória de isolados mantidos por períodos prolongados em condições laboratoriais. Portanto, pesquisas em epidemiologia, biologia e modo de ação de fungos nematófagos levarão ao conhecimento da viabilidade do emprego desses agentes no biocontrole de nematoides parasitas de animais em condições naturais.

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Capítulo 18
Controle por fitoterápicos

Cícero Temístocles Coutinho Costa
Michelline do Vale Maciel
Ana Lourdes Fernandes Camurça-Vasconcelos
Cláudia Maria Leal Beviláqua

Introdução

Entre os problemas sanitários que acometem os pequenos ruminantes, as nematodioses gastrintestinais ocupam lugar de destaque, sendo uma das maiores causas de redução da produtividade animal nos trópicos (PINHEIRO et al., 2000). O controle desse parasitismo é feito basicamente pela utilização de anti-helmínticos sintéticos. No entanto, o desenvolvimento de populações parasitárias resistentes a esses produtos é uma realidade para várias classes de anti-helmínticos (AKHTAR et al., 2000; MATTOS et al., 2004; MELO et al., 2003), sendo um dos mais importantes e atuais problemas do controle das parasitoses. Além disso, o uso inadequado dos anti-helmínticos disponíveis no mercado pode causar a contaminação do alimento e do ambiente (HERD, 1996; WALLER, 1997).

A palavra fitoterapia vem do grego e significa tratamento (therapeia) vegetal (phyton), ou ainda “a terapêutica das doenças através das plantas”. Anti-helmínticos produzidos a partir de plantas podem oferecer novas fontes de princípios ativos. Sabe-se que as plantas são uma rica fonte de antibacterianos, anti-helmínticos e inseticidas, com histórico de uso na saúde humana e, muitas delas, com valor medicinal comprovado (SOUZA, 2003). Como normalmente utiliza-se matéria-prima importada na produção dos antiparasitários sintéticos, a aplicabilidade da fitoterapia traria vantagens ambientais, já que são produtos biodegradáveis e seu suprimento pode ser autossustentável em vista da diversidade da flora dos trópicos (HAMMOND et al., 1997). A avaliação científica de extratos vegetais procura disponibilizar alternativas não sintéticas, sendo extremamente útil na descoberta de novos princípios ativos para a indústria química, além de ampliar os conhecimentos acerca da variação na produção dessas substâncias pelas plantas (GOBBO-NETO; LOPES, 2007).

Histórico e importância

A utilização de plantas medicinais, tanto na farmacopeia como na medicina popular, é praticada desde o início da civilização humana. Após a Segunda Guerra Mundial, com a descoberta dos antibióticos e o incremento cada vez maior de remédios à base de drogas sintéticas, houve um relativo abandono e até mesmo um certo ceticismo a respeito das drogas oriundas de plantas, até a década de 1970. A partir da década de 1980, essas plantas passaram a ser novamente valorizadas como fonte de propriedades curativas de baixo custo (LAMEIRA et al., 2004). O fim do século 20 e o início do século 21 foram marcados pelo grande avanço da ciência e da tecnologia, que tiveram forte impacto na medicina. Recentemente, em contraste com a quantidade de recursos disponibilizados pela indústria farmacêutica em pesquisa e desenvolvimento, o número de usuários da medicina tradicional tem aumentado de forma notória.

Observa-se que a valorização das plantas medicinais tem ocorrido por diversas razões, entre as quais: aparecimento de efeitos colaterais após o uso frequente de medicamentos sintéticos, possibilidade de descobertas de novos princípios ativos nas plantas e forma mais acessível de cura de enfermidades para a população local. Segundo Rates (2001), nos países em desenvolvimento, 80% da população usa plantas na terapêutica. Do total de drogas prescritas mundialmente, 25% provêm de plantas, sendo 121 compostos ativos em uso atualmente. Das 252 drogas consideradas básicas e essenciais pela Organização Mundial da Saúde, 115 são exclusivamente de origem vegetal; há ainda um número significante de drogas sintéticas que são obtidas a partir de precursores vegetais. Alguns exemplos de drogas oriundas de plantas são a digoxina obtida de Digitalis spp., a quinina e a quinidina, de Cinchona spp., a vincristina e a vinblastina, de Catharanthus roseus, a atropina, de Atropa belladona e a morfina e a codeína, provenientes de Papaver somniferum (RATES, 2001).

Substâncias ativas

Os princípios ativos vegetais são, na sua maioria, produzidos pelo metabolismo secundário das plantas. Eles não são essenciais para o crescimento e desenvolvimento da planta, mas contribuem efetivamente para a sobrevivência e a continuidade da espécie dentro do ecossistema, sendo responsáveis pelas relações entre a planta e o ambiente onde ela se encontra. As funções fisiológicas dos princípios ativos das plantas ainda não estão completamente esclarecidas, mas a sua produção associa-se à defesa da planta contra agentes externos, como doenças, pragas, radiação solar e ataques de herbívoros (BIESKI, 2005).

As defesas químicas da planta podem ser divididas em quantitativas e qualitativas. As quantitativas têm sua ação dependente da dosagem, sendo encontradas nas plantas em altas concentrações, podendo chegar a 60% do peso seco no caso dos taninos. As ligninas e resinas também estão incluídas na categoria de defesa quantitativa (PAIS, 1998). Por sua vez, as defesas qualitativas, como alcaloides, cardenolídeos, glicosinolatos glicosídeos e alguns terpenos, caracterizam-se pela toxicidade e estão presentes nos tecidos vegetais em baixas concentrações, geralmente inferiores a 2% do peso seco. Embora a produção das defesas qualitativas demande menos energia do metabolismo da planta do que a das quantitativas, sua ação restringe-se aos agentes não adaptados a elas, ou seja, as defesas qualitativas conferem pouca proteção, mesmo em alta concentração, contra organismos que desenvolveram mecanismos de desintoxicação ou tolerância (PAIS, 1998).

Estudos científicos em fitoterapia

A trajetória para a validação farmacológica de plantas medicinais depende do objetivo (MELO, 2001). Para a validação de plantas medicinais como fitoterápicos, são necessárias várias etapas. Inicialmente, deve-se selecionar a planta a ser testada e realizar um levantamento dos dados da espécie, incluindo identificação botânica e dados sobre o uso popular, como parte da planta usada, forma de administração, doses, tempo de tratamento, etc. Posteriormente, são necessários testes de avaliação da sua eficácia e determinação da segurança da administração aos animais (CAMURÇA-VASCONCELOS et al., 2005).

Para a obtenção de compostos ativos isolados, os extratos vegetais são, a princípio, analisados qualitativamente por cromatografia, e depois é feita a triagem para determinação da atividade biológica ou para observação dos efeitos biológicos gerais. Quando os grupos químicos presentes nos extratos são conhecidos, os métodos de produção dos extratos e de avaliação das substâncias ativas presentes são diretos. Contudo, se a composição química é desconhecida, o procedimento de extração das substâncias pode se basear no uso popular da planta ou nas extrações com solventes de polaridades crescentes (RATES, 2001). Para purificação e isolamento, os extratos ativos são sequencialmente fracionados, e cada fração e/ou componente puro é submetido a ensaios biológicos e avaliação de toxicidade em animais de laboratório (MELO, 2001).

Testes in vitro

Os primeiros testes para avaliação da propriedade anti-helmíntica de um extrato vegetal são os testes in vitro, em virtude da facilidade de execução, baixo custo e rapidez em relação aos testes in vivo. Os testes in vitro permitem uma avaliação inicial da atividade do extrato e também indicam os mais promissores, no caso de grande número de frações e/ou espécies vegetais a serem investigadas. Nesses casos, esses testes evitam o uso indiscriminado de animais de experimentação e agilizam a pesquisa.

Os testes in vitro mais utilizados são realizados com a finalidade de detectar a ação do extrato na inibição da eclodibilidade em ovos e do desenvolvimento larvar (Tabela 1). O teste de inibição da eclosão de ovos é recomendado por Coles et al. (1992) para diagnosticar a resistência a anti-helmínticos benzimidazóis. Ele é realizado com ovos de nematoides gastrintestinais recuperados das fezes de animais infectados por meio do uso sequencial de peneiras. Após o uso da última peneira, os ovos são retidos, lavados com água destilada e centrifugados. O sobrenadante é descartado, o sedimento é ressuspendido e, depois de nova centrifugação, o sobrenadante é passado na peneira de menor malha para retenção dos ovos. Estes são coletados, colocados em um cálice para sedimentação e sifonados para contagem em alíquotas. Por concentração (centrifugação) ou diluição, são preparados aproximadamente 100 ovos/vol a serem colocados em poços de placas com 24 wells. Adicionam-se os extratos vegetais, normalmente em cinco concentrações e três repetições. Após 48 horas em temperatura próxima de 27 °C, acrescenta-se uma gota de lugol para contagem no microscópio invertido dos ovos e das larvas eclodidas. Os resultados são comparados com um controle negativo (ausência do extrato da planta e presença do solvente utilizado, se for o caso). Costa (2004) indica o uso de um controle positivo contendo tiabendazol (0,025 mg/mL-1), droga padrão antimitótica (COSTA, 2004).

Tabela 1. Avaliação in vitro da eficácia de extratos vegetais sobre nematoides gastrintestinais de pequenos ruminantes.

Planta/composto

Parte da planta testada

Parasita

Eficácia

Referência

Dioclea grandiflora

(Mucunã)

Canavalia brasiliensis

(Feijão bravo do Ceará)

Farinha de sementes

H. contortus

87,4% ovicida

95,7% ovicida

Menezes et al. (1992)

Croton zehntneri (Canela de cunhã) e Anetol

Óleo essencial de folhas

H. contortus

100% ovicida

Pessoa (2001)

Mangifera indica (Manga)

Extrato etanólico da amêndoa

H. contortus

91,0% ovicida

Costa et al. (2002)

Spigelia anthelmia

(Erva lombrigueira)

Extrato acetato de etila de folhas

H. contortus

100% ovicida

81,2% larvicida

Assis et al. (2003)

Chenopodium ambrosioides (Mastruz)

Óleo essencial

H. contortus

100% ovicida

Ketzis et al. (2002)

Melia azedarach (Lírio)

Extrato etanólico de sementes

H. contortus

100% ovicida

Maciel et al. (2006)

Ocimum gratissimum (Alfavaca)

Óleo essencial

H. contortus

100% ovicida

Pessoa et al. (2002)

Cymbopogom citratus (Erva cidreira/Capim limão)

Extrato aquoso

Oesophagostomum spp.

Trichostrongylus spp.

97,0% larvicida 86,6% larvicida

Almeida et al. (2003)

Annona squamosa (Ata)

Extrato acetato de etila de sementes

H. contortus

100% ovicida

Souza (2003)

Acacia mearnsii
(Acácia negra)

Extrato de acácia (Produto Seta Sun)

H. contortus
Trichostrongylus vitrinus
Teladorsagia circumcincta

100% ovicida

Minho (2006)

Azadiracta indica (Neem)

Extrato etanólico de folhas

H. contortus

98,2% ovicida
87,1% larvicida

Costa (2004)

Ricinus communis (Mamona)

Extrato aquoso de folhas

H. contortus, Strongyloides e Oesophagostomum spp.

97,5% larvicida

Santos et al. (2006)

Bauhinia forficata
(Pata-de-vaca)

Extrato aquoso de folhas

H. contortus, Strongyloides e Oesophagostomum spp.

96,8% larvicida

Santos et al.(2006)

Synadenium grantti (Janaúba)

Extrato aquoso do caule

H. contortus, Strongyloides e Oesophagostomum spp.

99,4% larvicida

Santos et al.(2006)

Musa sp. (Bananeira)

Extrato aquoso de folhas

H. contortus, Strongyloides e Oesophagostomum spp.

96,8% larvicida

Santos et al.(2006)

Musa sp. (Bananeira)

Extrato aquoso do caule

H. contortus, Strongyloides e Oesophagostomum spp.

96,8% larvicida

Santos et al.(2006)

C. zehntneri e Lippia sidoides (Alecrim)

Óleos essenciais

H. contortus

98% ovicida
90% larvicida

Camurça-Vasconcelos et al. (2007)

Outro teste utilizado para a triagem inicial de efeito larvicida é o teste de inibição do desenvolvimento larvar que segue a técnica de Hubert e Kerboeuf (1992). Aproximadamente 100 ovos obtidos segundo a técnica já descrita são colocados em cada poço e são adicionadas Escherichia coli liofilizada, anfotericina B e meio nutritivo. O material é homogeneizado manualmente e incubado em temperatura próxima de 23 °C por 48 horas, para obtenção da larva de primeiro estádio. Depois, os extratos vegetais são adicionados nos poços em cinco concentrações e três repetições, além da preparação dos controles negativos e positivos. Nesses, pode-se utilizar a ivermectina a 0,64 mg/µL-1 (COSTA, 2004), que paralisa a bomba esofageana da larva. As placas são incubadas por mais 5 dias e, após a adição de uma gota de lugol, é realizada a contagem de larvas de primeiro e terceiro estádio e calculada a porcentagem de inibição do desenvolvimento larvar em função dos controles.

Testes in vivo

Os testes in vivo avaliam a eficácia anti-helmíntica pela redução do número de ovos por grama de fezes (OPG) ou da carga parasitária do hospedeiro por necropsia. O primeiro teste fornece uma estimativa da eficácia anti-helmíntica do fitoterápico, por meio da comparação da contagem de OPG antes e depois do tratamento. Entretanto, a contagem dos nematoides no sistema digestivo do hospedeiro tem mais acurácia. Essa contagem avalia a ação direta do fitoterápico no grupo tratado, em comparação com o não tratado, visto que a eliminação de ovos possui grande variabilidade (ECHEVARRIA, 1996).

Muitos trabalhos in vivo têm sido realizados para avaliar a atividade anti-helmíntica de plantas. Caprinos naturalmente infectados com H. contortus, Trichostrongylus spp., Trichuris spp. e Chabertia spp., após tratamento com 30 mg/kg do fruto em pó de Melia azedarach (lírio), apresentaram redução do OPG de 79%, 96% e 99%, no 3°, 10° e 15° dias após o tratamento, respectivamente (AKHTAR; RIFFAT, 1984). Girão e Carvalho (1999) também testaram essa espécie na dose de 2 g a 3 g de frutos secos triturados/kg. O material vegetal foi administrado por via oral a caprinos infectados por nematódeos gastrintestinais e foi observada uma redução de 54% do parasitismo.

Vieira et al. (1999) verificaram que caprinos apresentaram redução de 30% do OPG quando tratados com uma mistura de folhas e sementes de Chenopodium ambrosioides (mastruz), em dose única de 0,75 g/kg por via oral. Momordica charantia, conhecida popularmente como melão de São Caetano, e Anonna squamosa, conhecida como ata ou fruta-de-conde, foram responsáveis por uma redução da carga parasitária de 17,6% e 30,4%, respectivamente. Esses resultados foram obtidos em caprinos tratados por via oral com dose única de l g/kg, utilizando apenas extrato das sementes e dos galhos de M. charantia, e em outro grupo tratado com dose única de 0,3 g/kg de folhas frescas de A. squamosa.

A administração de 100 g de sementes de Cucurbita moschata (abóbora) a cordeiros naturalmente infectados, durante 5 dias consecutivos, resultou na redução de 32% do OPG (NVEMBA et al., 2006). Resultado semelhante foi obtido com as sementes de C. moschata, administradas três vezes na dose de 3 g/kg via oral, em intervalos de 13 dias. A eficácia desse tratamento, 7 dias após a administração aos animais, foi de 41% na redução do OPG (NOGUEIRA, 2006).

Taninos são compostos fenólicos de elevado peso molecular e derivados do metabolismo secundário de plantas. Hoskin et al. (1999) e Niezen et al. (2002) afirmam ocorrer redução no estabelecimento de nematoides gastrintestinais em ovinos alimentados com taninos condensados de Lolium perene e Hedysarum coronarium. Esses estudos não foram conclusivos, pois não determinaram se a redução no estabelecimento da infecção foi em razão do efeito direto dos taninos das plantas sobre as larvas na pastagem ou da mediação com o aumento da resposta imune associada à maior disponibilidade de proteínas pós-ruminal.

Athanasiadou et al. (2001) observaram efeito antiparasitário de Schinopsis sp. (quebracho) sobre Trichostrongylus colubriformis e Nematodirus battus. Houve redução da fecundidade e da carga parasitária (P<0,05) desses nematoides quando as ovelhas portadoras de tais infecções receberam 8% v/v da planta. Paolini et al. (2003) observaram diminuição do OPG de caprinos infectados experimentalmente com H. contortus e tratados por 8 dias com uma suspensão aquosa também de Schinopsis sp. (extrato disponível comercialmente), correspondendo a 5% da dieta de matéria seca. Porém, não foi observada diferença estatística quanto à carga parasitária dos grupos tratado e controle. Kahiya et al. (2003) avaliaram o efeito de Acacia karoo fornecida a caprinos infectados com H. contortus. Observou-se na necropsia da metade dos animais tratados redução de 34% da carga parasitária em relação ao controle (P<0,05), o que indica que a quantidade e o tipo de taninos influenciam na atividade anti-helmíntica.

No Vietnam, Ngo et al. (2003) constataram que caprinos tratados com cassava (Flemingia macrophylla), na dose de 1 g/kg, apresentaram redução do OPG de 83% após 90 dias de administração. Foi observada redução no OPG de 71,7% em caprinos que se alimentavam de pastagem contendo Sericea lespedeza, com 46 gramas de taninos condensados por quilograma de matéria seca (MIN et al., 2004). Resultados semelhantes foram observados na administração média de 1,36 kg de feno de Onobrychis viciifolia, planta também rica em taninos condensados. O feno foi fornecido a 60 caprinos durante 10 dias por mês, num total de 9 meses (HOSTE et al., 2005). Caprinos da raça Boer, experimentalmente infectados, receberam durante sete semanas Sericea lespedeza (22,4% de taninos condensados) e apresentaram redução no OPG de 88% nas duas últimas semanas do experimento, com aumento significativo do hematócrito. Com relação à carga parasitária, ocorreu redução do número de machos e fêmeas nas porcentagens de 61,3% e 76,5% para H. contortus, 14,2% e 36,0% para T. circumcincta, e de 26,9% e 50,0% para T. colubriformis, respectivamente (SHAIK et al., 2006).

Minho (2006) avaliou o efeito de 1,6 g/kg de extrato de Acacia mearsnii (15% de taninos condensados), fornecido a ovinos portadores de infecção natural, por 2 dias consecutivos. Verificou-se redução significativa (P<0,05) do OPG ao comparar os resultados das colheitas realizadas no início do experimento e 30 dias após. Os animais foram sacrificados no 58° dia, observando-se redução da carga parasitária para H. contortus (P<0,01), mas não para T. colubriformis (P>0,05). O mesmo autor avaliou a resposta anti-helmíntica utilizando ovinos experimentalmente infectados com os mesmos nematoides e submetidos a 2 dias de tratamento com o extrato de A. mearsnii. A avaliação da carga parasitária na necropsia foi feita no 9º dia pós-tratamento. Não foi observada diferença estatística nem quanto ao OPG nem quanto à carga parasitária entre os grupos tratado e controle (MINHO, 2006).

Azadirachta indica é uma árvore indiana conhecida popularmente como Neem ou Nim indiano e possui múltiplos usos na medicina popular. Pesquisas realizadas não encontraram resultados significativos com o extrato etanólico da semente em ovelhas infectadas artificialmente com larvas de H. contortus e T. colubriformis (HÖRDEGEN et al., 2003) e em ovelhas tratadas com folhas secas, em relação à carga parasitária e ao OPG dos animais (COSTA et al., 2006; GITHIORI et al., 2004). Resultados semelhantes foram obtidos em caprinos tratados com sementes de Neem diluídas em água e administradas três vezes por via oral (1 g/kg e 3 g/kg), em intervalos de 13 dias (NOGUEIRA, 2006). Chagas et al. (2008) também não observaram redução do OPG em ovelhas tratadas com folhas secas de Neem nas doses de 12,5, 25,0 e 37,5 g/animal dia, durante 18 meses. No entanto, quando o extrato aquoso de sementes de Neem foi administrado na dose de 25 mg/kg/pv, houve redução de 75% do OPG realizado nos dias 7, 14 e 21 pós-tratamento (MORAIS-MELO et al., 2006). Estudos com resultados tão variados indicam a necessidade de mais pesquisas com essa espécie, incluindo estudo comparativo com material vegetal obtido em diferentes regiões e com frações mais purificadas.

Considerações finais

No Brasil, há pouca integração da indústria farmacêutica com os grupos de pesquisa que trabalham com plantas medicinais para uso em animais. Até o momento, não se dispõe de fitoterápico validado cientificamente contra a verminose de pequenos ruminantes. Isso se deve, principalmente, à variabilidade dos princípios ativos e, consequentemente, à reprodutibilidade dos resultados de eficácia, o que dificulta o desenvolvimento e o registro de fitoterápicos para o controle parasitário. No entanto, é essencial promover ativamente essa área de pesquisa, visto que cada vez mais têm surgido metodologias e técnicas que possibilitam o rastreamento de substâncias e de genes de interesse. Também são importantes os testes de toxicidade em cobaias, pois o uso direto de plantas em caprinos e ovinos, sem conhecimento toxicológico prévio, pode ter sérias consequências na saúde dos animais.

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Capítulo 19
Resposta imune

Deborah Aparecida Negrão-Corrêa
Mauro Martins Teixeira

Introdução

Infecções produzidas por nematoides gastrintestinais são altamente prevalentes na população humana e em animais, especialmente em criações intensivas. Na população humana, estudos recentes estimam que mais de um quarto da população mundial encontra-se infectada por nematoides, e a maioria das pessoas infectadas vive em países em desenvolvimento localizados em regiões tropicais e subtropicais (CHAN, 1997; CROMPTON, 1999). A infecção por nematoides gastrintestinais também é um dos principais problemas na produção animal, pois ocasiona perdas econômicas em razão da mortalidade de animais e da redução da produtividade de carne e leite.

Segundo os dados do anuário estatístico, apresentado pelo IBGE (2005), o Brasil possui um rebanho caprino estimado em 10,307 milhões de cabeças, das quais 9,543 milhões são criadas na região Nordeste, cujos principais estados produtores são Bahia, Pernambuco, Piauí e Ceará. O rebanho ovino está estimado em 15,588 milhões de cabeças, sendo a região Nordeste (9,110 milhões de cabeças) e a Sul (4,452 milhões de cabeças) as principais produtoras (IBGE, 2005). O parasitismo por nematoides gastrintestinais é um dos principais fatores a limitar a produção de caprinos e ovinos, induzindo um retardo no crescimento dos animais e a consequente queda na produção de carne e leite, além da elevação na mortalidade (COSTA et al., 1986; HOSTE et al., 2008).

Os principais gêneros/espécies de nematoides parasitas de caprinos são Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Trichostrongylus axei, Cooperia spp., Oesophagostumum columbianum, Strongyloides papillosus e Trichuris globulosa (COSTA et al., 1986; GIRÃO et al., 1992; SILVA et al., 1998). A prevalência desses parasitas varia com a idade dos animais, a estação do ano, a região do País e o estado nutricional. Em necropsias de caprinos, realizadas em dez propriedades da região da Grande Porto Alegre, os nematoides gastrintestinais mais prevalentes foram H. contortus e T. colubriformis, presentes em infecções intensas em mais de 80% dos animais examinados (CARDOSO; OLIVEIRA, 1993). Na Região Serrana do Rio de Janeiro, em 602 caprinos provenientes de 14 criadouros, foi relatada a prevalência de 96,5% de H. contortus, 84,3% de Cooperia spp., 53,6% de S. papillosus e 18% de Trichostrongylus spp. (BONFIM; LOPES, 1994). Levantamentos realizados em caprinos criados na região Nordeste também mostraram prevalência elevada da infecção por H. contortus, T. colubriformis e O. columbianum (SILVA et al., 1998). No rebanho de ovinos, os nematoides mais frequentemente encontrados foram Trichostrongylus spp., Ostertagia spp. e Haemonchus spp. (FARIA et al., 1997).

Nematoides parasitas de caprinos também infectam ovinos. Entretanto, alguns estudos (MACALDOWIE et al., 2003; POMROY et al., 1986) indicam que caprinos são mais susceptíveis às infecções, apresentando maior carga parasitária, decorrente de diferenças no estabelecimento e desenvolvimento das larvas dos nematoides, bem como no processo de eliminação do parasita. Os autores sugerem que as diferenças observadas na carga parasitária de caprinos e ovinos sujeitos ao mesmo processo de infecção podem estar associadas às diferenças fisiológicas e à resposta imunológica desses animais. De qualquer maneira, esses resultados enfatizam a importância do controle de nematoides gastrintestinais para o desenvolvimento da caprinocultura. Esse controle vem sendo realizado, principalmente, por meio do uso de anti-helmínticos pertencentes a diversos grupos químicos, que, em razão do uso prolongado e aplicação inadequada, podem selecionar parasitas que possuem a capacidade natural de resistirem a esses quimioterápicos (ECHEVARRIA et al., 1996).

A resistência dos nematoides gastrintestinais aos anti-helmínticos em pequenos ruminantes, como ovinos e caprinos, tem sido amplamente identificada em várias regiões, incluindo a América do Sul (WALLER, 1997; WALLER et al., 1996). No Brasil, alguns relatos demonstram a resistência a esses quimioterápicos em nematoides gastrintestinais de caprinos, e um levantamento realizado no Estado do Ceará revelou que 20,6% dos rebanhos examinados apresentaram resistência aos imidazóis, 17,6% aos benzimidazóis e 35,3% manifestaram resistência múltipla (VIEIRA; CAVALCANTI, 1999).

Assim, surge a necessidade de se desenvolver novas alternativas de controle de infecções por nematoides gastrintestinais que considerem o elevado custo associado ao desenvolvimento de novas drogas e a pressão do consumidor por produtos alimentares com menos resíduo químico. Nesse cenário, a imunoterapia apresenta-se como uma alternativa bastante promissora. Contudo, para obtenção de uma alternativa imunológica de controle de nematoides são necessários, primeiramente, estudos experimentais que esclareçam as alterações imunológicas induzidas por esses parasitas e a participação dessa resposta em mecanismos que gerem proteção e/ou patologia ao hospedeiro.

Modelos experimentais que utilizam diferentes espécies de nematoides em infecções de roedores de laboratórios têm sido estudados com o propósito de elucidar possíveis mecanismos imunológicos responsáveis pela eliminação dos vermes, redução de fecundidade deles e destruição de larvas durante o processo de reinfecção. A utilização de modelos experimentais, apesar das inúmeras limitações, oferece vantagens, como baixo custo de manutenção, facilidade de manuseio e disponibilidade de reagentes, ainda os resultados obtidos nestes modelos experimentais podem, posteriormente, ser explorados em situações de infecções naturais.

Dessa forma, neste texto, serão discutidos os principais avanços no conhecimento das alterações imunológicas induzidas por nematoides gastrintestinais e sua associação com proteção em modelos experimentais murinos, e apresentados os avanços obtidos em estudos experimentais realizados com pequenos ruminantes e as perspectivas de utilização desse conhecimento no desenvolvimento de vacinas para o controle dos nematoides.

Associação entre resposta tipo TH-2 e imunoproteção em infecções por nematoides gastrintestinais

Contribuição de estudos em modelos experimentais

As alterações mais comuns durante a infecção por nematoides gastrintestinais são eosinofilia, aumento nos níveis séricos de IgE e IgG1 e mastocitose (FINKELMAN et al., 1997; URBAN et al., 1992). Elas caracterizam a resposta imune controlada por linfócitos T auxiliares do tipo 2 (linfócitos TH2), que são linfócitos que expressam o determinante antigênico CD-4 na superfície celular e que secretam, principalmente, as citocinas designadas de interleucina-4 (IL-4), IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 e IL-13 em resposta à estimulação antigênica (ABBAS et al., 1996; MOSSMAN; COFFMAN, 1989). No entanto, os possíveis mecanismos – regulados por essas citocinas e responsáveis pela proteção contra nematoides ou, em alguns casos, pelo aumento da lesão e consequentemente da patologia associada à infecção – ainda não foram claramente estabelecidos.

Infecções experimentais com Strongyloides spp. e outros nematoides em camundongos demonstram que o processo de eliminação de vermes do intestino do hospedeiro depende de linfócitos T CD4+ (GRENCIS et al., 1985; SATO; TOMA, 1990; URBAN JR. et al., 1991). Estudos subsequentes, em que se utilizaram camundongos inoculados com imunocomplexos contendo a proteína recombinante IL-4 (formulações que permitem uma meia vida prolongada dessa citocina no hospedeiro), bem como camundongos geneticamente deficientes na produção IL-4, demonstraram que a produção de IL-4 induz mecanismos imunológicos necessários para a eliminação de algumas espécies de nematoides, como Trichuris muris e Heligmosomoides polygyrus (ELSE et al., 1994; FINKELMAN et al., 1997; URBAN JR. et al., 1995).

Entretanto, a produção de IL-4 não foi necessária para o desenvolvimento de uma resposta imune capaz de eliminar a infecção experimental de Nippostrongylus brasiliensis em camundongos (FINKEMAN et al., 1997; LAWRENCE et al., 1996; NEGRÃO-CORRÊA et al., 1999). Posteriormente, ficou demonstrado que IL-13 compartilha algumas atividades biológicas com IL-4, podendo atuar sinergicamente ou mesmo substituir IL-4 na indução de vários aspectos da resposta TH-2 (MCKENZIE et al., 1998). O sinergismo entre IL-4 e IL-13 pode ser justificado pelo fato de essas citocinas compartilharem um receptor comum, o receptor de tipo II. Tanto o receptor de tipo I, que liga IL-4, como o de tipo II, que liga IL-4 e IL-13, são compostos pela cadeia alfa em associação com outra proteína, que é essencial para expressão desses receptores na parede celular. A ligação da citocina ao receptor do tipo I ou do tipo II é responsável pela indução da via de transdução de sinal, que inclui a ativação do fator de transcrição nuclear STAT-6 (MCKENZIE et al., 1998). Desse modo, infecções experimentais utilizando camundongos geneticamente deficientes para a produção da cadeia alfa, animais IL-4Rα-/-, têm confirmado que IL-4 e/ou IL-13 e, consequentemente, a resposta tipo TH-2 regulada por essas citocinas tem papel fundamental na eliminação de nematoides intestinais (FINKELMAN et al., 2004; ONAH; NAWA, 2000).

Apesar de os nematoides induzirem uma resposta predominantemente tipo TH-2, o mecanismo responsável pela eliminação dos vermes pode ser diferente para cada espécie de nematoide, possivelmente refletindo o microambiente do hospedeiro ocupado pelo parasita, sua fonte alimentar e possíveis mecanismos evasivos, desenvolvidos por cada espécie de nematoide (FINKELMAN et al., 1997; FINKELMAN; URBAN JR., 2001; LAWRENCE, 2003; NEGRÃO-CORRÊA, 2001; NEGRÃO-CORRÊA; TEIXEIRA, 2006; ONAH; NAWA, 2000). Para exemplificar, pode-se citar que IL-4, mas não IL-13, é requerida para eliminação de H. polygyrus (LAWRENCE et al., 1998), uma espécie de nematoide que, no início, se desenvolve na mucosa do intestino delgado, e depois, quando adulto, vive na luz intestinal. Já IL-13, e não IL-4, é essencial para a eliminação de N. brasiliensis (URBAN JR. et al., 1998), nematoide com ciclo pulmonar que em seguida se estabelece na luz do intestino delgado. Tanto IL-13 como IL-4 são necessárias para eliminação de T. muris, que vive na camada epitelial do ceco (BANCROFT et al., 1998), e Trichinella spiralis, que habita o epitélio do intestino delgado (FINKELMAN et al., 2004). Camundongos IL-4Rα -/- ou STAT6 -/- também são incapazes de eliminar a infecção por Strongyloides venezuelensis no mesmo período que camundongos não deficientes, apesar de produzirem IL-4 localmente (NEGRÃO-CORRÊA; TEIXEIRA, 2006; NEGRÃO-CORRÊA et al., 2006).

As citocinas não atuam diretamente nos parasitas, sendo necessário que se entenda os possíveis mecanismos imunológicos, induzidos pela produção de IL-4 e/ou IL-13 e ativação de IL-4R/STAT6, responsáveis pela proteção do hospedeiro contra infecções por nematoides, levando em consideração que alguns mecanismos podem atuar de maneira protetora para algumas espécies de nematoides e não para outras. O aumento da produção de IL-4 e IL-13 estimula a multiplicação e diferenciação de linfócitos TH-2, mastócitos e células caliciformes, os quais irão produzir outras quimicinas e citocinas, como eotaxina e IL-5, responsáveis pela diferenciação e migração de eosinófilos para o sítio da infecção (CARA et al., 2000). O aumento de citocinas TH-2 também estimula a diferenciação de linfócitos B em plasmócitos e a produção de alguns isotipos e classes de anticorpos, como IgG1 e IgE (ABBAS et al., 1996). Finalmente, existem relatos recentes da atuação direta de IL-4 e/ou IL-13 na mucosa intestinal, alterando a contração muscular (ZHAO et al., 2003) e a proliferação das células epiteliais intestinais (CLIFFE et al., 2005). Todas essas alterações imunológicas e fisiológicas podem afetar a sobrevivência de nematoides gastrintestinais, e ainda tem efeito na patologia associada à infecção.

Possíveis mecanismos efetores

Anticorpos

A participação de anticorpos na resposta imune protetora desenvolvida contra nematoides foi inicialmente sugerida pela frequente elevação de anticorpos, especialmente IgE e IgG1 (em camundongos) ou IgG4 (em humanos), durante as infecções. A transferência de soro imune ou de frações purificadas contendo anticorpos para animais não infectados resultou na diminuição de carga parasitária em alguns modelos de infecção por nematoides gastrintestinais, sugerindo a participação de anticorpos no processo de eliminação de vermes adultos e no fenômeno da rápida eliminação de larvas de nematoides durante o processo de reinfecção. Na infecção por T. spiralis, a transferência de soro imune para camundongos durante infecção primária acelerou a eliminação de vermes adultos do intestino; e, em ratos não infectados, a transferência de soro imune ou da fração isolada do soro contendo IgE levou à rápida eliminação das larvas infectantes (AHMAD et al., 1990, 1991). Contudo, a transferência de proteção obtida nesse modelo necessita, além de anticorpo específico contra o parasita, da transferência de células isoladas do linfonodo mesentérico de animais infectados, as quais migram para a região do epitélio intestinal dos camundongos receptores (AHMAD et al., 1991; WANG et al., 1990). A transferência de soro imune obtido de camundongos de linhagem resistente para camundongos susceptíveis, infectados por N. brasilensis e H. polygyrus, também tem acelerado a eliminação dos vermes (BRINDLEY; DOBSON, 1983). Apesar dessas evidências experimentais, a necessidade da participação de anticorpos no mecanismo protetor contra nematoides ainda é bastante controversa. A principal razão da controvérsia baseia-se na possibilidade de que a proteção contra alguns nematoides gastrintestinais seja obtida na ausência de qualquer nível detectável de anticorpos específicos. Exemplos disso têm sido relatados em camundongos transgênicos para produção de IL-9, que apresentam intensa mastocitose e eliminam a infecção por T. muris antes de ser detectado aumento de anticorpos específicos no soro (FAULKNER et al., 1998) ou mesmo com a transferência de células T CD4+ purificadas para camundongos “SCID”, os quais não apresentam células T ou B funcionais, e, portanto, são incapazes de produzir anticorpos (ELSE; GRENCIS, 1996).

Evidências experimentais sugerem que os principais mecanismos, pelos quais anticorpos podem participar da eliminação de vermes, geralmente envolvem a participação de células, tais como mastócitos ou eosinófilos e macrófagos, por mecanismos de hiperreatividade imediata ou citotoxidade mediada por anticorpos. A participação de citotoxidade mediada por anticorpos apresenta maior suporte experimental na destruição de larvas de nematoides em migração tecidual, como Strongyloides spp. (ABRAHAM et al., 1995) e Angiostrongylus spp. (SUGAYA et al., 2002), especialmente durante processo de reexposição ao parasita.

Recentemente, evidências experimentais da participação de anticorpos em mecanismos de proteção independentes dessas células têm sido relatadas. Experimentos que utilizam um sistema, in vitro, de invasão de T. spiralis em camadas de epitélio intestinal confirmam a função protetora de IgE, independentemente de mastócitos (BELL, 1998; NEGRÃO-CORRÊA, 2001). Estudos que utilizam anticorpos monoclonais também sugerem que alguns isotipos de anticorpos, como IgA, podem ter função neutralizante, impedindo o estabelecimento dos vermes de T. spiralis no intestino de camundongos (INABA et al., 2003). Um possível efeito neutralizante de anticorpos sobre enzimas de nematoides envolvidas na obtenção de nutrientes ou penetração no tecido tem sido explorado, com a finalidade de se conseguir vacinas para controle de nematoides gastrintestinais de interesse veterinário, como H. contortus (NEWTON; MEEUSEN, 2003) e outros nematoides que se alimentam de sangue.

Mastócitos e células caliciformes

O envolvimento de mastocitose intestinal e o aumento de células caliciformes no mecanismo de proteção contra alguns nematoides foram inicialmente propostos por causa da associação temporal entre o aumento de células e a eliminação dos vermes. A participação de mastócitos no processo de eliminação de Strongyloides ssp., a princípio, foi demonstrada em camundongos W/WV, cuja linhagem apresenta deficiência na diferenciação de mastócitos e elimina a infecção por Strongyloides ratti (ABE; NAWA, 1987; NAWA et al., 1985) ou S. venezuelensis (KHAN et al., 1993) mais lentamente do que camundongos não deficientes. Além disso, em camundongos sem o timo, a resposta protetora contra S. ratti foi restaurada após tratamento prolongado com IL-3, que restabelece a mastocitose intestinal nesses camundongos (ABE; NAWA, 1988). Esse mesmo tratamento com IL-3 não restaura a capacidade dos camundongos sem o timo de eliminarem N. brasiliensis (ABE et al., 1992). Recentemente, a importância da mastocitose intestinal no processo de eliminação de S. venezuelensis foi novamente confirmada durante a infecção em camundongos geneticamente deficientes em IL-3 (LANTZ et al., 1998) e em camundongos deficientes na produção da subunidade p85alfa do complexo phosphatidylinositol-3 quinase (PI3K), que resulta em ausência de mastócitos no intestino e no peritôneo, tornando os animais altamente susceptíveis a infecção por S. venezuelensis (FUKAO et al., 2002).

A desgranulação de mastócitos, pela ligação do antígeno à IgE ligada ao receptor de alta afinidade expresso na membrana celular, induz a liberação de enzimas proteolíticas, citocinas e mediadores inflamatórios que, além de atuarem diretamente sobre o verme, levam a modificações fisiológicas, tais como aumento de permeabilidade e de motilidade da mucosa intestinal e infiltração de células que podem atuar na eliminação do parasita. Outra hipótese pela qual a mastocitose intestinal atuaria na eliminação dos vermes do intestino, verificada em infecções experimentais com S. venezuelensis, sugere que proteoglicanas fortemente sulfatadas, presentes em grânulos de mastócitos e secretadas no intestino, dificultariam a fixação dos vermes no epitélio da mucosa intestinal e, consequentemente, facilitariam a sua eliminação (MARUYAMA; NAWA, 1997; MARUYAMA et al., 1998, 2000, 2003). Mecanismo semelhante pode ocorrer com a secreção de mucinas sulfatadas produzidas por células caliciformes durante a infecção (ISHIKAWA et al., 1995; MARUYAMA et al., 2002).

Eosinófilos

A estimulação da produção de outras citocinas e quimiocinas responsáveis pela migração de leucócitos para o sítio de infecção é outra consequência do aumento de produção de IL-4 e IL-13, e resulta na reação inflamatória observada no pulmão e na mucosa intestinal durante a infecção por nematoides. Esse processo inflamatório, à semelhança da reação alérgica, produz um infiltrado celular caracteristicamente eosinofílico nos animais infectados por nematóides. A eosinofilia tecidual e sistêmica está associada à elevação do nível de IL-5, que geralmente atua sinergicamente com a quimiocina eotaxina e com outras citocinas também produzidas durante estimulação por IL-4, como IL-3 e GM-CSF (CARA et al., 2000; SANDERSON, 1992). A produção de IL-5 é importante para regulação da produção e diferenciação de eosinófilos na medula óssea, bem como para migração e sobrevivência dessas células no tecido (SANDERSON, 1992).

A associação da eosinofilia à proteção contra helmintos parasitas foi proposta em experimentos de inoculação de soro antieosinófilos em animais, durante a infecção. Nesses experimentos, foi observado aumento da susceptibilidade do hospedeiro para T. colubriformis (GLEICH et al., 1979) e do número de larvas de T. spiralis encistadas na musculatura, apesar de não haver alteração no número de vermes adultos (GROVE et al., 1977). Estudos in vitro, utilizando soro imune e eosinófilos de ratos (CAPRON et al., 1981) ou humanos, demonstraram que esses elementos são capazes de mediar a destruição de esquistossômulos de Schistosoma mansoni e larvas de T. spiralis (BUTTERWORTH, 1984), assim como esquistossômulos de Schistosoma hematobium (HAGAN et al., 1985) e microfilária de Onchocerca volvulus. Os eosinófilos foram as principais células envolvidas na morte de larvas infectantes de Schistosoma stercoralis implantadas na cavidade peritoneal de camundongos imunes (ABRAHAM et al., 1995). Apesar desses resultados, a necessidade da participação de eosinófilos no mecanismo de proteção não foi confirmada em muitos modelos experimentais de nematoides em camundongos geneticamente deficientes na produção de IL-5, ainda, em alguns casos, a eosinofilia intestinal foi associada à patologia (CARA et al., 2000). Não obstante as controvérsias, a proteção contra as fases migratórias de S. venezuelensis e de outros nematoides tem sido associada à atuação de eosinófilos, especialmente durante o processo de reexposição ao parasita (CARA et al., 2000; HERBERT et al., 2000; ROTMAN et al., 1996).

O mecanismo responsável pela habilidade dos eosinófilos de destruir larvas de nematoides não é bem determinado, entretanto, tem sido frequentemente relacionado à secreção de várias proteínas citotóxicas e aos mediadores inflamatórios contidos nos grânulos dessas células. A desgranulação do eosinófilo é induzida por ativação do complemento e/ou, na fase mais tardia da infecção ou na reinfecção, intermediada por anticorpos parasita-específicos, processo denominado de citotoxidade mediada por anticorpos (ADCC).

Outros mecanismos

Citocinas TH-2 presentes na mucosa intestinal durante infecção por nematoides, como IL-4, IL-5, IL-9 e IL-13, aumentam a permeabilidade intestinal (MADDEN et al., 2002; SHEA-DONOHUE et al., 2001) e induzem hipercontratilidade de células musculares (KHAN et al., 2003; VALLANCE et al., 1999; ZHAO et al., 2003), produzindo alterações fisiológicas que possam dificultar o estabelecimento ou aderência dos vermes na mucosa intestinal.

Outra consequência da infecção é a alteração da arquitetura das vilosidades intestinais. Trabalhos recentes mostraram que citocinas também levam à proliferação das células epiteliais intestinais, influenciando na taxa de renovação do epitélio e consequentemente na eliminação de vermes (CLIFFE et al., 2005).

Resposta imune protetora contra nematoides gastrintestinais em caprinos e ovinos

Todas as espécies de nematoides parasitas gastrintestinais que causam perdas econômicas relevantes em pequenos ruminantes pertencem à ordem Strongylida, e a maioria deles são da superfamília Trichostrongyloidea. Apesar das semelhanças morfológicas e da proximidade evolutiva, existem diferenças no desenvolvimento desses nematoides, especialmente quanto a sua localização no tecido do hospedeiro e tipo de alimentação, que podem resultar em quadros clínicos e na indução de resposta imunológica bastante distinta (BALIC et al., 2000a). Semelhante ao descrito em infecções experimentais de roedores (LAWRENCE, 2003; NEGRÃO-CORRÊA, 2001), o mecanismo responsável pela eliminação ou controle de uma espécie de parasita não necessariamente funcionará para outra espécie de parasita que ocupa nicho distinto, embora as alterações imunológicas induzidas pela infecção por diferentes espécies de nematoides em ruminantes tenham muitas similaridades e geralmente estão associadas a um predomínio da resposta imunológica tipo TH2 (BALIC et al., 2000b, 2002; MEEUSEN; PIEDRAFITA, 2003).

O desenvolvimento de uma resposta imunológica protetora, induzida por nematoides gastrintestinais em seus hospedeiros, pode ser manifestado por redução de fecundidade das fêmeas, expulsão espontânea dos vermes adultos e eliminação das larvas durante a reinfecção, o que resultará em redução de carga parasitária.

Por causa da alta prevalência e intensidade de infecção, o parasitismo produzido por nematoides do gênero Haemonchus e Trichostrongylus é considerado mais patogênico, visto que é responsável pela alta morbidade e mortalidade em rebanhos de ovinos e caprinos no Brasil. Assim, a resposta imunológica induzida por esses nematoides será discutida nesta parte do capítulo.

É importante salientar que a resposta imunológica do hospedeiro tem influência genética, sendo amplamente conhecida a existência de raças de caprinos e de ovinos que apresentam maior ou menor susceptibilidade às infecções (HOSTE et al., 2008; PRESTON; ALLONBY, 1978). Trabalhos desenvolvidos por Amarante et al. (2004) revelaram que a raça de ovinos Santa Inês é mais resistente à infecção por H. contortus e O. columbianum do que as raças europeias Ile de France e Suffolk. O aumento da resistência foi demonstrado pelo menor número de ovos de nematoides eliminados nas fezes, menor sintomatologia e, ao final do período de 1 ano de pastagem, menor número de vermes em animais Santa Inês comparado com Ile de France e Suffolk, submetidos às mesmas condições de campo. A variação de susceptibilidade em raças brasileiras encontra-se detalhada no Capítulo 21.

Além da raça do animal, o estado fisiológico também interfere na susceptibilidade a infecções por nematoides gastrintestinais, como gestação e lactação (KAHN et al., 2003; GREER, 2008). Especialmente no período periparto tem sido relatado o aumento de carga parasitária e, em consequência, a elevada eliminação de ovos e contaminação das pastagens, influenciando toda a estratégia de controle utilizada pelo criador. O incremento da carga parasitária, observado nessa fase, tem sido associado à modulação da resposta imunológica do hospedeiro, que é influenciada pela imunossupressão endócrina (KAHN et al., 2003). No entanto, estudos recentes demonstraram que a alta susceptibilidade observado no periparto tem uma grande influência nutricional, pois a demanda aumentada de nutrientes no final da gestação e na lactação diminui a disponibilidade proteica exigida para indução e manutenção da resposta imunológica responsável pelo controle da carga parasitária desses animais (HOUDIJK et al., 2005, 2006; KAHN et al., 2003). Vale ressaltar que a proliferação, diferenciação e ativação celular observada na mucosa intestinal de animais infectados, bem como a produção de anticorpos, citocinas e outras proteínas presentes em grânulos de secreção dessas células requerem metabolismo proteico elevado. Confirmando essa hipótese, muitos relatos demonstraram que a suplementação proteica oferecida aos animais nas fases de maior demanda resulta em diminuição significativa da carga parasitária (HOSTE et al., 2008), apesar de não suplantar as diferenças genéticas que influenciam na susceptibilidade a nematoides gastrintestinais(KAHN et al., 2003).

Embora a infecção primária provocada por nematoides em murinos implique, na maioria das vezes, uma eliminação espontânea dos vermes poucos dias depois da infecção; em ruminantes e em humanos, a infecção produzida por nematoides gastrintestinais torna-se crônica. Evidências experimentais indicam que a maior resistência observada em algumas linhagens de ovinos durante a infecção por H. contortus é mediada por linfócitos T CD4+, não sendo afetada por linfócitos T CD8+ (GILL et al., 1993b). Dessa maneira, ovinos de linhagens geneticamente resistentes à infecção por H. contortus tornam-se altamente susceptíveis quando tratados com anticorpos monoclonais anti-CD4+; e a diminuição da resistência foi associada com redução da hiperplasia de mastócitos da mucosa intestinal, da infiltração de eosinófilos no tecido e da produção de alguns isotipos de anticorpos antiparasita, especialmente IgG1 e IgA (GILL et al., 1993a, 1993b). No caso de ovinos infectados por T. colubriformis, o tratamento prolongado com anticorpos anti-IFNγ ou anti-CD8 resultam em maior proteção (MCCLURE et al., 1996). Esses resultados foram reforçados com a demonstração de que linhagens de ovinos geneticamente resistentes à infecção por Haemonchus spp. produzem níveis estatisticamente elevados de citocinas do perfil TH-2, como IL-5 – produção aumentada de IgG1 e IgE em resposta à estimulação in vitro com antígenos do parasita –, em comparação com os níveis detectados em ovinos sem raça definida e susceptíveis a essa infecção. Em concordância, o abomaso dos animais geneticamente resistentes, comparado ao de animais susceptíveis, continha uma quantidade estatisticamente maior de mastócitos e eosinófilos em resposta à infecção parasitária (GILL et al., 2000). Foi observado, ainda, o predomínio de citocinas do tipo TH-2 entre as células que saem do intestino, pela via linfática, durante a infecção por T. colubriformis em linhagens resistentes de ovinos (PERNTHANER et al., 2005).

Outros trabalhos (AMARANTE et al., 2005; BALIC et al., 2000) também têm associado a hiperplasia de mastócitos de mucosa – incluindo o aumento no número de mastócitos intraepiteliais designados por leucócitos globulares, eosinofilia sanguínea e tecidual, e na produção de muco contendo IgA específico contra nematoides intestinais – ao desenvolvimento de imunidade protetora contra H. contortus em ovinos. Entretanto, o número de células inflamatórias infiltradas no intestino de carneiros infectados, quantificado em análise histopatológica, não foi associado com o nível de proteção obtido em diferentes raças do animal, sugerindo que o número de células não necessariamente indica atividade funcional (AMARANTE et al., 2005).

Apesar do reduzido número de trabalhos referentes à patogênese e à resposta imunológica induzida por nematoides gastrintestinais em caprinos, Perez et al. (2001; 2003) mostraram que a infecção por H. contortus induz infiltração de eosinófilos, mastocitose intestinal, aumento no número de células T, células B e plasmócitos. Havia um número elevado de eosinófilos, linfócitos T e plasmócitos entre 3 e 7 semanas após a infecção, e os eosinófilos estavam frequentemente associados às larvas que, em infecções de caprinos, encontravam-se profundamente localizadas na mucosa do abomaso. Em contraste, a elevação do número de leucócitos globulares e mastócitos aparecem tardiamente, mantendo-se elevado mesmo após a diminuição do número de vermes adultos.

Em ruminantes, a resistência ao estabelecimento de larvas de nematoides gastrintestinais requer múltiplas infecções e pode envolver mecanismos diversos do utilizado na rejeição da infecção primária (BALIC et al., 2000b, 2002). Ovinos submetidos a repetidas infecções por H. contortus (BARGER et al., 1985) ou por T. colubriformis (MCCLURE et al., 1992) são capazes de eliminar a maior parte das larvas infectantes utilizadas no desafio. Esse mecanismo é estágio-específico. Isso significa que a imunidade induzida por larvas (L3 ou L4), obtida pelo tratamento do animal com drogas anti-helmínticas antes da maturação do verme adulto, é eficaz na eliminação de larvas utilizadas nas infecções subsequentes, mas pouco eficiente na eliminação de vermes adultos cirurgicamente transplantados (BALIC et al., 2000b). A eliminação das larvas do desafio depende do número de infecções prévias, da carga parasitária utilizada e do período após a imunização (BALIC et al., 2000b).

A resposta imunológica desenvolvida contra larvas compreende, pelo menos, dois mecanismos principais, denominados de rápida eliminação e de eliminação tardia. O fenômeno de rápida eliminação ocorre quando as larvas infectantes são eliminadas nas primeiras horas após o desafio, geralmente entre 24 e 48 horas, antes de as larvas atingirem o tecido. Esse fenômeno tem sido mais bem caracterizado em ovinos do que em caprinos (PEREZ et al., 2003). Nesse período, não tem sido relatada infiltração expressiva de leucócitos para a mucosa do abomaso (BALIC et al., 2002). Em ruminantes, a rápida eliminação de larvas de nematoides em hospedeiros hiperimunes tem sido associada à mastocitose intestinal, especialmente com a diferenciação de um subtipo de mastócitos, localizados entre as células epiteliais da mucosa gastrintestinal, denominado de leucócitos globulares (BALIC et al., 2000b; MEEUSEN; PEDRAFITA, 2003). Infecções experimentais demonstraram que a inoculação de um grande número de larvas L3 de H. contortus (105 ou 106 larvas) diretamente no abomaso de carneiros hiperimunes induz a secreção de proteases típicas de mastócitos. Essas proteases podem ser detectadas no soro dos animais após 2 horas, e aumentam continuamente no muco do abomaso, mas não no da mucosa, até 48 horas após o desafio, sugerindo que mastócitos intraepiteliais sejam preferencialmente desgranulados pela estimulação com antígenos do parasita (HUNTLEY et al., 1992). A desgranulação imediata de mastócitos nesses ruminantes hiperimunes tem sido relacionada à hipersensibilidade imediata dependente de IgE. Além disso, alguns autores relatam que produtos derivados da ativação de complemento também resultam na ativação e desgranulação de mastócitos (BALIC et al., 2000b). A desgranulação de mastócitos libera mediadores pré-formados presentes nos grânulos citoplasmáticos, como histamina, proteoglicanas e proteases, bem como induz a produção de mediadores lipídicos, como leucotrienos e prostaglandin D2, citocinas (IL-3, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 e TNF-α) e quimiocinas (MIP-1α, MCP-1 e Rantes). A liberação desses mediadores derivados de mastócitos no trato gastrintestinal está associada ao aumento de contração muscular, de permeabilidade vascular e de produção de muco e à degradação da membrana basal das células epiteliais; essas alterações fisiopatológicas podem dificultar o estabelecimento das larvas de nematoide e facilitar sua eliminação (BALIC et al., 2000b).

Desse modo, Harrison et al. (1999) comprovaram que o muco coletado do intestino delgado de carneiros hiperimunes causava alterações nas larvas de T. colubriformis, as quais levavam à redução significativa no estabelecimento das larvas quando inoculadas em carneiros não infectados. Posteriormente, os autores (HARRISON et al., 2003) demonstraram que, além de mediadores químicos que podem diretamente afetar as larvas de nematoides, o muco de carneiros hiperimunes contém anticorpos, especialmente IgA e IgG1, que reconhecem antígenos da epicutícula de L3 de T. colubriformis, o que causa agregação das larvas e redução no estabelecimento delas no intestino do hospedeiro. Anticorpo monoclonal produzido pela purificação desse antígeno também foi capaz de reconhecer proteínas presentes em larvas de outras espécies de nematoides gastrintestinais, como H. contortus e Cooperia curticei; isso indica que é um bom candidato para imunoterapia. Recentemente, foi identificada uma proteína da família das galectinas, denominada de Gal-15, expressa nas células epiteliais intestinais e secretada no muco de animais infectados por parasitas gastrintestinais, que pode afetar a adesão das larvas ao hospedeiro (MEEUSEN et al., 2005).

As larvas de H. contortus que não são expelidas pelo fenômeno de rápida eliminação atingem o sítio de infecção no tecido do hospedeiro, induzindo a resposta imunológica associada à eliminação tardia das larvas, que geralmente ocorre dias após o desafio. A eliminação tardia tem sido relacionada ao aumento no número de linfócitos CD4+ ativados (expressando níveis elevados de MHC de classe II e CD25) e linfócitos B no linfonodo abomasal e na mucosa do tecido entre 3 e 5 dias após a infecção (BALIC et al., 2002). As células da mucosa e/ou do linfonodo abomasal de animais hiperimunes, nos quais algumas larvas utilizadas no desafio atingem o tecido, também têm demonstrado elevação transitória nos níveis de mRNA para IFN-γ e aumento nos níveis de IL-5 e IL-13 (MEEUSEN et al., 2005). Recentemente, Balic et al. (2006) verificaram uma intensa infiltração eosinofílica ao redor das larvas de H. contortus que atingem o tecido, sendo constantemente observados granulomas contendo larvas danificadas em seu interior. Entretanto, a intensidade da reação depende do período entre a imunização e o desafio, da carga utilizada no desafio e da espécie de hospedeiro e nematoide examinada.

Considerações finais

Ainda que não estejam completamente esclarecidos, os resultados referentes à resposta imunológica induzida por nematoides gastrintestinais indicam a possibilidade do desenvolvimento de alternativas imunológicas para o controle desses parasitas em ruminantes.

As primeiras tentativas em que se utilizaram larvas infectantes atenuadas por irradiação indicaram redução superior a 85% na eliminação de ovos de nematoides nas fezes de ruminantes imunizados. Entretanto, animais jovens não desenvolvem proteção, e a obtenção de material biológico necessário à imunização consiste em grande dificuldade técnica e financeira. Apesar dessas dificuldades, os resultados mostram a importância do uso da ferramenta imunológica como estratégia de controle, especialmente com o atual cenário de resistência a drogas anti-helmínticas e de valorização da produção de alimentos com o mínimo de resíduos químicos (LE JAMBRE et al., 1999).

Assim, novas iniciativas têm sido realizadas com o intuito de selecionar antígenos e estratégias de vacinação que possam ser econômica e tecnicamente viáveis para o controle, e não necessariamente para a erradicação de nematoides gastrintestinais (KNOX et al., 2001; NEWTON; MEEUSEN, 2003). Os resultados mais efetivos têm sido obtidos com a utilização de antígenos isolados do intestino de H. contortus. Embora algumas dessas proteínas não estejam completamente identificadas, a maioria delas apresenta atividade proteolítica. Essa atividade pode estar relacionada à digestão de proteínas do sangue utilizado como alimento por esses parasitas ou mesmo durante a invasão tissular, ou a mecanismos de evasão empregados pelos vermes.

A imunização de ovinos com esses antígenos tem gerado proteção que varia de 40% a mais de 90% de redução na recuperação de vermes adultos e ovos eliminados pelos animais imunizados. Para explicar esse nível de proteção, tem sido proposto que anticorpos circulantes produzidos em resposta à inoculação dessas proteínas, que em infecções naturais geralmente são pouco disponíveis no sistema imunológico do hospedeiro, são ingeridos pelo parasita juntamente com o sangue utilizado para a alimentação, podendo neutralizar processos essenciais à sobrevivência do parasita. Esse mecanismo tem sido efetivo em animais jovens e em linhagens geneticamente susceptíveis. Contudo, alguns autores levantam a preocupação da necessidade de imunizações frequentes para manutenção do estado de imunidade, utilizando antígenos que não são naturalmente apresentados ao hospedeiro durante a infecção. Estudos recentes sugerem que alguns antígenos intestinais são secretados por vermes adultos e larvas de H. contortus e outros nematoides, desse modo, podem estimular a resposta imune protetora durante o desafio por infecções naturais (JASMER et al., 2003).

Acredita-se que o conhecimento detalhado da resposta imunológica induzida durante as infecções por nematoides gastrintestinais possa gerar alternativas efetivas de controle dessas infecções. Há, obviamente, um grande caminho a ser percorrido, mas as bases da resposta imunológica começam a ser mais bem entendidas e, tendo em mente a importância das vacinas em outros campos da medicina veterinária, a recompensa pelo desenvolvimento dessas estratégias é imensa. Associado ao desenvolvimento de alternativas imunológicas, um programa de controle das infecções produzidas por nematoides gastrintestinais deve contemplar o manejo nutricional adequado e a seleção de raças de animais que geneticamente desenvolvem uma resposta imunológica mais eficiente para o controle dessas infecções parasitárias. Infelizmente, a seleção genética de raças animais que apresentam maior produção de leite e carne nem sempre considera a capacidade do animal de responder às infecções por nematoides gastrintestinais (GREER, 2008).

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Capítulo 20
Resíduos de anti-helmínticos no leite de caprinos

Ana Carolina de Souza Chagas

Introdução

A pesquisa sobre resíduos de anti-helmínticos na carne e no leite de pequenos ruminantes ainda é muito escassa. A preocupação é bem maior com relação ao leite de vaca que é amplamente consumido nas diversas regiões do Brasil. Essa preocupação também reflete os prejuízos que o excesso de resíduos de drogas no leite pode causar na produção de derivados, como iogurtes e queijos. Muitas vezes, os levantamentos realizados são motivados mais pela preocupação econômica do que pela questão da segurança do alimento em si.

Cada vez mais o consumo de carne, leite e derivados de caprinos e ovinos, tem aumentado, especialmente no Centro-Oeste e no Sudeste, regiões onde a ovinocultura e a caprinocultura eram consideradas incipientes, e hoje encontram-se em plena expansão (NOGUEIRA; MELLO, 2005; SOUZA, 2005). Esse crescimento é impulsionado pela maior apreciação dos produtos de pequenos ruminantes e pela importância do leite de cabra na alimentação de crianças com intolerância às proteínas do leite de vaca. Fórmulas destinadas a crianças que consomem leite de vaca em pó sem lactose são extremamente caras e a população encontra no leite de cabra uma alternativa mais econômica.

As principais raças utilizadas no Brasil para a produção de leite são Saanen, Anglo-Nubiana, Toggenburg, Alpina e, ainda, animais sem raça definida. O País produziu em 2006 cerca de 135 mil toneladas de leite de cabra (FAO, 2008). A produção tem crescido nos últimos anos em razão da intensa divulgação dos benefícios nutracêuticos do leite (GOMES et al., 2004) e do alto consumo por neonatos, idosos e convalescentes. O leite de cabra é comercializado no Sudeste nas formas de leite pasteurizado e pasteurizado congelado, leite em pó e em embalagens tipo longa vida UHT, iogurtes, queijos, achocolatados, sorvetes e cosméticos (CORDEIRO, 2003, 2005). Nos estados do Nordeste, os programas institucionais do governo tornaram o produto muito consumido na forma de leite pasteurizado, promovendo a suplementação alimentar de crianças na merenda escolar, de mães em fase de amamentação e de idosos, com o objetivo de reduzir a subnutrição e melhorar a qualidade de vida da população atendida. O Estado da Paraíba é o principal produtor de leite de cabra, onde estão sendo produzidos cerca de 18 mil L/dia, enquanto o Rio Grande do Norte, o Rio de Janeiro e São Paulo têm produção inferior a 10 mil L/dia (IVO, 2007). Os principais produtores do leite de cabra para esses programas são oriundos da agricultura familiar de regiões semiáridas. O exemplo de sucesso do programa nesses estados tem estimulado a criação de novas áreas de produção. Recentemente o Estado do Ceará criou o programa “Leite é Saúde”, que se propõe a comprar até 54 mil litros de leite de cabra por dia, exclusivamente de pequenas propriedades que usam a mão de obra familiar, buscando estimular a produção no estado (SEAGRI, 2008).

Os nematoides gastrintestinais, em especial Haemonchus contortus, são considerados um grande problema na ovinocultura e caprinocultura, já que são causadores de prejuízo, por causa da queda na produção de leite e no ganho de peso da carcaça, dos gastos com medicamentos e da morte dos animais jovens e debilitados. A forte resistência que os endoparasitas de caprinos e ovinos têm desenvolvido contra a maioria das drogas comercializadas no Brasil (AHID et al., 2007; AMARANTE et al., 2004; AROSEMENA et al., 1999; MATTOS et al., 2004) faz com que muitos criadores e veterinários selecionem o antiparasitário a ser utilizado na propriedade, sem um critério técnico substanciado. A ausência de eficácia das drogas pode levar à utilização de dosagens acima das recomendadas pelo fabricante, e o criador termina por não respeitar as normas básicas de segurança do alimento. O tratamento antiparasitário dos animais produtores de leite deve receber atenção especial, principalmente em criações extensivas, onde o problema da nematodeose gastrointestinal é ainda mais intenso e, consequentemente, a resistência da população parasitária estabelece-se mais rapidamente no rebanho.

As criações extensivas relacionadas à subsistência predominam no Nordeste Brasileiro. Pinheiro et al. (2000), em levantamento realizado no Estado do Ceará, detectaram que 77,9% das propriedades adotavam o regime de criação extensivo e aproximadamente 25% das 127 propriedades utilizavam ivermectina rotineiramente. Entretanto, segundo Silva et al. (2003), recentemente as criações têm se tornado intensivas em regiões próximas aos centros urbanos. Melo et al. (2003) realizaram levantamento da situação de resistência em caprinos do Ceará e detectaram que 37,5% das fazendas visitadas apresentavam nematoides resistentes à ivermectina. Os autores comentam que o uso indiscriminado dessa droga, associado às pequenas populações em refúgio, uma característica geral do clima semiárido, pode ter proporcionado o rápido desenvolvimento da resistência ao fármaco. Já na região Sudeste, a maioria das criações de cabra de leite segue o sistema intensivo ou semi-intensivo (BORGES, 2003). Mesquita e Hees (1992) detectaram eficácia de 100% da ivermectina em caprinos do Rio de Janeiro parasitados por Haemonchus spp. e Cooperia spp. Segundo Mattos et al. (2004), as variações encontradas com relação à eficácia dessa droga nas diferentes regiões do País podem ser explicadas pela diferença na frequência de uso do princípio ativo.

Alguns estudos sobre a qualidade do leite de vaca, focando a presença de resíduos de parasiticidas, foram realizados no Brasil (ANVISA 2005, 2006; LOBATO, 2001; NERO et al., 2004). Entretanto, o que se observa é a quase total inexistência de trabalhos a respeito do leite de cabra com esse objetivo.

Os resíduos

O mercado consumidor de produtos de origem animal, nacional e internacional, cresce a cada ano, e a obrigação de constância na oferta dos produtos acaba levando os criadores ao uso dos mais variados medicamentos veterinários (Tabela 1), com expectativa de manter a saúde dos animais (Tabela 2) e de elevar a produtividade dos rebanhos. Pode-se observar na Tabela 1, que 33,9% do faturamento do mercado veterinário brasileiro dá-se com produtos utilizados no controle parasitário.

Tabela 1. Faturamento do mercado veterinário brasileiro por classes terapêuticas em 2006.

Classe terapêutica

R$

%

Antimicrobianos

487.173.174,00

21,2

Biológicos

689.921.276,00

30,0

Desinfetantes

51.902.918,00

2,2

Ectoparasiticidas

286.757.534,00

12,5

Endectocidas

306.153.383,00

13,3

Endoparasiticidas/vermífugos

187.277.488,00

8,1

Outras categorias

83.765.194,00

3,6

Terapêuticos

133.857.294,00

5,8

Tônicos/fortificantes

75.495.015,00

3,3

Total

2.302.303.276,00

100

Fonte: Sindan (2008).

Tabela 2. Faturamento do mercado veterinário brasileiro por espécie animal em 2006.

Espécie

R$

%

Bovinos

1.304.332.383,00

56,7

Aves

354.569.348,00

15,4

Animais domésticos

259.783.093,00

11,3

Suínos

249.892.922,00

10,8

Ovinos e caprinos

69.069.098,00

3,0

Equinos

64.656.432,00

2,8

Total

2.302.303.276,00

100

Fonte: Sindan (2008).

Diante do uso intenso de antiparasitários, foi instituído, no Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (Mapa), o Programa Nacional de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos Expostos ao Consumo (Pamvet). Esse programa foi lançado em 2002, nos estados do Sul e do Sudeste, tendo como parceiros as Agências de Vigilância Sanitária (Anvisas), os Laboratórios Centrais de Saúde Pública (Lacens), o Instituto Nacional de Controle e Qualidade em Saúde (INCQS) e a Fundação de Ciência e Tecnologia (Cientec/RS). Os levantamentos realizados com amostras de leite de vaca já estão disponíveis, entretanto o leite de cabra ainda não está incluído no programa. A escolha das drogas a serem investigadas segue os critérios descritos pela Anvisa (2005): a) o medicamento pode deixar resíduos no alimento ou no produto final; b) a presença do resíduo oferece risco potencial à saúde humana; c) o grau de utilização em medicina veterinária e o potencial de exposição ao consumidor; d) a disponibilidade de metodologia analítica reconhecida internacionalmente.

Com base na análise desses critérios, a maioria das pesquisas concentra-se em levantamentos de resíduos de avermectinas nos alimentos (ivermectina, abamectina, doramectina, eprinomectina e selamectina) – em virtude do risco para a saúde humana –, em especial no leite. Segundo Ruyck et al. (2000), os demais antiparasitários, tais como levamisole, febendazole, thiabendazole, albendazole e oxibendazole, são normalmente considerados de baixa toxicidade para os mamíferos. Entretanto, espera-se sempre que os criadores respeitem as recomendações do fabricante com relação a doses, intervalos de aplicação e tempo de carência, para que os limites máximos de resíduos permitidos (LMR) não sejam extrapolados.

Observa-se que, nos estudos relacionados aos resíduos das avermectinas em produtos de origem animal, o leite tem maior importância em relação à carne, uma vez que as avermectinas são lipofílicas e a gordura presente no leite facilita a ligação com a droga. Dessa forma, independentemente da rota de administração, seus componentes são distribuídos extensivamente pelo corpo do animal e concentram-se particularmente nos tecidos adiposos, destacando-se também no leite, em razão da maior quantidade de gordura de sua constituição (FLAJS et al., 2005). A moxidectina é ainda mais lipofílica que a ivermectina, característica responsável pela sua maior persistência no animal (IMPERIALE et al., 2004).

Os resíduos de drogas de uso veterinário que excedem os LMRs, especialmente dos antibióticos, podem influenciar os processos tecnológicos de leites fermentados, queijos e iogurtes (YAMAKI et al., 2004). No Brasil, Lobato (2001) verificou que 17,8% das amostras de leite de vaca, oriundas de Campinas, e região metropolitana do Rio de Janeiro, possuíam resíduos de ivermectina acima de 2 partes por bilhão. Foi observada maior frequência nas amostras de leite C (34,2%), seguido do leite UHT (16,7%) e semelhante nos tipos A e B (5%). Nesse mesmo trabalho, o autor detectou que a ivermectina possuiu estabilidade de 83,3% ± 6,4% após pasteurização lenta; de 70,9 ± 15,3% no aquecimento; e de 63,7 ± 14,3% na fervura. No iogurte e no soro de queijo, os teores residuais comparados ao nível original do leite foram de 77,6% ± 17,9% e de 26,6 ± 5,6%, respectivamente, demonstrando a elevada estabilidade da droga submetida aos processos tecnológicos da indústria de laticínios. Essa característica pode acarretar riscos de intoxicação para o consumidor, em especial crianças e idosos.

Nero et al. (2004) realizaram levantamento de resíduos de organofosforados e de carbamatos no leite de vaca produzido nos estados de Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul e São Paulo, e detectaram resíduos em 74,4% das amostras. Os resultados do Pamvet são alarmantes com relação aos resíduos de avermectinas no leite de vaca tipo UHT e leite em pó. Levantamentos realizados em 312 amostras, em 2003, nos estados de Minas Gerais, Espírito Santo, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul, Santa Catarina, São Paulo e Goiás, indicaram presença de resíduos em 48% (150 amostras), sendo 39% para a ivermectina e 9% para a abamectina e a doramectina (ANVISA, 2005). Das 301 amostras analisadas entre os anos de 2004 e 2005, nos mesmos estados, detectou-se que 11% tinham resíduos de abamectina, porém somente em 3% os resíduos estavam acima do limite de quantificação do método (menor concentração do analito que pode ser determinada com precisão e exatidão aceitáveis) que é de 1,0 µg/kg. Além disso, detectaram-se, em 0,7% das amostras, resíduos de doramectina, que estavam abaixo do limite de quantificação do método. Para a ivermectina, foram encontrados resíduos em 56% das amostras, sendo 55% acima do limite de quantificação do método, e não havia amostras acima do LMR (10 µg/kg). Tais resultados indicam problemas relacionados às boas práticas, principalmente com relação à ivermectina, visto que o uso desse medicamento não é indicado para animais em lactação (ANVISA, 2006). Como no leite UHT e no leite em pó os medicamentos já estão muito diluídos, em algum ponto da cadeia produtiva os níveis dos resíduos poderiam estar altos e em concentrações consideradas de risco para a saúde humana (ANVISA, 2006).

Por causa da menor eliminação de resíduos no leite (0,1% do total administrado), em relação à ivermectina e à moxidectina (5%) (ALVINERIE et al., 1999a), a eprinomectina era a única lactona macrocíclica com período de carência zero, quando utilizada na dose recomendada (500 µg/kg). Ela é uma avermectina quimicamente modificada, composta de duas substâncias análogas conhecidas como 4”-epiacetylamino-4”-deoxyavermectin (B1a>90% e B1b<10%) (JIANG et al., 2007), e foi liberada na forma pour-on para uso endectocida em vacas lactantes (RAMBOZZI et al., 2006). Segundo o fabricante, essa droga tem ação nos canais de cloro controlados pelo ácido glutâmico e, secundariamente, nos canais de cloro controlados pelo ácido gama-aminobutírico (GabaA), provocando aumento no fluxo dos íons nas sinapses nervosas de helmintos. Mesmo não sendo uma droga liberada para cabras lactantes, seu uso tem sido registrado em propriedades de outros países (DUPUY et al., 2001).

Embora alguns trabalhos tenham demonstrado a elevada eficácia da eprinomectina pour-on em pequenos ruminantes dos Estados Unidos e da Europa (CRINGOLI et al., 2003, 2004; SHOOP et al., 1996), a mesma ação não foi detectada por Chagas et al. (2007) em cabras Anglo-Nubianas em final de lactação, no controle de nematoides gastrintestinais em Sobral, CE (Tabela 3 e Figura 1). A droga foi testada na dose de 10 mL por animal ou 850 µg/kg – dose superior à recomendada para bovinos – em 12 animais tratados, tendo outros 12 animais como controle.

Tabela 3. Número médio diário de ovos por grama de fezes (OPG) em 12 cabras lactantes da raça Anglo-Nubiana por grupo, durante 29 dias após vermifugação com eprinomectina pour-on (850 µg/kg).

Dia

-7

0

1

4

8

11

15

17

22

25

29

Média total(1)

Controle

1.933,3

2.158,3

1.833,3

1.758,3

2.225,0

2.033,3

2.333,3

2.658,3

3.241,7

3.141,7

2.700,0

2.365,1a

Tratado

1.975,0

2.416,7

1.900,0

2.458,3

4.158,3

2.783,3

2.391,7

2.300,0

2.291,7

2.516,7

2.800,0

2.544,7a

(1) Médias seguidas pela mesma letra na coluna não diferem (P>0,05) pelo teste de Tukey.

Fonte: Chagas et al. (2007).

Figura 1. Dinâmica da liberação média diária OPG em cabras da raça Anglo-Nubiana em final de lactação, tratadas com eprinomectina via pour-on (850 µg/kg), nos grupos controle e tratado.

Fonte: Chagas et al. (2007).

A observação da completa ineficácia da eprinomectina, associada ao uso comum de avermectinas na região Nordeste do Brasil, sugere que seria necessário aumentar muito a dose a ser administrada em caprinos, devendo-se avaliar a viabilidade econômica do tratamento anti-helmíntico. O uso desse produto seria uma alternativa interessante, caso não existisse o estabelecimento de resistência cruzada (CHAGAS et al., 2007).

Além de resíduos no leite, alguns estudos também foram realizados, com avermectinas, no fígado, musculatura e tecido adiposo bovino. No entanto, o principal objetivo foi o desenvolvimento de metodologias analíticas para detecção de resíduos (DANAHER et al., 2000; ROUDAUT, 1998; SOUZA et al., 2003). É importante levar em consideração que a metodologia utilizada para detecção de resíduos dessas drogas no leite é a cromatografia líquida de alta eficiência com detector de fluorescência (HPLC-FLD). Atualmente, o laboratório da Fundação Ezequiel Dias (Funed) é o único que possui esse método de quantificação validado e implantado para levantamentos do Mapa. A inexistência de metodologias mais práticas e menos onerosas, como no caso dos kits para detecção da presença de antibióticos, dificulta a obtenção de uma visão mais ampla da real situação do leite consumido, e os órgãos de fiscalização não possuem ferramentas práticas para o devido controle de qualidade do produto em relação aos antiparasitários. Os laboratórios internacionais que realizam levantamentos de resíduos de drogas deparam-se com um número de amostras elevado e com uma grande variedade de resíduos para ser rastreada em curto período de tempo. Essa situação confirma a necessidade de desenvolvimento de métodos rápidos e de baixo custo, capazes de detectar analitos ou classes de analitos de acordo com os níveis exigidos (REIG; TOLDRÁ, 2008).

A legislação e a farmacocinética das avermectinas

As avermectinas são lactonas macrocíclicas produzidas a partir do fungo Streptomyces avermectilis e possuem elevada atividade antiparasitária em dosagens relativamente baixas, dependendo do parasita-alvo (DANAHER et al., 2006). A descoberta desse grupo revolucionou o tratamento e a prevenção de doenças parasitárias, e seu uso é amplo em virtude de sua ação endectocida (KOLAR et al., 2006). Seu modo de ação inclui o aumento da entrada de cloreto dentro das células nervosas, o que resulta na interrupção dos impulsos nervosos, no bloqueio do canal, causando hiperexcitação nervosa, e na redução da transmissão nervosa. As avermectinas são agonistas potentes para o receptor GabaA e também interagem com os canais cloreto e com o portão glutamato no sistema nervoso do parasita, seja ele um artrópode, seja um nematoide. Observa-se inibição da alimentação e da oviposição nos parasitas logo após a exposição à droga, embora a morte possa ocorrer somente após alguns dias (MARTIN, 1997; MARTIN et al., 2002).

No Brasil, a Instrução Normativa Brasileira no 42, de 20 de dezembro de 1999 (BRASIL, 1999), estabelece o LMR de 10 µg de ivermectina/kg para o leite. Para a abamectina e a doramectina não existe LMR estabelecido. O Comitê Conjunto Organização das Nações Unidas para Agricultura e Alimentação (FAO)/WHO de Peritos em Aditivos Alimentares e Contaminantes de Alimentos, desde a 40a reunião em 1992 (WHO, 1993), determinou para a ivermectina e a abamectina um valor de ingestão diária aceitável (IDA) de 0 µg/kg a 1 µg/kg (JECFA, 2008).

No caso de fígado bovino, o Comitê Codex para resíduos de drogas veterinárias em alimentos (CL 2004/50-RVDF) determina o limite de 20 µg/kg para os resíduos de abamectina, 100 µg/kg para os de doramectina e ivermectina. No tecido adiposo bovino esse limite é de 10 µg/kg para a abamectina, 150 µg/kg para a doramectina, e 40 µg/kg para a ivermectina. Com relação à doramectina, ficou estabelecido ainda o limite de 10 µg/kg para o músculo e de 30 µg/kg para o rim (CODEX ALIMENTARIUS, 2005). O Comitê da FAO/WHO recomenda o LMR para bovinos de 100 µg/kg para fígado e 40 µg/kg para gordura, expressos como H2B1a (JECFA, 2008). Nos países europeus, a regulamentação 675/92 EEC determinou o LMR de 15 µg/g de H2B1a no fígado e de 20 µg/g na gordura.

No Brasil, são raros os trabalhos de persistência ou farmacocinética que visam à investigação do tempo de eliminação dos resíduos de antiparasitários no leite. Para as avermectinas, existem alguns experimentos realizados com leite de pequenos ruminantes por pesquisadores internacionais: Scott et al. (1990), Alvinerie et al. (1993), Li et al. (1993), Cerkvenik et al. (2002) e Flajs et al. (2005). Especificamente sobre a eprinomectina, existem mais trabalhos com bovinos (ALVINERIE et al., 1999a), principalmente a respeito do desenvolvimento de metodologias analíticas (POLLMEIER et al., 2002; TURNIPSEED et al., 2005). Dupuy et al. (2001) determinaram em cabras a influência da dose da eprinomectina no nível plasmático, bem como na sua excreção no leite. Recentemente, Jiang et al. (2007) validaram o High Performance Liquid Chromatography (HPLC) com detector de fluorescência, para a determinação da eprinomectina em urina e fezes de bovinos. Estudos desse tipo são essenciais para a segurança do alimento em relação às drogas veterinárias.

Avaliando o grau de biotransformação da ivermectina em microssomas hepáticos bovinos, verificou-se uma faixa de 4,9% a 7,2% de biotransformação em fêmeas e 3,51% a 8,08% em machos. Isso demonstra que o grau de metabolismo hepático da droga é limitado, ocorrendo sua eliminação na forma inalterada de aproximadamente 90% da dose inicial (DUPUY et al., 1999). Os principais metabólitos hepáticos da ivermectina são 24 hidroxi-metil-ivermectina, 3”-O-desmetil-H2B1a e o componente H2B1b. Entretanto, o principal resíduo encontrado nas fezes, urina, leite, biles e tecidos é o componente H2B1a. O componente B1b é encontrado em menor quantidade, pois é metabolizado mais rapidamente (ALVINERIE; GALTIER, 1995; CHIU et al., 1990; WHO, 1991).

Em estudos de depleção da ivermectina em vacas leiteiras, observou-se relevante excreção via glândula mamária, o que salienta a possibilidade da veiculação do resíduo no leite. Após aplicação subcutânea em bovinos, estudos farmacocinéticos confirmaram elevada persistência na excreção de ivermectina pelo leite (ALVINERIE et al., 1987), podendo exceder níveis de 2 ng/mL, após 28 dias (ALVINERIE et al., 1997).

Segundo Carceles et al. (2001), a farmacocinética e a atividade das avermectinas e milbemicinas são particularmente influenciadas pelas características lipofílicas das moléculas ativas, o que direciona o ataque ao parasita-alvo e a sua distribuição nos sítios prediletos dos parasitas dentro do hospedeiro, e, consequentemente, afeta sua persistência dentro do animal. Em virtude de seu caráter lipofílico (CERKVENIK et al., 2002; FLAJS et al., 2005; LANUSSE et al., 1997), o uso das avermectinas não é recomendado em animais produtores de leite. Segundo Dupuy et al. (2001), como as lactonas macrocíclicas têm facilidade de deposição em tecido adiposo, ele funciona como reservatório e contribui para uma maior persistência da droga no corpo do animal. Como animais lactantes perdem suas reservas adiposas durante o período de lactação, isso possibilita a liberação mais rápida da droga em relação aos animais não lactantes.

A moxidectina é cem vezes mais lipofílica que a ivermectina; isso resulta em menor troca entre a gordura e o plasma e na eliminação mais lenta do resíduo. Em contraste, como a eprinomectina é uma avermectina polar, ela associa-se bem menos aos lipídios, resultando em uma meia-vida mais curta, porém, em concentração otimizada em comparação com as outras avermectinas (ALVINERIE et al., 1999a; DANAHER et al., 2006).

Cringoli et al. (2004) comentam que, em comparação com os bovinos, é necessário dobrar a dose de eprinomectina em caprinos, para obtenção de resultados semelhantes na eficácia de nematoides gastrintestinais de cabras lactantes. Alvinerie et al. (1999b) realizaram estudo farmacocinético da eprinomectina pour-on em caprinos e observaram que a disponibilidade sistêmica da droga nesses animais foi significativamente menor do que em bovinos. Os autores concluíram que a baixa concentração da eprinomectina no plasma de caprinos indica que a dose de 500 µg/kg deve ser menos efetiva nessa espécie do que em bovinos. Lespine et al. (2003) demonstraram que, em termos de quantidade de droga presente no animal, a administração subcutânea da eprinomectina em cabras é duas vezes e meia mais eficiente do que a administração pour-on. Segundo Alvinerie et al. (1999b), o tempo médio de permanência, que compreende todos os passos da droga dentro do corpo (absorção, distribuição e eliminação), foi três vezes menor em cabras lactantes (2,67 dias) do que em não lactantes (9,42 dias), em razão de sua eliminação associada ao leite. Estes últimos enfatizam a necessidade de ajustar a posologia do medicamento de espécie para espécie e indicam a duplicação da dose recomendada para bovinos em cabras lactantes, já que estas possuem metabolismo e perfil de eliminação da eprinomectina diferentes do de bovinos e ovinos.

Anastasio et al. (2005) realizaram levantamento dos resíduos, no leite e no queijo, da eprinomectina administrada a cabras na dose de 500 µg/kg e de 1.000 µg/kg. Observaram que os resíduos no leite chegaram, no máximo, a 0,55 ± 0,18 µg/kg e 1,70 ± 0,31 µg/kg, nas duas doses administradas, respectivamente, e as concentrações diminuíram progressivamente até 15 dias após o tratamento. No queijo, os níveis de eprinomectina detectados foram superiores aos das amostras de leite, entretanto, permaneceram abaixo do LMR de 20 µg/L, permitido para vacas em lactação. Já para a ivermectina, Cerkvenik et al. (2000) chegaram a detectar o nível de 96 H2B1a µg/kg em queijos produzidos com leite de ovelhas que receberam a dose única de 0,2 mg/kg.

Com a eliminação da ivermectina nas fezes em elevadas concentrações, ocorrem alterações na fauna de invertebrados que colonizam naturalmente o bolo fecal e participam de sua degradação (SUAREZ, 2002). Wardhaugh et al. (1993) avaliaram os efeitos dos resíduos da ivermectina no ciclo de vida de vários insetos, em fezes de ovelhas tratadas. Detectaram efeitos negativos e similares aos que ocorrem em fezes de bovinos, embora com duração mais transitória, provavelmente em virtude de diferenças na formulação e na rota de administração. Floate e Fox (1999) verificaram que os resíduos de ivermectina nas fezes de animais tratados não interferiram no ciclo de Musca domestica. Como outras espécies são afetadas, concluíram que ocorre um processo trófico diferencial do resíduo, o que pode promover um desequilíbrio nas populações das diferentes espécies. Outros estudos indicaram a redução do número e da diversidade da fauna fecal nas amostras analisadas nos dias 1, 3 e 7 pós-tratamento de bovinos medicados com ivermectina, o que coincide com as maiores concentrações detectadas (IGLESIAS et al., 2006). Efeitos semelhantes foram observados para a doramectina e a abamectina (KOLAR et al., 2006).

Visto que a maior parte do resíduo veiculado pelos alimentos é a droga inalterada, faz-se necessário implementar metodologia mais adequada para monitoramento seguro da presença da droga, assim como para obtenção de dados de exposição à droga, visando ao estabelecimento do risco à saúde dos consumidores. Existe grande variação de resultados em razão da dose e da via de administração das drogas, do tempo do tratamento, do excipiente utilizado, da solubilidade e de outros fatores. Resultados obtidos por Flajs et al. (2005) indicaram variação dentro da própria raça animal, isso por causa das diferenças individuais na taxa de absorção, distribuição, metabolismo e eliminação da droga. Os autores observaram também variações entre raças de ovelhas, em virtude das diferenças de peso corporal, taxa de gordura, condições fisiológicas, nutricionais, etc. Esses resultados mostram a importância de investigações de farmacocinética nas raças mais utilizadas na caprinocultura de leite no Brasil. Avaliações de diferentes modelos, com a finalidade de aumentar a disponibilidade sistêmica das drogas antiparasitárias, também são de grande interesse (BALLENT et al., 2007).

Os riscos para o consumidor, quando o produtor não utiliza corretamente as drogas de uso veterinário, decorrem de uma barreira muito insignificante entre a aplicação do produto e a contaminação do alimento (CERQUEIRA, 2003). Dessa forma, é importante disponibilizar informações claras aos produtores com relação às drogas liberadas, às doses recomendadas, ao período de carência e às consequências do uso indevido. Apesar de o uso da ivermectina não ser recomendado, alguns laboratórios têm lançado produtos com administração pour-on caracterizados por carência zero em vacas lactantes. Tal contraste é motivo de preocupação, pois informações tão diferentes acabam por confundir tanto técnicos quanto produtores, aumentando os riscos para o consumidor.

Como evitar resíduos de medicamentos veterinários nos produtos de origem animal

Para a realização do controle da qualidade do leite e da carne produzidos em uma propriedade, pode-se implantar um sistema de registro do uso de medicamentos conforme recomendação de Burton et al. (2001). Esse sistema funciona como uma ferramenta de monitoramento e prevenção de resíduos, já que qualquer falha pode provocar a contaminação do conteúdo de todo o tanque de leite, se o período de carência em um único animal for negligenciado. Algumas sugestões do sistema de registro são:

• Marcar todas os animais tratados com um sinal visível dos dois lados do corpo, durante todo o período de carência do produto.

• Registrar em uma planilha o nome da droga, data de aplicação, dose, período de carência para o leite e para a carne segundo a bula, nome ou número do animal tratado, região corporal onde o animal recebeu o tratamento, via de administração e, ainda, informações adicionais sobre o princípio ativo utilizado.

• Utilizar somente medicamentos aprovados para animais em lactação, por causa do risco que envolve o não cumprimento desse procedimento.

• Trabalhar esse sistema de forma participativa, de modo que qualquer pessoa que trabalhe com os animais tenha acesso à planilha com os registros e entenda as informações e o processo de prevenção.

• Ficar atento a outros pontos da propriedade que podem ser fonte de contaminação por resíduos de drogas: instalações dos animais (cama ou palha e madeiras tratadas), equipamentos, água e alimento (origem e local de armazenamento de ambos).

• Respeitar a dose recomendada segundo o peso do animal, aferir pistolas dosificadoras periodicamente e não enviar animais para o abate antes do término do período de carência.

Essas medidas aplicam-se tanto a antibióticos, sulfas e anti-inflamatórios, como a antiparasitários, e sua adoção contribui de maneira efetiva para a redução do risco de contaminação do leite e da carne, pois a abordagem do problema prevê ações planejadas dentro do processo de produção. Além disso, deve-se levar em consideração que o descarte do produto de origem animal com resíduos pode gerar contaminação ambiental e prejuízos para o produtor.

Considerações finais

É notória a importância da área de controle de resíduos de anti-helmínticos para garantir a segurança do alimento aos consumidores. A avaliação da farmacocinética das drogas nos animais em lactação e a determinação dos níveis de resíduos no leite de cabra são conhecimentos que devem ser adquiridos, visto que há diferenças na fisiologia de bovinos, caprinos e ovinos. Os dados científicos a serem gerados são importantes para a orientação futura em medicina veterinária, assim como para as ações de transferência de boas práticas agropecuárias, relacionadas ao manejo parasitário, aos produtores. Pesquisas com o objetivo de desenvolver metodologias mais práticas e de menor custo para a detecção de resíduos antiparasitários também podem ser consideradas prioritárias na área de segurança do alimento, pois disponibilizariam uma ferramenta importante para os serviços de inspeção sanitária.

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Capítulo 21
Marcadores moleculares para resistência

Magda Vieira Benavides

Introdução

A verminose é um dos principais entraves da produção caprina e ovina no mundo. Seu tratamento é feito quase exclusivamente por uso de produtos anti-helmínticos, no entanto, o crescente problema da resistência dos parasitas a esses medicamentos (WALLER, 1991) tem limitado os níveis produtivos da caprinocultura e ovinocultura. A baixa eficiência desses medicamentos, aliada muitas vezes à impossibilidade de realizar uma rotação adequada das áreas de pastejo pela própria limitação de espaço físico, vem obrigando produtores a reduzir o tamanho dos rebanhos ou, de forma mais drástica, a abandonar a atividade pecuária desses pequenos ruminantes.

Considerando esse importante aspecto, a dependência do controle da verminose no uso de medicamentos está sendo repensada pelos produtores e pesquisadores e também pela indústria, uma vez que é crescente a preocupação dos consumidores com o nível de resíduos químicos acumulados nos produtos de origem animal. Produtos cárnicos e lácteos com resíduos de produtos químicos podem vir a ser foco de novas barreiras não tarifárias que limitem o comércio internacional para os produtos brasileiros.

Nas últimas três décadas, a seleção de animais mais resistentes a endoparasitas vem sendo investigada como alternativa auxiliar no controle da verminose. Variações na habilidade dos animais de resistir a infecções parasitárias têm sido documentadas entre raças, entre linhagens e dentro de linhagens (GRAY, 1991; EADY et al., 1996). Os primeiros trabalhos mostraram diferenças marcantes nessa característica entre raças ovinas e caprinas (COURTNEY et al., 1984; GAMBLE; ZAJAC, 1992; KNIGHT et al., 1973; OSINOWO; ABUBAKAR, 1989; PRESTON; ALLONBY, 1978, 1979; SMITH, 1989). Trabalhos posteriores concentraram-se na exploração da variabilidade genética entre animais de mesma raça para características indiretas que tivessem associação com a resistência genética às infecções parasitárias (ALBERS; GRAY, 1986; WOOLASTON; BAKER, 1996).

Nesse contexto, este capítulo abordará resultados de pesquisa tanto na área de melhoramento genético como na dos avanços nos estudos de marcadores moleculares, visando à resistência dos pequenos ruminantes ante parasitas gastrintestinais.

Resistência genética intra e inter-raciais

Os primeiros trabalhos que evidenciaram diferenças na resistência genética do hospedeiro a parasitas mostraram que as raças ovinas Barbados Blackbelly, Navajo, Florida Native, St. Croix (COURTNEY et al., 1984; GAMBLE; ZAJAC, 1992; KNIGHT et al., 1973) e Red Maasai (PRESTON; ALLONBY, 1978; 1979) eram mais resistentes a Haemonchus contortus quando comparadas com raças de ovinos produtoras de lã ou de duplo propósito, manejadas no mesmo ambiente. As raças africanas ovinas (Djallonké) e caprinas (West African Dwarf) também mostraram ser resistentes a parasitas gastrintestinais e a tripanossomose (OSINOWO; ABUBAKAR, 1989; SMITH, 1989). Estudos conduzidos na Costa Leste da África mostraram que a raça ovina Red Maasai e a raça caprina Small East African eram mais resistentes quando comparadas com a Dorper e a Galla (BAKER et al., 1998). A maioria dessas raças evoluiu (ou desenvolveu-se) em regiões tropicais úmidas, onde há a presença de altas cargas parasitárias no pasto. É provável que a coevolução entre hospedeiro e nematódeos tenha sido determinante no desenvolvimento de uma melhor adaptação dos animais a esses parasitas.

No Brasil, são poucos os estudos de variabilidade genética entre raças. Bricarello et al. (2002) observaram que a raça Crioula Lanada tinha contagem de ovos por grama (OPG) de fezes significativamente menor quando comparada à raça Corriedale, após infecção artificial com H. contortus. A diferença de resistência a parasitas gastrintestinais entre raças, apesar de relevante, não tem tido grande utilização em programas de cruzamento animal. As raças resistentes, apesar da vantagem de serem adaptadas ao meio, não atingem os mesmos níveis produtivos das raças produtoras de lã ou de carne, por isso há apreensão dos produtores em relação à introdução delas, visto que podem transmitir características indesejáveis e incompatíveis com os objetivos de seleção animal utilizados.

No entanto, além da variabilidade para a contagem de OPG entre raças, também foi observado que alguns animais apresentavam baixo OPG ao longo do ano, enquanto seus contemporâneos (animais de mesma idade e alocados na mesma área de campo) apresentavam alta carga parasitária, indicando variabilidade genética entre animais do mesmo rebanho. Medições da variação de OPG entre linhagens, rebanhos e reprodutores dentro de rebanhos mostram que a variação entre pais dentro de rebanhos Merino é bastante superior (22%) à encontrada entre linhagens (1%) e entre rebanhos (3,5%) (EADY et al., 1996). Esses resultados demonstram que um plantel não é mais resistente do que outro, a menos que haja seleção para baixo OPG. Considerando a variação existente dentro dos rebanhos, seria então possível melhorar a característica de resistência a parasitas gastrintestinais pela seleção nesse rebanho, aliando características produtivas e de resistência.

Seleção de animais geneticamente resistentes a parasitas gastrintestinais e resposta à seleção

Segundo Woolaston e Baker (1996), a resistência genética do hospedeiro pode ser identificada e posteriormente selecionada sob três aspectos: a) resistência – habilidade do hospedeiro em iniciar e manter uma resposta que suprima o estabelecimento dos parasitas e/ou elimine a carga parasitária; b) resiliência – capacidade do hospedeiro de manter níveis produtivos mesmo estando parasitado; c) redução do número de tratamentos – dosificação somente dos animais que possuem sinais visíveis de parasitemia, os animais do rebanho são classificados de acordo com o número de dosificações recebidas em determinado período de tempo e selecionados por menor número de dosificações.

Em termos práticos, para qualquer característica ter sucesso em um programa de seleção, há a necessidade de uma herdabilidade de média a alta, expressão do fenótipo em todos os anos e alta variação fenotípica (FALCONER, 1989). A seleção para resistência demanda a realização de medições de OPG (ou algum outro critério indireto de seleção) em animais jovens expostos/infectados por parasitas, uma vez que a resistência é expressa pelos indivíduos somente quando as condições para a sobrevivência dos parasitas são propícias. Os produtores evitam a exposição dos animais às parasitoses, pois essa prática causa redução no ganho de peso e nos demais caracteres produtivos na fase de desenvolvimento. No entanto, sem a exposição dos animais, é impossível medir o nível de resistência dos hospedeiros aos parasitas. A contagem de OPG é uma característica de alta variabilidade (o coeficiente de variação (CV%) para OPG não transformado excede os 100%) e possui uma estimativa de herdabilidade média, contudo sua expressão está dependente da exposição dos animais aos parasitas por meio de desafios anuais.

A seleção para resiliência necessita de constante monitoramento dos parâmetros produtivos do animal. Albers et al. (1987) estimaram em 0,09±0,07 a herdabilidade da resiliência como depressão do peso vivo, apresentando um CV% de 140, e em 0,08±0,07 a estimativa de herdabilidade para depressão do crescimento de lã durante infecção. Embora os produtores argumentem que a seleção para resiliência possibilita selecionar os animais simultaneamente para produção e minimizar perdas por infecção, as baixas herdabilidades desse tipo de mensuração são limitantes para o êxito do programa de melhoramento. Não obstante, o grande argumento a favor da seleção para resiliência é, em teoria, o de que, selecionando hospedeiros mais resilientes, não haveria pressão de seleção nos parasitas, o que em longo prazo poderia reduzir as possibilidades de novas mutações nesses organismos (ALBERS et al., 1987).

A seleção por menor número de dosificações pode parecer menos trabalhosa. A decisão de quais animais dosificar está baseada em parâmetros subjetivos (sinais clínicos de verminose) e a estimativa de herdabilidade medida para esse fenótipo foi de 0,05-0,14 (BISSET et al.,1994). Além da baixa herdabilidade, animais classificados para baixo número de dosificações não seguem a mesma classificação para resistência, portanto, a seleção por redução do número de tratamentos não necessariamente reduz o número de parasitas (BISSET et al.,1994).

É preciso lembrar que, à medida que o número de animais por rebanho aumenta, o controle deve ser mais cuidadoso para ser efetivo. Embora os três aspectos sejam trabalhosos de aplicar no cotidiano da propriedade, as estimativas de herdabilidade da contagem de OPG fazem com que a seleção para resistência seja preferível quando comparada com as demais. Além disso, ela também possui uma vantagem, que é a redução dos níveis de contaminação parasitária no pasto ao longo dos anos, determinando uma consequente redução da infestação dos outros animais do rebanho e uma diminuição do OPG como um todo.

Woolaston et al. (1990) observaram as respostas de OPG em linhas divergentes, selecionadas por infecção artificial de H. contortus (“alto OPG” versus “baixo OPG”), comparadas à linha “controle” (sem seleção), após quatro gerações selecionadas. Embora com reduzido número de animais na quarta geração (69 ovinos na linha “alto OPG”, 47 na linha “baixo OPG” e 84 na linha “controle”), foi possível observar que a linha “baixo OPG” apresentava OPG significativamente inferior (p<0,001) quando comparada com as linhas “controle” e “alto OPG”. As médias não transformadas de OPG para as respectivas linhas foram de 2.730, 12.720 e 17.400. Além desses resultados, o volume globular (VG) durante o desafio foi significativamente superior (p<0,05) para a linha “alto OPG” (25,7%, 22,0% e 20,3%, respectivamente) e as médias de OPG após infecção natural foram de 140, 3.590 e 8.750, respectivamente. Esses animais também sofreram infecção artificial com Trichostrongylus colubriformis, e os resultados mostraram a mesma tendência observada para H. contortus. As médias de OPG não transformadas para T. colubriformis foram de 490, 840 e 1.340. Os resultados da seleção de ovinos Merino para resistência a H. contortus estão demostrados na Figura 1. A partir o 4º ano de seleção foi possível observar uma tendência de queda no rebanho selecionado em comparação com o “controle” (WOOLASTON; PIPER, 1996).

Figura 1. Contagens de OPG em linhas divergentes (resistente e controle) de ovinos Merino, selecionados por infecção artificial de H. contortus.

Fonte: Woolaston e Piper (1996).

Em outros estudos, Stear et al. (1996, 1999) sugeriram que ovinos geneticamente resistentes controlavam o crescimento dos parasitas (Teladorsagia circumcincta), mas não o número deles, e ovinos com altos níveis de IgA específicos para larvas L4 de T. circumcincta apresentavam menor OPG com larvas de menor comprimento (STEAR et al., 1995) e de menor fecundidade (STEAR et al., 1997).

Considerando simulações realizadas em um rebanho de 500 ovelhas (selecionadas ao acaso e descartadas quando cada uma possuía três parições por um período de 10 anos) acasaladas com 25 carneiros (selecionados para baixo OPG e usados em um só acasalamento), houve uma redução linear de OPG de 500 para 140, com redução gradual na quantidade de parasitas no pasto. Os autores atribuíram essa redução ao decréscimo das taxas de infecção, uma vez que animais mais resistentes contaminam menos o pasto, e ao aumento de imunocompetência dos animais resistentes. Os autores ainda propõem que, se fêmeas susceptíveis também fossem descartadas do rebanho e/ou tratamentos anti-helmínticos fossem aplicados, as reduções na contagem de OPG ao longo desses 10 anos seriam mais elevadas (BISHOP; STEAR, 1997). Em outro modelo de simulação divulgado pelo programa australiano Nemesis1, foi estudada a redução do número anual de dosificações levando em conta a seleção de reprodutores por um índice para “baixo OPG” e altos níveis de produção. O uso desses reprodutores no rebanho mostrou que o número de dosificações pode reduzir de três (ao final de 13 anos de seleção) para duas (16 anos), para uma (18 anos) e para zero no final de 20 anos de seleção.

Os caracteres indiretos mais utilizados para medir o grau de resistência são indicadores fisiológicos, como níveis de eosinófilos circulantes no sangue (HOHENHAUS; OUTTERIDGE, 1995; STEAR et al., 2002; WOOLASTON et al., 1996), volume globular – medida do grau de anemia causada por parasitas hematófagos – (WOOLASTON; PIPER, 1996), níveis de anticorpos de IgA (STEAR et al., 1999; STRAIN et al., 2002) e IgG1 (DOUCH et al., 1995) e contagem de OPG. A maioria dos trabalhos encontrados na literatura e utilizados em programas de seleção utiliza o OPG como critério de seleção. A contagem de OPG tem as vantagens da alta variabilidade (CVs% >100%) e da facilidade de coleta, análise e compreensão por parte do produtor – ainda que sempre sejam realizadas transformações logarítmicas para a análise desta característica. As desvantagens do OPG estão na irregularidade da passagem de ovos dos parasitas pelo trato digestivo dos animais, fazendo com que muitas vezes a amostra de fezes registre OPG zero quando na realidade o animal está parasitado. Para evitar esse problema, são realizadas mais de uma amostragem e mais de uma análise de OPG por animal em cada coleta (BISHOP et al., 1996), as quais estão sujeitas às condições ambientais, pois destas depende a sobrevivência dos parasitas no pasto.

Medidas de volume globular possuem estimativas de herdabilidade similares às do OPG e são altamente correlacionadas com resistência quando o parasita predominante é H. contortus (WOOLASTON; PIPER, 1996), uma vez que esse parasita causa anemia. No entanto, se outros parasitas forem igualmente importantes, esse fenótipo pode não ser o mais correlacionado com resistência. Estimativas de herdabilidade para as concentrações de eosinófilos em cordeiros de 4 e 5 meses infectados com T. circumcincta foram de 0,48±0,16 e 0,43±0,17, respectivamente (STEAR et al., 2002). Douch et al. (1995) estimaram a herdabilidade dos níveis de anticorpos anti-T. colubriformis e de IgG1 (dados analisados após transformação logarítmica) em ovinos Romney sob desafio natural, em duas medições, sendo, para a primeira medição, ambas as estimativas baixas, provavelmente por causa do baixo nível de desafio observado por meio do baixo OPG. Na segunda medição, já com níveis mais altos de OPG, as estimativas foram de 0,29±0,08 e 0,43±0,10 respectivamente. Estimativas de herdabilidade de 0,56±0,11 para IgA foram encontradas por Strain et al. (2002) em cordeiros Scottish Blackface naturalmente infectados com T. circumcincta e abatidos aos 6 e 7 meses de idade. Há relatos de correlações negativas entre níveis séricos e fecais de IgA e IgG1 e de OPG em ovinos geneticamente resistentes a H. contortus (GILL et al., 1993a) e também entre níveis de IgA e OPG de bovinos infectados por Ostertagia ostertagi (CLAEREBOUT; VERCRUYSSE, 2000). Dunne et al. (1993) sugeriram que IgA esteja envolvida na eliminação de esquistossomas pela ação de eosinófilos mediados por essa imunoglobulina.

A seleção de animais mais resistentes a parasitas gastrintestinais com base no OPG tem sido objetivo de programas de melhoramento genético ovino na Austrália (Nemesis), na Nova Zelândia (WormFec) e, recentemente, no Uruguai, por meio das Sociedades de Criadores de Ovinos Merino Australiano e Corriedale (CASTELLS et al., 2002). As estimativas de herdabilidade do OPG variam de 0,14 a 0,44 (BAKER et al., 1991; BISHOP et al., 1996; McEWAN et al., 1992; PIPER, 1987; SAYERS et al., 2005a; WATSON et al., 1986). Quando a herdabilidade para OPG é medida em animais experimentalmente infectados por H. contortus, as estimativas são de 0,39 a 0,48; e por T. colubriformis são de 0,47 (GRUNER et al., 2004). Esses valores de estimativas de herdabilidade permitem de baixo a moderado progresso genético.

Trabalhos de seleção de linhas divergentes de animais imunes e susceptíveis demonstraram que a característica OPG permite obter ampla variação genética entre duas linhas de seleção (WOOLASTON; BAKER, 1996), o que, juntamente com a baixa-média herdabilidade da característica, possui razoável potencial para seleção de animais resistentes.

Raramente os programas de seleção consideram o OPG a única característica a ser selecionada, por isso as estimativas de correlações genéticas entre OPG e características produtivas são importantes. Albers et al. (1987) e Woolaston et al. (1990) verificaram que a seleção de ovinos Merino para baixo OPG provocava uma pequena diminuição na produção de lã e no peso vivo. No entanto, os resultados para ovinos Romney, apresentados por McEwan et al. (1992), mostraram que as respostas na produção de lã podem ser desfavoráveis. Já Bishop et al. (1996) observaram a correlação genética de -0,8 entre OPG e peso vivo em ovinos, o que demonstra que a seleção para baixo OPG é também vantajosa para o peso corporal. Os resultados contrastantes podem ser por causa da comparação de raças distintas testadas em ambientes também distintos.

Outra categoria a ser analisada são as fêmeas no pós-parto, pois nesse período elas estão mais susceptíveis às parasitoses e, em consequência, expõem mais suas progênies aos parasitas. Seria interessante que ventres geneticamente resistentes também pudessem ter reduzidos níveis de OPG no pós-parto. Kahn et al. (2003) compararam o efeito de suplementação proteica com a seleção para resistência na redução do OPG (animais oriundos de linhas selecionadas para “baixo OPG” versus “controle”), na fase periparto de ovelhas Merino. Os resultados mostraram que ambos os grupos aumentaram o OPG na fase periparto, porém o OPG das ovelhas geneticamente resistentes foi em torno de cinco vezes mais baixo quando comparado com as do grupo controle. O uso de suplementação no pré-parto foi eficiente em reduzir o OPG mesmo dez semanas após o término da suplementação, contudo os efeitos positivos da suplementação foram mais notados no grupo de ovelhas que reduziu peso corporal no pós-parto, principalmente no grupo controle. Os autores concluíram que as duas estratégias são efetivas para diminuir os efeitos do OPG no pós-parto.

No entanto, a metodologia utilizada pelos programas de melhoramento genético para identificar animais resistentes ainda está baseada na exposição/infecção (desafio) de animais jovens aos parasitas em condições de campo, usando áreas de pastoreio com altas cargas parasitárias, a fim de garantir a infecção dos animais e medir a característica de OPG. Progênies de diferentes pais são testadas a cada ano, utilizando pais referência que possuem filhos avaliados em anos diferentes para assim possibilitar a comparação entre elas. A confiável identificação das progênies com os pais é imprescindível para a correta identificação de pais resistentes.

Apesar de ser uma técnica testada para identificar o grau de resistência dos animais via exame de fezes, há alguns fatores limitantes a serem considerados:

a) Condições ambientais para o desafio: condições climáticas adversas à sobrevivência das formas parasitárias de vida livre podem mascarar os resultados e aumentar “falsos-negativos”.

b) O OPG para resistência parasitária somente pode ser usado na comparação de animais expostos a infecções similares (STEAR et al., 1999a).

c) Tempo prolongado para a execução de testes de progênies.

d) Obrigatoriedade de expor os animais jovens à enfermidade, levando-os a perder peso durante esse período.

Uma forma alternativa de selecionar animais resistentes é a identificação de marcadores genéticos ligados à característica de contagem de OPG. Inúmeros estudos têm sido realizados, na espécie ovina, com o objetivo de descobrir as bases genéticas do mecanismo da resistência de indivíduos aos parasitas. Descobrindo os genes responsáveis pela imunidade genética, será possível selecionar animais por meio de marcadores moleculares, e não por desafios anuais em animais jovens.

Ligação marcador molecular-gene responsável por características de interesse econômico

Pesquisas no mundo todo vêm utilizando marcadores moleculares, particularmente de microssatélites (regiões repetitivas, geralmente repetições de duas a cinco bases), localizados em regiões não funcionais do DNA (regiões intrônicas) e com alta diversidade genética para a seleção de animais resistentes a nematoides gastrintestinais.

A maioria dos marcadores moleculares possui de 2 a 15 variantes (alelos), podendo haver alguns com mais de 15, o que é menos frequente. Os marcadores moleculares em si não controlam características de interesse, pois estão situados em regiões que não codificam proteínas. Entretanto, sua utilidade reside no fato de que regiões muito próximas no cromossomo tendem a ser herdadas em blocos e, mesmo desconhecendo o(s) gene(s) responsáveis por uma determinada característica produtiva, é possível selecioná-la por meio de marcadores moleculares localizados próximos (~20cM), uma vez que, durante o processo de recombinação, o elo (ligação) entre marcador e gene não será rompido, sendo herdados em conjunto. Esse princípio é chamado de “desequilíbrio de ligação”, pois, se todas as regiões de um determinado cromossomo fossem herdadas de forma independente, todas elas segregariam ao acaso (em “equilíbrio”). No momento que regiões são herdadas em bloco, o princípio de independência não é mais válido e assim há um desequilíbrio de ligação.

Embora a maioria dos estudos tenha usado marcadores moleculares do tipo microssatélite, por estarem amplamente difundidos ao longo do cromossomo e serem altamente polimórficos (com alta diversidade genética), outros tipos de marcadores, como os single nucleotide polymorphisms (SNPs), que possuem diferenças de uma a quatro bases, estão sendo amplamente utilizados. O objetivo do uso de marcadores é inferir o fenótipo do animal para uma dada característica pelo genótipo do marcador. Para fins de melhoramento genético pela seleção assistida por marcadores (marker assisted selection), é possível selecionar animais com base nos seus genótipos. Porém, a informação mais importante que o marcador carrega é a localização física dos possíveis genes determinantes da característica de interesse econômico; por isso, o objetivo final de todo e qualquer estudo é a identificação da mutação (ou da variação) no gene causador do fenótipo, o que se chama de clonagem posicional (positional cloning).

Com o avanço do conhecimento dos genomas das espécies de mamíferos, será possível, por meio de estudos de genômica comparativa, localizar regiões de interesse que tenham sido estudadas em uma espécie (marcadores moleculares ou mesmo genes) e sejam conhecidas em outra espécie, visto que há correspondência de regiões genômicas entre as diversas espécies de mamíferos pela similaridade entre os genomas. Exemplos dessas correspondências estão nas Figuras 2 e 3.

Figura 2. Equivalência entre os genomas humano-bovino, ovino-bovino e murino-bovino.

Fonte: Mouse Genome Informatics (2006).

Figura 3. Correspondências entre duas regiões genômicas em bovinos (Bos taurus) e ovinos (Ovis aries), BTA6 versus OAR6, e BTA19 versus OAR11.

Fonte: ARKDB... (2007).

Abordagens para identificar marcadores moleculares para resistência a parasitas gastrintestinais

A utilização de marcadores moleculares associados à resistência às enfermidades em animais domésticos apresenta a vantagem de selecionar, com base no DNA, os animais resistentes desde o nascimento, sem a necessidade de eles sofrerem desafio com os patógenos de interesse e de haver perdas produtivas em consequência do desafio.

A identificação de marcadores ligados a características de resistência a parasitas gastrintestinais é um longo processo, que se inicia pela formação de populações experimentalmente delineadas para tal finalidade. Um exemplo de desenho experimental é o uso de progenitores com diferença fenotípica marcante (pais resistentes acasalados com mães susceptíveis ou vice-versa) para gerar uma população “G1” segregante para esse fenótipo. Geralmente é utilizado um número reduzido de reprodutores machos, a fim de que se obtenha um grande número de progênies de meio-irmãos “G2” por pai. O estudo da resistência é realizado na população “G2”, em que a característica está segregando e deverá, consequentemente, apresentar uma alta variabilidade.

Existem duas abordagens para o estudo de genes ligados a determinada característica: a varredura total do genoma (genome wide screening) e os genes candidatos (candidate genes).

A varredura total do genoma assume que os mecanismos fisiológicos que determinam o fenótipo são desconhecidos e utiliza mais de 100 marcadores moleculares distribuídos equidistantemente ao longo dos cromossomos da espécie em estudo. Por exemplo, a espécie ovina possui 26 pares de cromossomos autossômicos e 1 sexual, atualmente foram identificados 2.030 loci, dos quais 543 são genes; também possui 2.257 marcadores de microssatélites, e os SNPs descritos para esta espécie ainda são poucos2. Essas informações servem como ferramentas básicas para a busca de loci responsáveis – ou situados próximos a genes responsáveis – por características de interesse econômico. Os resultados significativos dos estudos de varredura total do genoma são chamados de Quantitative Trait Loci (QTL) e indicam que dada região cromossômica, localizada entre dois marcadores testados, está significativamente ligada ao fenótipo. Uma vez localizado um QTL ligado ao fenótipo, é iniciado o processo de sintonia fina, em que é testado um maior número de marcadores moleculares situados dentro daquela região. Procura-se obter um QTL que esteja localizado entre dois marcadores moleculares mais próximos e assim sucessivamente, até chegar a uma região onde provavelmente estará o gene que explica parte ou a maioria da variação fenotípica da característica que está sendo estudada.

A vantagem de trabalhar com estudos de varredura total do genoma é a maior probabilidade de encontrar associação entre marcadores e características de interesse, uma vez que a busca não se restringe a poucas regiões cromossômicas. Essa abordagem tem sido utilizada com sucesso no estudo e na identificação de inúmeros genes envolvidos na resposta a doenças, como o lupus (THEOFILOPOULOS; KONO, 1999) e a leishmaniose (ROBERTS et al., 1997) em ratos, o diabetes (PRATLEY et al., 1998) e a esquistossomose em humanos (MARQUET et al., 1999), e a tripanossomíase em camundongos (KEMP et al., 1997) e bovinos (HANOTTE et al., 2000), entre outras.

Outro aspecto interessante refere-se à existência de conservação genômica entre os mapas bovino e caprino, e bovino e ovino – o que permite uma maior informação sobre marcadores moleculares intra e interespécie (DE-GORTARI et al., 1997) –, bem como de regiões interessantes para o estudo de resistência. O elevado número de marcadores disponíveis e potenciais aumenta as chances de encontrar uma associação entre marcadores e resistência genética por meio da abordagem de varredura total do genoma.

A outra abordagem, chamada de gene candidato, utiliza marcadores em regiões genômicas onde estão localizados genes importantes na fisiologia da característica a ser estudada. Essa abordagem é mais racional do que a varredura genômica, no entanto ela somente é válida quando o mecanismo que determina a característica é perfeitamente conhecido. Entretanto, mesmo sabendo que proteínas alteram determinado fenótipo, é necessário um profundo estudo dos polimorfismos do(s) gene(s) em questão. Genes são compostos por várias regiões codificantes (exons) e várias não codificantes (introns), portanto o estudo de genes candidatos deve ser realizado em todos os polimorfismos descritos para determinado gene, com a finalidade de descartar um gene como não sendo ligado ao fenótipo.

Embora a abordagem de gene candidato seja conceitualmente mais lógica, a maioria dos estudos vem sendo feita pela varredura total do genoma. Apesar de mais onerosa e trabalhosa, esta segunda abordagem tem a possibilidade de identificar outras regiões (e consequentemente genes) importantes, que não haviam sido citadas como relevantes para a variação de um fenótipo. Por exemplo, alguns autores citam que, na resistência genética de hospedeiros a parasitas gastrintestinais, são também importantes outros mecanismos – como o aumento de peristaltismo do intestino e a inflamação local, que auxiliam na expulsão das larvas do trato gastrintestinal (EMERY et al., 1993) –, os quais são geralmente desprezados nos estudos.

De qualquer modo, independentemente da abordagem utilizada, os fatores determinantes do sucesso em um estudo de identificação de marcadores genéticos residem na correta identificação dos fenótipos dos indivíduos, na confiança dos dados de pedigree (as paternidades devem ser confirmadas por genotipagens) e na escolha dos marcadores moleculares (polimórficos e equidistantes) utilizados.

Resposta imune de pequenos ruminantes a parasitas gastrintestinais

O mecanismo de imunidade do hospedeiro a nematoides gastrintestinais é complexo e, em todos os modelos animais estudados, tem mostrado ser dependente de um grande número de genes (GARSIDE et al., 2000). A resistência genética aos parasitas tem sido estudada em camundongos, e em menor escala em ovinos e bovinos. Estudos em camundongos sugerem que respostas como eosinofilia, mastocitose e altos níveis de imunoglobulina E (IgE) são os principais mecanismos para a defesa do hospedeiro contra esses parasitas (FINKELMAN et al., 1991, 1997; FINKELMAN; URBAN, 1992). De modo similar, a resposta de ovinos geneticamente resistentes a H. contortus também caracteriza-se por eosinofilia, mastocitose da mucosa gastrintestinal (DAWKINS et al., 1989; DINEEN; WINDON, 1980; GILL, 1991; GILL et al., 1991, 1993a) e altos níveis de IgA e IgG1 (GILL et al., 1993b, 1994).

Trabalho realizado com ovinos geneticamente resistentes mostrou que tanto ovinos selecionados como não selecionados para resistência reagem à infecção por H. contortus com uma forte produção de interleucina 5 (IL-5) pelas células TH2 do tecido linfoide, porém, com níveis mais elevados nos linfonodos do trato gastrintestinal dos animais resistentes. Além disso, esse estudo demonstrou que os ovinos resistentes produziram elevados níveis de IgE e IgG1 e apresentaram altas densidades de mastócitos na mucosa abomasal, levando os autores a sugerir que há uma forte resposta imune do tipo CD4+ TH2 em ovinos resistentes a H. contortus (GILL et al., 2000).

As interleucinas são citocinas liberadas por várias células do organismo. Elas induzem a resposta imune por meio da ligação a receptores específicos e fazem parte do processo fisiológico para a obtenção da resposta humoral (HUSBAND et al., 1996). Nesse caso, destacam-se as interleucinas 4, 5 e 6, responsáveis por mudança da expressão isotípica de IgA e IgE, desenvolvimento clonal, maturação de IgA e de eosinófilos, e desenvolvimento clonal e maturação de IgA. Igualmente importantes são os mecanismos do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) Classe I, responsáveis pela apresentação do antígeno às células CD8+ para ativação da resposta celular, e o MHC Classe II, responsáveis pela apresentação do antígeno às células CD4+ para ativação da resposta humoral. Estudos imunológicos têm mostrado que cordeiros são incapazes de desenvolver imunidade a H. contortus, em razão da fraca resposta TH2 (SCHALLIG, 2000).

Citocinas produzidas por células TH2, especialmente IL-4, foram características da resposta imune de ovinos geneticamente resistentes a T. colubriformis após desafio natural (PERNTHANER et al., 1997), medido pela alta expressão de mRNA de IL-4 no tecido linfático gastrintestinal. Por sua vez, citocinas produzidas por células TH1, como o interferon-gama (IFN-γ) e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), têm efeito supressor na resposta tipo TH2. Como a resposta à infecção por parasitas gastrintestinais é normalmente dependente de células TH2 (ELSE; FINKELMAN, 1998), níveis elevados de citocinas produzidas por células TH1 podem limitar a resposta imune do hospedeiro.

Ovinos geneticamente resistentes e susceptíveis, provenientes de linhas selecionadas para “baixo” e “alto”, foram abatidos na fase de pós-desafio com um OPG médio de 63 versus 2.388, respectivamente, no intuito de comparar o nível de expressão dos genes no duodeno e nos linfonodos mesentéricos. Os RNAs desses tecidos foram expostos a um painel com 10.204 cDNAs bovinos, e os genes resultantes como diferencialmente expressos entre os dois fenótipos estão envolvidos no desenvolvimento de imunidade adquirida e na função do músculo liso do intestino. Entre os genes envolvidos no desenvolvimento da imunidade adquirida, estão os do MHC Classe II, que mostraram estar superexpressos nos cordeiros geneticamente resistentes, corroborando a hipótese de desenvolvimento de uma precoce resposta humoral nessa categoria de animais. Dos genes envolvidos na estrutura e função do músculo entérico, a transgelina (TAGLN) e a actin-γ2 (ACTG2) foram superexpressas. A primeira é uma proteína do citoesqueleto e a segunda uma isoforma da actina do intestino, portanto uma proteína também estrutural. É possível que a superexpressão desses dois genes esteja envolvida em uma maior motilidade do intestino em cordeiros geneticamente resistentes (DIEZ-TASCÓN et al., 2005).

Os resultados de estudos na área de imunologia e de expressão gênica são importantes para o direcionamento dos trabalhos de genes candidatos, com a finalidade de identificar genes relevantes no mecanismo imune do hospedeiro aos parasitas.

Marcadores moleculares para a resistência a parasitas gastrintestinais em pequenos ruminantes

Em ruminantes, a resistência às larvas infectivas e aos parasitas adultos tem sido associada ao desenvolvimento de imunidade adquirida (BALIC et al., 2000). A resposta imune é um mecanismo complexo composto pelas respostas humoral e celular, em que várias proteínas interatuam. Em ovinos, a resposta imune a parasitas gastrintestinais é normalmente definida como resposta do tipo TH2, ainda que, na prática, as respostas não sejam exclusivamente do tipo TH1 ou TH2. Esse aspecto possui implicações na obtenção de um marcador genético capaz de explicar a maioria das variações da resposta imune, e é provável que, ao invés de encontrar um só gene de ação principal, os estudos apontem que vários genes estejam correlacionados com a resposta imune.

As primeiras pesquisas realizadas nesta área concentraram-se na busca de marcadores moleculares na região do MHC, uma vez que genes do MHC estão envolvidos na regulação e desencadeamento de respostas imunológicas e possuem alta variabilidade genética (alto polimorfismo). Schwaiger et al. (1995) encontraram ligação entre o OPG pós-desafio natural com T. circumcincta, em ovinos Scottish Blackface, e uma região do DRB1 (íntron e exon 2) no OAR20. Dezenove alelos foram encontrados e, desses, somente foram analisados aqueles com frequência superior a 5%; e o alelo mais comum, o alelo I, foi usado como referência para comparação com os demais na análise de substituição alélica. O efeito mais significativo foi o do alelo G2, que causou decréscimos de até -1,76 (dados com transformação logarítmica) em relação ao alelo I. Esse efeito corresponde a uma média não transformada de OPG em até 58 vezes inferior ao OPG do alelo I. O efeito dos alelos do gene DRB1 na variabilidade de OPG (valores logarítmicos), medido pelo coeficiente de determinação, foi de 10%. Os autores argumentam que o possível envolvimento do MHC (complexo ao qual o gene DRB1 pertence) com a resistência genética a nematoides gastrintestinais seja determinado pela ação que esse complexo de genes tem na apresentação de antígenos às células T e na resposta humoral, porém, a região do MHC é bastante ampla e abrange vários outros genes igualmente polimórficos. Uma vez que vários genes estão localizados próximos na mesma região, há um desequilíbrio de ligação com a segregação de todos os genes em “bloco”, e é possível que o efeito observado na contagem de OPG seja causado por outro gene próximo.

Outros dois genes do MHC, MHC de Classe I e DY de Classe Iib, foram estudados por Buitkamp et al. (1996), que também encontraram associações com redução de OPG no mesmo rebanho de Schwaiger et al. (1995). Essas reduções foram de 8 e de 218 vezes em alelos desses dois genes, respectivamente. Alelos do gene OLADRB também mostraram associações significativas com OPG em rebanhos de ovinos Soay não manejados. Cordeiros com uma cópia do alelo OLADRB*257bp apresentaram OPG superior em 104 ovos, quando comparados com a média de ovinos que não possuíam esse alelo (parasita predominante T. circumcincta). Ovinos sobreano com o alelo OLADRB*263 apresentaram OPG inferior em 276 ovos, e aqueles com o alelo OLADRB*267, 196 ovos a mais quando comparados com ovinos sem esses alelos (PATERSON et al., 1998). Essa diferença entre os alelos associados, dependendo da idade do animal, é comum, pois a variação genética da resistência adquirida a nematoides aumenta com a idade: a resistência de ovinos Scottish Blackface aos 6 meses era superior à de quando mais jovens (BISHOP et al., 1996). Assim, é importante levar em consideração a idade em que os animais são fenotipados para determinar o efeito dos marcadores moleculares no OPG.

Janβen et al. (2002) encontraram ligação entre o volume globular, os níveis séricos de IgL e o OPG pós-desafio artificial com H. contortus em ovinos Rhönschaf, e a região do OAR20 entre os marcadores OarCP73 (18,1 cM) e o BM1815 (26,8 cM, e situado a 17,2 cM de distância do gene OLADRB). O alelo A do marcador OarCP73 teve efeito médio positivo de 8%, e o alelo B efeito negativo de 18% nos níveis de micro-hematócrito. Já o alelo C do marcador BM1815 teve efeito de substituição de -5.5% no OPG transformado para logaritmo. Em outro estudo, Sayers et al. (2005b) mostraram que os alelos Ovar-DRB1*0203 e Ovar-DRB1*03411 reduziam OPG de forma significativa em ovinos Suffolk, mas não em Texel.

Associações entre o MHC e a resistência a parasitas gastrintestinais também foram relatadas em bovinos (STEAR et al., 1998a, 1990), camundongos (ELSE et al., 1998), suínos (LUNNEY; MURRELL, 1988) e ovinos (HULME et al., 1993; LUFFAU et al., 1990; OUTTERIDGE et al., 1985, 1986, 1988). Entretanto, outros estudos não confirmaram essas associações significativas (BLATTMAN et al., 1993; COOPER et al., 1989; STEAR et al., 1989b). Mesmo assim, os resultados positivos de associação não devem ser descartados, porque as diferenças neles podem ter origem no parasita utilizado, nos modelos experimentais, nos métodos de genotipagem, no tempo (idade) e na metodologia de medição do fenótipo, e na diferença de frequências alélicas nas populações estudadas.

Um fator de variação entre os trabalhos realizados é o gênero do parasita. Na maioria dos países de clima temperado, a T. circumcincta é a principal espécie causadora de parasitose, enquanto nos de clima tropical, o H. contortus é o parasita mais patogênico; já T. colubriformis é igualmente importante para ambas as regiões. Entre esses, há hipóteses para diferenças na resposta imune do hospedeiro à infecção, em razão do modo de parasitismo (parasitas de mucosa versus hematófagos), da região gastrintestinal que parasitam (abomaso versus duodeno) e da carga parasitária a qual os animais foram submetidos. Outros fatores que adicionam variabilidade aos resultados citados na literatura, e não por isso menos interessantes, são o modo de infecção (ingestão de larvas infectantes de determinado parasita (artificial) versus desafio natural com espécies mista de parasitas), a característica indireta de medida de resistência genética (OPG, IgA e volume globular) e a época de desafio (característica indireta medida após desafio primário versus secundário). Além desses, fatores como raça, idade ao desafio, histórico de seleção no rebanho, número de animais experimentais, diversidade genética e frequência de alelos, número de progênies por pai e número de pais podem afetar medidas fenotípicas. No entanto, essa riqueza de fatores é compreensível, pois reflete a variação das condições dos sistemas de produção e a preocupação por determinado patógeno.

Terminologias como ligação e associação, mesmo que ambas dependam de significância estatística, não são utilizadas como sinônimos neste capítulo. Quando um marcador está ligado a uma característica, entende-se que foram realizadas análises considerando resultados de paternidade, e os genótipos do marcador ligado à característica são idênticos por descendência. Já o termo associação é utilizado quando existe relação direta entre genótipos de determinado marcador e característica fenotípica. Portanto, o termo associação é mais tênue que ligação e deve ser interpretado com cautela.

Em dois estudos de varredura total do genoma em ovinos meio-irmãos oriundos de seleção divergente para alta e baixa resistência a T. colubriformis, realizados de forma independente por duas instituições de pesquisa, CSIRO da Austrália (BEH et al., 2002) e AgResearch da Nova Zelândia (CRAWFORD; MCEWAN, 1998), foram encontrados QTLs para OPG no cromossomo ovino 3 (OAR3). As regiões entre os marcadores TGLA67 (90,4 cM) e OarVH130 (216,1 cM) e a região do gene interferon-gama foram as mais significativas, respectivamente. Em termos gerais, 1 cM (centiMorgan) equivale a 1% de recombinação entre duas regiões no mesmo cromossomo ou a uma região contendo 1 milhão de bases. A maioria dos trabalhos considera a distância entre marcadores de 20 cM como a distância mínima teórica de desequilíbrio de ligação, ou seja, quando marcador e característica medida segregam juntas.

A contagem de OPG de ovinos Romney Marsh oriundos de linhas divergentes de seleção para essa característica, desafiados naturalmente com espécies mistas de parasitas, mostrou ligação com uma região situada entre os marcadores BL004 (205,8 cM) e BMS1617 (212,2 cM), localizada dentro da região do DNA que codifica o interferon-gama (IFN-g) (PATERSON et al., 2001). De forma similar, Coltman et al. (2001) observaram ligação entre os níveis séricos de IgA de ovinos Soay (uma raça escocesa pouco domesticada que subsiste em isolamento geográfico, portanto sem histórico de seleção), desafiados com T. circumcincta, e a região do primeiro íntron do interferon-gama. O genótipo (IFN)-γ*126/126 associado com menor OPG também mostrou associação com altos níveis plasmáticos de IgA. Recentemente, Sayers et al. (2005a) demonstraram que um microssatélite localizado na região do íntron 1 do IFN-g estava associado a reduções no OPG de ovinos Texel. Os animais heterozigotos e os homozigotos para o microssatélite (GTTT)5 apresentaram reduções de 35% e 85% em OPG (escala não transformada por logaritmo) em comparação com os homozigotos para o microssatélite (GTTT)6. Um SNP localizado a 49pb desse microssatélite também mostrou estar associado com OPG baixo nessa mesma raça. Esses resultados não foram observados em ovinos Suffolk, também estudados nesse mesmo trabalho. Nesses trabalhos, foi discutida a possibilidade de existir mais de um mecanismo determinante de resistência a parasitas gastrintestinais, uma vez que os resultados de Sayers et al. (2005a, 2005b) mostraram associações significativas entre OPG e diferentes genes para diferentes raças.

Apesar de as condições serem variáveis entre esses estudos, os trabalhos apontam resultados significativos para a característica de resistência genética a parasitas gastrintestinais na região próxima ao gene do interferon-gama do cromossomo ovino 3 (OAR3). O interferon-gama é uma citocina produzida por células TH1, que diminui a expressão da resposta TH2, essencial na regulação da resposta humoral às infecções parasitárias. Como altos níveis de IgA reduzem o tamanho de larvas L4 de T. circumcincta em ovinos (STEAR et al., 1999a, 1999b) e linhas de camundongos geneticamente susceptíveis a parasitas são incapazes de expulsar larvas do trato gastrintestinal em estudos de inibição in vivo de interferon-gama (ELSE et al., 1994), é possível que a relação observada entre baixo OPG e polimorfismos no gene do interferon-gama sejam mediados via respostas em IgA.

Além dos marcadores encontrados no sistema MHC e no OAR3, também foram encontrados outros QTLs entre os marcadores McMA22 (112,4 cM) e McM214 (140 cM) no OAR6 (para OPG após primeiro desafio (*) artificial com T. colubriformis) e QTLs de menor intensidade entre os marcadores McMA22 e McM214 desse mesmo cromossomo (para OPG após o segundo desafio (#) artificial com T. colubriformis), entre McM130 e McM357 no OAR1 (#), entre TGLA51 e McMA29 no OAR11 (∗) e entre BM719 e HUJ625 no OAR12 (#) (BEH et al., 2002). QTLs em regiões dos cromossomos bovino BTA5 (sintênico ao OAR3) e BTA6 (sintênico ao OAR6) também foram descritos por Gasbarre et al. (2003) em rebanho Angus, selecionado por resistência a O. ostertagi. Esses resultados foram mais tarde validados em rebanho Brangus-Ibagé (BENAVIDES et al., 2005a, 2005b), expostos a desafio de campo em que os gêneros dos parasitas predominantes foram Trichostrongylus, Ostertagia, Cooperia e Haemonchus. Comparando os resultados desses trabalhos, verifica-se que a região do QTL encontrado por Beh et al. (2002) para o OAR6 é próxima à encontrada no BTA6 em bovinos. Essa região possui um conjunto de genes que codificam quimocinas, entre elas a interleucina 8 e proteínas CXC, envolvidas na resposta inflamatória, sendo estes genes potenciais candidatos para resistência.

Associações significativas entre alelos dos marcadores CSRD2138, TGLA176 e OarAE129 (do OAR5) e OPG foram observadas em dois rebanhos comerciais (das raças ovinas Corriedale e Ideal) que sofreram desafio natural, sendo H. contortus o parasita predominante. O alelo que apresentou maior efeito foi o CSRD2138*A que correspondeu a reduções de 28% e 22% no OPG (escala não transformada por logaritmo) (BENAVIDES et al., 2002). Esses marcadores estão situados próximos aos genes das interleucinas 3, 4 e 5 (MADDOX et al., 2001), que são responsáveis pela mudança da expressão isotípica de IgA e IgE, pelo desenvolvimento clonal e maturação de IgA e de eosinófilos, e pelo desenvolvimento clonal e maturação de IgA. Diez Tascón et al. (2002) estudaram marcadores moleculares no cromossomo ovino 1, em progênies de pais Romney Marsh oriundos de cruzamentos recorrentes de linhas “alto OPG” versus “baixo OPG”, acasalados com ovelhas Coopworth. Eles observaram ligação entre OPG e número de larvas adultas de T. colubriformis em uma região do OAR1, situada entre os marcadores EPCDV010 (22,7 cM) e ILSTS044 (67,7 cM).

Considerando o exposto, há uma grande variação na resposta de OPG em relação a polimorfirmos genéticos em diferentes genes e regiões cromossômicas. Portanto, é provável que a seleção assistida por marcadores para resistência a parasitas gastrintestinais em ruminantes seja determinada por vários genes, e não por um gene principal. O fato de a resistência estar associada/ligada a vários genes pode ter desdobramentos práticos. A possibilidade de evasão dos parasitas para os mecanismos imunes, pelas mutações no genoma desses organismos, é a maior crítica que a seleção assistida recebe. Woolaston et al. (1992) não verificaram desenvolvimento de mecanismos de adaptação do H. contortus a ovinos selecionados para resistência, mas talvez essa observação seja uma avaliação ainda muito recente. Talvez o exemplo mais próximo de mecanismo de evasão seja o desenvolvimento de resistência dos parasitas a grupos químicos utilizados como anti-helmínticos (WALLER, 1991). O uso de anti-helmíntico impõe uma alta pressão de seleção na população de parasitas e, para garantir sua sobrevivência, o nematoide deve sofrer mutação rapidamente para evadir da ação do medicamento. Como a maior parte dos anti-helmínticos considera somente um grupo químico, é mais fácil para o parasita evadir aquele mecanismo em particular. Dessa forma, Stear et al. (2001) argumentam que, se a seleção de animais para resistência estiver baseada em um gene principal, será mais provável que os parasitas desenvolvam mecanismos de evasão comparado com seleção baseada em vários genes. Na prática, os resultados estão mostrando que há várias regiões cromossômicas associadas/ligadas à resistência, assim, será menos provável que mecanismos de evasão sejam desenvolvidos.

Outro fator importante a ser levado em consideração foi levantado por Schwaiger et al. (1995), e ele diz respeito ao uso indiscriminado dos resultados de ligação gênica em programas de melhoramento. A substituição completa de um alelo por outro que confira maior resistência pode não ser desejável. A completa substituição de alelos mais frequentes da população (DRB1*I) por outros mais vantajosos para baixo OPG (DRB1*G2) pode reduzir a variabilidade genética do rebanho. A manutenção da variabilidade genética é benéfica, principalmente em genes como os do sistema MHC, que possuem importante ação na apresentação de antígenos. É possível que a homozigose nesses genes possa prejudicar a resposta do indivíduo a outras enfermidades. O incremento de alelos desfavoráveis para a expressão do interferon-gama e favoráveis para a expressão de genes de resposta tipo Th2, pode ser, ao mesmo tempo, benéfico para a redução do OPG, e maléfico para a resposta imune a outros tipos de patógenos (PRITCHARD et al., 1997). A resistência do hospedeiro a certos vírus, fungos, protozoários e bactérias é dependente da resposta Th1, que pode vir a ser suprimida no caso de seleção extrema para a resposta do tipo Th2.

Para finalizar, é necessário alertar que, mesmo tendo encontrado um gene ligado à resistência, a etapa de validação dos resultados de QTLs em outras populações é um passo importante na confirmação de marcadores moleculares para uma espécie animal. Clarke et al. (2001) encontraram ligação entre OPG em ovinos Merino selecionados por linhas divergentes desafiadas para T. colubriformis na região do gene que codifica a IgE no OAR18; porém, quando os autores validaram esses resultados em outros rebanhos selecionados para resistência a T. colubriformis e H. contortus, essa mesma ligação não foi observada. A maioria dos delineamentos experimentais faz uso de seleção divergente para OPG na maximização da expressão de diferenças fenotípicas. Como cada população possui sua frequência alélica particular, é possível que os alelos associados com redução/incremento no OPG sejam bastante constantes em outros rebanhos. Nesse caso, a seleção limitará o uso desse marcador para aquele rebanho, uma vez que o alelo já está em alta frequência. Se o alelo associado for de baixa frequência no rebanho ou inexistente, a seleção e a introgressão desse alelo serão efetivas.

Considerações finais

O estudo de QTLs demanda um grande esforço em termos de tempo, recursos para a formação de famílias delineadas com o propósito de estudar ligação gênica e para a manutenção dos animais nas condições experimentais adequadas, recursos de laboratório com alta capacidade de análises genotípicas, além de um grande grupo de colaboradores de vários institutos de pesquisa. O alto custo na geração de resultados explica a tendência dos institutos de pesquisa em patentear seus resultados de QTL e não disponibilizar as informações para a comunidade científica. Mais do que o uso desses marcadores moleculares para uma futura seleção assistida por marcadores, aliada a métodos tradicionais de melhoramento animal, existe o interesse comercial em resultados que sejam também vantajosos no desenvolvimento de drogas imunomoduladoras, de grande valia para indústrias farmacêuticas.

Há uma séria limitação de informações sobre a resistência genética a nematoides gastrintestinais na espécie caprina. Projetos estão sendo desenvolvidos com a finalidade de gerar populações segregantes para o estudo de QTLs na Embrapa Caprinos, em Sobral, CE. Um fator que pode ser vantajoso para a espécie caprina é a remarcável similaridade entre os genomas caprino e bovino. Assim, a espécie caprina pode se beneficiar dos estudos em bovinos. Na realidade, por meio dos estudos de genômica comparativa, será possível beneficiar uma espécie com as informações obtidas em outra.

As pesquisas, até o momento, demonstram que a seleção de animais resistentes é realidade em vários países que possuem programas de melhoramento genético. Os resultados são significativos e mostram vantagens tanto para o aumento na frequência de animais mais resistentes como para a redução média de OPG no rebanho em geral. Os estudos de marcadores genéticos, apesar de terem tido um aumento expressivo nos últimos anos, ainda são dependentes de confirmações mediante procedimentos de validações. De qualquer modo, os trabalhos indicam que uma seleção assistida por marcadores será possível. Pelo menos duas regiões, nos cromossomos ovino 3 (região próxima à do interferon-gama) e 20 (região próxima à do MHC), mostraram resultados significativos por grupos independentes. Além disso, outros resultados confirmam a existência significativa de QTLs em outros cromossomos. Essa variação de resultados indica que a resistência genética do hospedeiro a parasitas gastrintestinais não é determinada por um gene principal, e sim por vários genes que explicam uma parte da variação fenotípica para OPG.

Por último, é necessário ter em mente que é inexequível a erradicação da verminose, portanto, seu controle em ruminantes deve ser buscado sob um enfoque multidisciplinar e sustentável, levando em conta vários aspectos, entre eles o uso de novos medicamentos, as rotações com diferentes cargas animais e os intervalos entre rotações, as dietas com elevados teores proteicos (COOP; HOLMES, 1996), o uso de vacinas – ainda em desenvolvimento – (EMERY; WAGLAND, 1991; SMITH, 1993; TAVERNOR et al., 1992a, 1992b), o uso de fungos nematófagos (LARSEN et al., 1998; LARSEN, 2000; WAGHORN et al., 2003), as pastagens com altos níveis de tanino (NIEZEN et al., 1998a, 1998b, 2002a, 2002b; PAOLINI et al., 2003) e a seleção de animais mais resistentes a parasitas gastrintestinais.

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Capítulo 22
Princípios farmacológicos da terapia anti-helmíntica

Carlos Edmundo Lanusse
Luís Ignácio Alvarez
Adrián Luiz Lifschitz

Introdução

O uso incorreto de fármacos na medicina veterinária e a inadequada avaliação dos efeitos indesejáveis sobre o animal tratado e sobre a saúde do consumidor e do meio ambiente são problemas ainda não resolvidos. A compreensão do comportamento farmacológico de um agente químico, quando em contato com um organismo vivo, como também a caracterização de certos fatores que podem afetá-lo são relevantes para: a) otimizar a resposta de substâncias utilizadas com fins terapêuticos ou profiláticos; b) evitar a aparição de efeitos colaterais indesejáveis; c) impedir o desenvolvimento de resistência (farmácos antibacterianos, antiparasitários, etc.); d) determinar adequados períodos de carência, antes que a carne ou leite de um animal tratado se destine ao consumo humano; e) prevenir um eventual impacto ambiental negativo como consequência da eliminação de resíduos químicos nas fezes.

As doenças parasitárias são as principais causas das perdas na produtividade pecuária em muitas regiões do mundo. Apesar dos avanços na busca de estratégias de controle não químico (controle biológico, vacinas, etc.), o tratamento antiparasitário ainda dependerá do uso de fármacos por muito tempo. Um valor relevante de perdas econômicas causadas pelo parasitismo na produção animal origina-se da inversão nas medidas de controle. O fracasso no controle antiparasitário, baseado exclusivamente na quimioterapia, tem importância econômica de enorme transcendência em países como o Brasil, onde as condições climáticas e de exploração favorecem uma alta incidência do parasitismo. A disponibilidade futura de novas moléculas antiparasitárias está comprometida pelo progressivo aumento do fenômeno de resistência parasitária e pelo crescente custo da pesquisa e desenvolvimento. Por causa do elevado custo e do baixo retorno da pesquisa/desenvolvimento de fármacos parasiticidas, são necessários novos enfoques no processo de descoberta de drogas, o que demandará mais pesquisa básica e custos mais elevados.

A falta de integração entre manejo animal e tratamento e o uso incorreto de drogas anti-helmínticas, em razão do desconhecimento de suas propriedades fármacológicas, são elementos relevantes na falha do controle antiparasitário em animais de produção. A eficácia das drogas anti-helmínticas depende da disponibilidade sistêmica e do tempo de permanência da droga ativa no organismo do animal tratado. Para obter um efeito sistêmico, um fármaco anti-helmíntico, administrado por via oral ou parenteral, deve ser absorvido e distribuído nos diferentes tecidos, até atingir concentrações adequadas no local parasitado (Figura 1). O conhecimento farmacoparasitológico integrado é imprescindível para otimizar o uso de drogas antiparasitárias disponíveis. Este capítulo descreve as propriedades farmacológicas que são necessárias para aperfeiçoar o uso de fármacos no controle das helmintoses em ovinos e caprinos.

Figura 1. Representação esquemática das principais "barreiras" que uma droga deve ultrapassar, após a administração oral, até atingir o local de ação (biofase) no parasita-alvo, o que determina o efeito farmacológico final (morte e/ou expulsão do parasita).

Fonte: adaptado de Alvarez et al. (2007).

Fármacos nematodicidas

Benzimidazóis e probenzimidazóis

Os anti-helmínticos benzimidazóis (BZD) fazem parte de um grupo central benzimidazole, a partir do qual foi sintetizada grande quantidade de moléculas. Classificam-se em quatro grupos: BZD tiazoles; BZD metilcarbamatos; pró-BZD e BZD halogenados (LANUSSE; PRICHARD, 1993a). Tiabendazole (TBZ), um BZD tiazol, foi o primeiro BZD aprovado como anti-helmíntico. A adição na posição 2- do núcleo BZD de um grupo metilcarbamato incrementou a lipossolubilidade e a potência anti-helmíntica dessas moléculas. Os principais BZD metilcarbamatos utilizados em ovinos incluem o albendazole (ABZ) e seu metabólito ativo, o ABZ-sulfóxido (ABZSO), também conhecido como ricobendazole; o fenbendazole (FBZ) e seu metabólito ativo, o FBZ-sulfóxido, conhecido como oxfendazole (OFZ); o oxibendazole (OBZ); e o mebendazole (MBZ). Os fármacos pró-BZD carecem de atividade farmacológica, sendo metabolizados no organismo para gerar moléculas ativas. O febantel (FBT) é oxidado principalmente no fígado e transforma-se em fenbendazole (FBZ) (MONTESSISSA et al., 1989). O netobimin (NTB) é reduzido pela microflora ruminal a ABZ, embora o NTB possa ser formulado como uma solução para administração parenteral. O uso desta via evita na maioria das vezes a sulforredução bacteriana ruminal (LANUSSE et al., 1990), o que resulta em uma reduzida biodisponibilidade dos metabólitos ativos. As estruturas químicas das principais moléculas deste grupo podem ser observadas na Figura 2. Entre os BZD halogenados, encontra-se o triclabendazole (TCBZ). Essa molécula é a única reconhecida com elevada eficácia sobre estágios imaturos e maturos de Fasciola hepatica, assunto abordado no item sobre fármacos trematodicidas.

Figura 2. Classificação e estrutura química dos principais fármacos benzimidazoles nematodicidas.

Fonte: adaptado de Lanusse y Princhard (1993b).

O mecanismo de ação dos anti-helmínticos BZD baseia-se na união desses com a tubulina dos helmintos, proteína solúvel que constitui a estrutura básica dos microtúbulos. Pesquisas têm demonstrado que os BZD se ligam de forma reversível, no lugar de união da colquicina, à subunidade ß da tubulina (LACEY, 1990). Os dímeros de tubulina unidos à molécula do fármaco BZD não podem se polimerizar para formar os microtúbulos; dessa forma, alteram o equilíbrio microtúbulos-tubulina. Existe um grande número de funções celulares que são dependentes da integridade dos microtúbulos. Entre elas, as mais importantes são: formação do uso mitótico durante o processo de divisão celular, conservação da forma e estrutura celular, motilidade, secreção celular, absorção de nutrientes e transporte intracelular.

A maior afinidade dos BZD com a tubulina explica a baixa toxicidade dos anti-helmínticos em mamíferos. O efeito ovicida demonstrado na maioria dos BZD, assim como os efeitos teratogênicos evidenciados logo após o seu uso em fêmeas ovinas gestantes podem ser explicados por sua ação antimicrotubular.

A perda do equilíbrio microtúbulos-tubulina bloqueia a absorção e excreção de nutrientes, submetendo o parasita a um “jejum” químico. In vivo, a ação anti-helmíntica dos BZD não é imediata; requerem-se concentrações constantes para garantir a modificação de certas funções vitais que facilitem o desprendimento dos helmintos de seus sítios prediletos de localização. Por essa razão, a administração de uma única dose (3,8 mg/kg) de ABZ em ovinos reduz o número de Haemonchus contortus resistentes em 21,1%. Após a administração durante 5 dias consecutivos (1 mg/kg), esse percentual elevou-se para 89% (KWAN et al., 1988). Em consequência, o aumento na biodisponibilidade desses compostos, somado a uma maior persistência, resulta numa elevada eficácia anti-helmíntica.

O comportamento farmacocinético dos fármacos BZD em ruminantes está condicionado a características físico-químicas e a possibilidades farmacotécnicas para formulá-los. A baixa solubilidade aquosa dos BZD determina que eles sejam formulados como suspensão, isto é, as partículas do anti-helmíntico são suspensas (insolúveis) em um veículo aquoso. Esse tipo de formulação apresenta um fator limitante que é a administração só por via oral ou intrarruminal. A dissolução do princípio ativo deve preceder necessariamente a absorção. As moléculas que não dissolverem não apresentarão atividade farmacológica e serão eliminadas nas fezes. Depois de administrada, a droga é adsorvida em grande proporção no material particulado presente no conteúdo ruminal. Os BZD metilcarbamatos dissolvem-se melhor a baixos valores de pH, sendo o abomaso o local ideal para isso. Somado a isto, o rúmen libera o fármaco em forma gradual, facilitando o processo de dissolução. O jejum dos animais antes do tratamento retarda o trânsito gastrintestinal e favorece uma melhor dissolução da formulação, o que se traduz em aumentos significativos das concentrações plasmáticas dos princípios ativos (SANCHEZ et al., 1997a) (Figura 3). Se um BZD administrado por via oral estimula e fecha a goteira esofágica, o composto será depositado diretamente no abomaso, evitando sua passagem pelo rúmen. A chegada maciça do fármaco ao abomaso impede que as partículas da formulação se dissolvam uniformemente (HENNESSY, 1993). Consequentemente, haverá menor absorção e menor disponibilidade sistêmica de droga ativa, comprometendo a eficácia do tratamento.

Figura 3. Concentrações plasmáticas de sulfóxido de albendazol (ABZSO), obtidas após a administração oral de albendazole (7,5 mg/kg) em ovinos sem jejum (alimentação ad libitum) ou jejum de 24 horas antes do tratamento (A). Impacto sobre a cinética de jejum e eficácia dos anti-helmínticos benzimi-dazóis (B).

Fonte: adaptado de Lifschitz et al. (1997).

A droga absorvida pode sofrer metabolismo intestinal, hepático (principal sítio do metabolismo) e/ou pulmonar. Dada a lipossolubilidade dos compostos BZD metilcarbamatos, um intenso processo de biotransformação é requerido para facilitar sua posterior eliminação. Por essa razão, são muito baixas ou nulas as concentrações da droga-mãe detectadas no plasma dos animais tratados, sendo os metabólitos sulfóxidos as principais moléculas detectadas em ovinos (Figura 4). Os principais sistemas enzimáticos responsáveis pelo metabolismo dos BZD estão localizados no retículo endoplásmico (fração microssomal), nos hepatócitos ou no enterócito. Esses são os sistemas enzimáticos flavin-monooxigenasa (FMO) e o citocromo P-450 (Cit. P-450). O sistema FMO é responsável pela oxidação de ABZ e FBZ no nível do átomo de enxofre (sulfoxidação), originando ABZSO e OFZ, respectivamente. Os sulfóxidos são os principais metabólitos plasmáticos recuperados em ovinos (Figura 5). Uma segunda oxidação a cargo do sistema Cit. P-450 produz o metabólito sulfona a partir do sulfóxido, e os metabólitos sulfóxidos possuem atividade farmacológica menor do que a droga-mãe. As sulfonas são metabólitos inativos.

Figura 4. Principais vias metabólicas e atividade farmacológica de albendazole (ABZ) e fenbendazole (FBZ) em ovinos.

Fonte: adaptado de Lanusse y Princhard (1993b).

Figura 5. Comparativo das concentrações plasmáticas de metabólitos albendazol sulfóxido (ABZSO) e oxfendazole (OFZ), obtidas após a administração intrarruminal (5 mg/kg) de albendazol (ABZ), fenbendazole (FBZ) ou OFZ em ovinos.

Fonte: adaptado de Lanusse et al. (1995).

Os metabólitos sulfóxidos ABZSO e OFZ são eficientemente reduzidos às suas drogas-mães, ABZ e FBZ, respectivamente, por ação da flora microbiana ruminal e intestinal (LANUSSE et al.,1992b). Essa redução incrementa a disponibilidade da droga-mãe no intestino e favorece o efeito anti-helmíntico final, visto que ABZ e FBZ possuem maior lipossolubilidade, maior capacidade de atravessar a cutícula dos nematoides e concentrar-se em seu interior, e maior afinidade pela ß tubulina do parasita, comparado com seus respectivos metabólitos sulfóxidos. De fato, grande parte da atividade anti-helmíntica observada após a administração de ABZSO ou OFZ pode ser atribuída a concentrações da droga-mãe, originadas a partir da redução microbiana dos metabólitos.

Por apresentar um átomo de carbono, ABZSO e OFZ mostram-se com duas conformações espaciais diferentes, denominadas enantiómeros. Depois da administração de ABZ em ovinos, 86% do ABZSO presente no plasma corresponde ao enantiómero (DELATOUR et al., 1990). O diferente padrão de concentração de cada enantiómero seria dado por um metabolismo enantioseletivo, mediado por Cit. P-450 (sulfonação). As características do metabolismo enantioseletivo (sulfoxidação) de ABZ e FBZ no fígado e da sulforredução e inversão quiral dos enantiómeros de ABZSO e OFZ, têm sido muito pesquisadas em ruminantes (VIRKEL et al., 2002, 2004), dada a importância que esses fenômenos têm para a atividade anti-helmíntica dessas moléculas.

Na circulação sanguínea, os metabólitos distribuem-se nos diferentes compartimentos teciduais. O gradiente de pH existente entre o plasma e o abomaso favorece a distribuição das moléculas nesse nível (LANUSSE; PRICHARD, 1993b). Uma parte importante do fármaco presente na circulação sistêmica pode alcançar o tubo digestivo com as secreções abomasais e intestinais. Em virtude da maior lipossolubilidade das moléculas-mães (ABZ e FBZ), elas concentram-se em tecidos de maior conteúdo lipídico, assegurando sua presença nas mucosas e nos parasitas-alvo, o que é fundamental do ponto de vista da eficácia clínica (Figura 6), onde observa-se a quantidade do ABZ recuperado no parasita apesar de não ter sido detectado no plasma. A recirculação do fármaco entre o plasma e o trato gastrintestinal é muito importante no efeito anti-helmíntico sobre parasitas localizados nas mucosas gastrintestinais. Por sua vez, a distribuição do fármaco em diferentes tecidos possibilita a sua disponibilidade em outros órgãos, como pulmão e condutos biliares, que são sítios de localização de parasitas, tais como Dictyocaulus spp. e F. hepatica, respectivamente.

Figura 6. Comparação entre a disponibilidade (expressa em valores de concentração versus tempo (ABCo-12) do albendazole (ABZ) e do sulfóxido de albendazole (ABZSO) no plasma, no fluido abomasal, na mucosa abomasal e no Haemonchus contortus, recuperados de ovinos tratados com ABZ (7,5 mg/kg, intrarruminal).

Fonte: Adaptado de Alvarez et al. (2000).

Os BZD metilcarbamatos podem ter, na posição 5 - do núcleo químico BZD, uma substituição aromática (FBZ e OFZ) ou alifática (ABZ e PBZ). As diferenças da substituição no grupo químico têm implicações no metabolismo e na eliminação. As moléculas com substituição aromática são metabolizadas com maior dificuldade, desse modo, após a administração de FBZ, detectam-se baixas concentrações da droga-mãe no plasma; e a eliminação efetua-se principalmente pela bílis. Já na administração de ABZ, este é rapidamente metabolizado, sendo eliminado 70% por via urinária (HENNESSY et al., 1989).

Na urina de ovinos tratados com ABZ, o principal metabólito recuperado é o ABZSO, e detectam-se pequenas quantidades (aproximadamente 1% da dose administrada) de ABZ. Só 30% da dose de ABZ administrada é eliminada nas fezes. O fármaco presente nelas provém daquele que não chegou a se dissolver e atravessou o trato gastrintestinal sem ser absorvido, sendo eliminado pela bílis por secreções abomasal e intestinal. Após a administração de ABZ em cabras, as concentrações plasmáticas dos metabólitos sulfóxido e sulfona caem mais rapidamente, quando comparados com os de ovinos (HENNESSY et al., 1993). Os processos farmacocinéticos definitivamente determinam as concentrações do fármaco no sítio de localização dos parasitas que se pretende eliminar. Por esse motivo, existe uma estreita relação entre a farmacocinética e o efeito anti-helmíntico.

Os anti-helmínticos BZD são fármacos que possuem um amplo espectro de ação, com atividade variável sobre diferentes helmintos, conforme a composição do fármaco. Em ovinos, a dose de 5 mg/kg de ABZ apresenta eficácia superior a 98% para nematoides gastrintestinais e tênias. Também essa dose apresenta atividade contra parasitas pulmonares e larvas hipobióticas. Doses maiores de ABZ (7,5 mg/kg) são requeridas para o controle de F. hepatica adultas (> 12 semanas) e de Thysanosoma actinoides, cestódeo localizado no canal colédoco (CAMPBELL, 1990). Além de apresentar atividade sobre nematoides, trematódeos e cestódeos, o ABZ tem demonstrado ser eficaz contra Giardia lamblia (XIAO et al., 1996). Em humanos, o ABZ é o fármaco escolhido para o tratamento de neurocisticercose e hidatidose.

A baixa solubilidade aquosa dos compostos BZD limita sua formulação em suspensões, pastas, grânulos, tabletes, blocos ou pó, se for para ministrar por via oral/intrarruminal ou para mesclar com o alimento (MCKELLAR; SCOTT, 1990). As suspensões para administração oral são as mais utilizadas em ovinos e caprinos. Por sua vez, existem dispositivos intrarruminais de liberação controlada de fármacos BZD, os quais incluem ABZ ou OFZ como princípios ativos. Esses dispositivos estão desenhados para permanecer no rúmen/retículo e liberar (de forma contínua ou intermitente) quantidades efetivas do fármaco, assegurando proteção antiparasitária por um período de 90 a 120 dias, conforme o produto comercial. A praticidade de se proteger os animais de infecções parasitárias, durante um período prolongado, com uma única administração tem como desvantagem o custo dos sistemas e a grande pressão de seleção de cepas resistentes, que se faz sobre as populações parasitárias.

A resistência parasitária a fármacos anti-helmínticos representa um problema sério na maioria dos sistemas produtivos do mundo, especialmente naqueles intensivos ou semiextensivos. Com o objetivo de minimizar as probabilidades de um fracasso terapêutico após o tratamento anti-helmíntico, tem sido desenvolvidas diferentes formas farmacêuticas ou formulações que incluem um ou vários princípios ativos com diferente mecanismo de ação. Em infecções parasitárias mistas, com frequência são encontradas diferentes cepas de parasitas resistentes a um único grupo químico. Por isso, espera-se que, após tratamento simultâneo com dois princípios ativos que atuam com diferentes mecanismos, se atinja um efetivo controle anti-helmíntico, uma vez que um parasita resistente ao fármaco A será eliminado pelo fármaco B e vice-versa. No mercado farmacêutico veterinário, especialmente na Austrália e Nova Zelândia, encontram-se disponíveis produtos comerciais de administração oral em ovinos que combinam fármacos de diferentes grupos químicos: ABZ + levamisole; FBZ + levamisole; OFZ + levamisole; OFZ + closantel; FBZ + levamisole + praziquantel; ABZ + ivermectina + levamisole; ABZ + abamectina + levamisole + closantel; naftalofós + ABZ + levamisol.

Não existem evidências de potencialização no efeito antiparasitário de fármacos com diferentes mecanismos de ação, de forma que os melhores resultados terapêuticos se relacionam ao efeito aditivo entre os diferentes princípios ativos que compõem o produto comercial. Novamente, o uso indiscriminado desse tipo de preparado, sem supervisão profissional, pode determinar uma grande pressão de seleção de cepas multirresistentes, agravando o quadro de resistência parasitária. O uso de combinações de fármacos deveria ficar restrito ao tratamento de animais que chegam a uma propriedade e podem ser potenciais portadores de cepas resistentes (uso no período da quarentena).

Os anti-helmínticos BZD são moléculas de elevado índice terapêutico. Entretanto, não escapam do princípio de que “nenhum composto é inócuo, sem que isto dependa das doses administradas”. Doses elevadas produzem sequelas, tais como alterações hematológicas, hemorragia intestinal, edema pulmonar, diminuição na secreção biliar, etc. De todos os efeitos adversos produzidos pelos anti-helmínticos BZD, o mais característico é o teratogênico. Os ovinos são a espécie mais sensível, sendo ABZ, OFZ e FBT as moléculas implicadas. A incidência de teratogênese é maior quando os animais são tratados na terceira semana de gestação, em especial no dia 17. Os efeitos teratogênicos mais comuns manifestam-se com malformações esqueléticas.

Imidazotiazóis e tetra-hidropirimidinas

Tetramisole, o primeiro imidazotiazol introduzido no mercado anti-helmíntico veterinário, é o resultado da mistura racêmica dos isômeros ópticos S(-)Tetramisole (l-tetramisole) e R(+)Tetramisole (d-tetramisole). O isômero l-tetramisole é conhecido pelo nome de levamisole. O levamisole substituiu rapidamente o tetramisole, visto que é um isômero que conserva a atividade anti-helmíntica e apresenta maior margem de segurança. O levamisole tem um amplo espectro nematodicida, incluindo nematoides gastrintestinais e pulmonares adultos e não apresenta atividade trematodicida e cestodicida. Exerce sua ação mediante um antagonismo colinérgico, a partir do qual se abrem canais iônicos que permitem a entrada de sódio no interior da célula (MARTIN, 1997). Como resultado, produz-se uma rápida contração muscular, com consequente desprendimento dos parasitas dos locais infectados. Os sais de fosfato ou cloridrato permitem formular o levamisole como uma solução estéril de administração sub-cutânea, intramuscular, oral ou intrarruminal. Em geral, a absorção do levamisole, após sua administração enteral ou parenteral, é rápida, atingindo máximas concentrações plasmáticas entre 30 minutos a 3 horas após a administração, dependendo da via utilizada (BOGAN et al., 1982). Porém, a biodisponibilidade parenteral é maior do que a alcançada após a administração enteral (42%–44%). Em ovinos, concentrações plasmáticas de aproximadamente 3 µg/mL são atingidas após a administração subcutânea de levamisole na dose de 8 mg/kg (BOGAN et al., 1982). A persistência do levamisole no plasma é de 6 a 8 horas e, em consequência, o efeito anti-helmíntico é de curta duração. Isso se deve principalmente à rápida distribuição do fármaco nos diferentes tecidos/fluidos orgânicos e pronta eliminação urinária do levamisole e seus metabólitos. Estima-se que 90% das doses administradas são excretadas nas primeiras 24 horas, e 30% de levamisole/metabólitos conjugados são eliminados na bílis. Apesar de a atividade nematodicida do levamisole ser ampla e de elevada eficácia, alguns parasitas, como Trichuris spp. e larvas tissulares inibidas, são menos susceptíveis ao fármaco. Adicionalmente, o levamisole parece ter efeito imunomodulador. A margem de segurança do levamisole é estreita. Os sinais de intoxicação associam-se a efeitos muscarínicos e nicotínicos, destacando-se salivação, defecação, dificuldade respiratória, mioses, ataxia, etc. Estima-se um período de carência de 7 dias, o qual depende da via de administração e do produto comercial em questão.

O pirantel e seu análogo morantel são os principais fármacos do grupo das tetra-hidropirimidinas utilizados em medicina veterinária. São formulados com sais de citrato, tartarato ou pamoato (embonato). O tipo de sal determina a solubilidade aquosa do composto, sendo os sais de citrato e tartarato os mais solúveis, e os de pamoato os de baixa solubilidade aquosa. As diferentes formulações disponíveis do pirantel ou morantel são de administração oral. De forma similar ao levamisole, esses fármacos são agonistas nicotínicos, pois induzem a contração muscular e paralisia espástica em nematoides susceptíveis (MARTIN, 1997). Embora ambos os fármacos sejam efetivos contra nematoides gastrintestinais adultos e estádios larvários presentes na luz intestinal, a eficácia anti-helmíntica do morantel em ovinos é maior do que a do pirantel. A falta de eficácia contra nematoides pulmonares deve-se basicamente ao problema de chegada do fármaco ao parasita, visto que a absorção gastrintestinal é muito baixa, dependendo do sal utilizado ou da fração do fármaco absorvida, que é metabolizada rapidamente a metabólitos inativos (LANUSSE; PRICHARD, 1993a).

Esses metabólitos são eliminados em ruminantes pela bílis (75%) e urina (25%). Independentemente do sal utilizado, a absorção do morantel em ruminantes é muito baixa e não se detectam concentrações da droga-mãe no plasma dos animais tratados (LANUSSE et al., 1992a). A dose recomendada de morantel em ovinos e caprinos é de 10 mg/kg, e de pirantel é de 25 mg/kg em ambas as espécies. A baixa biodisponibilidade do pirantel e morantel em ruminantes, após administração oral, determina sua baixa toxidez nessas espécies. Em casos extremos de superdose, a sintomatologia clínica está relacionada a manifestações nicotínicas similares às descritas para o levamisole – salivação, dificuldade respiratória, ataxia, etc. (COURTNEY; ROBERSON, 1995). Como apresentam o mesmo mecanismo de ação do levamisole, potencialmente podem atuar com efeito somatório, incrementando o risco de toxidez, razão pela qual não se recomenda o uso combinado.

Organofosforados

Os compostos organofosforados são utilizados como antiparasitários externos e/ou internos. Seu mecanismo de ação tem como base a inibição de enzimas com atividade esterase, principalmente a acetilcolinesterase, a qual catalisa a degradação do neurotransmissor acetilcolina. A inibição dessa enzima determina que concentrações permanentes de acetilcolina permaneçam no espaço sináptico, bloqueando a transmissão nervosa nicotínica e produzindo paralisia espástica nos parasitas. Pelo fato de os organofosforados bloquearem a acetilcolinesterase dos mamíferos, são fármacos potencialmente tóxicos, por isso se deve tomar cuidados na dosificação e manipulação deles.

Existe um grande número de compostos utilizados na medicina veterinária. Os mais importantes para uso em ruminantes são o crufomate, haloxon, cumafós e naftalofos. Em ovinos e caprinos, são usados principalmente em formulações para administração oral no controle de Haemonchus spp., Trichostrongylus spp., Ostertagia spp. e Teladorsagia spp.

A eficácia desses fármacos é menor em nematoides parasitas localizados no intestino grosso, tais como Oesophagostomum spp. e Chabertia spp. (COURNEY; ROBERSON, 1995). Pela elevada lipossolubilidade, os organofosforados podem ser absorvidos pela mucosa e por meio do epitélio intestinal. Após sua absorção, são rapidamente metabolizados e eliminados pela urina e bílis na forma de metabólitos inativos. Apesar de serem fármacos com baixa margem de segurança, que foram deixados de lado pelo aparecimento de compostos mais modernos e seguros, o surgimento de resistência de nematoides de ovinos e caprinos a outros grupos químicos tem mostrado a necessidade de se utilizar compostos organofosforados nessas espécies de pequenos ruminantes.

A toxidez produzida pelos organofosforados baseia-se numa típica sintomatologia do tipo parassimpático, similar à observada para o levamisole, que inclui aumento de secreções (salivais e intestinais), mioses, ataxia muscular, dificuldade respiratória, etc. O antídoto específico nesse caso é a atropina, que é um fármaco anticolinérgico.

Fármacos trematodicidas

Triclabendazole e outros benzimidazóis

Só algumas moléculas do grupo dos anti-helmínticos BZD podem ser utilizadas no controle de trematódeos como Fasciola hepatica e Fasciola gigantica. Entre os de maior uso em ovinos e caprinos, destacam-se o netobimin (pró-BZD), albendazole (ABZ) e triclabendazole (TCBZ). Como foi mencionado, netobimin é a pré-droga do ABZ, um BZD metilcarbamato ativo ante estágios maturos de F. hepatica (>12 semanas), que, além de apresentar efeito cestodicida, é nematodicida. As doses fasciolicidas de ABZ e netobimin em ovinos são de 7,5 mg/kg e 20 mg/kg, respectivamente. As principais características farmacológicas desses fármacos foram descritas na seção correspondente a fármacos. TCBZ é um BZD halogenado que se diferencia do ABZ e apresenta atividade sobre estádios maturos e imaturos de F. hepatica (> 2 dias), porém não tem atividade contra nematoides e cestódeos. A atividade fasciolicida do ABZ baseia-se numa ação antimicrotubular, porém o mecanismo de ação do TCBZ ainda não foi muito bem esclarecido.

Após administração oral do TCBZ, seus metabólitos, TCBZ-sulfóxido (TCBZSO) e TCBZ-sulfona (TCBZSO2), são detectados no plasma pelo período de aproximadamente 120 horas. As máximas concentrações plasmáticas em ovinos estão na faixa de 13,3 µg/mL (TCBZSO) e 13,2 µg/mL (TCBZSO2) e são atingidas, respectivamente, 18 e 36 horas após o tratamento. As altas concentrações dos metabólitos do TCBZ no plasma, comparados com outros BZD, são similares, pela elevada afinidade de união a proteínas plasmáticas (>99%) desses compostos, em especial a albumina. Metabólitos hidroxilados, em sua forma livre ou conjugada com ácido glucurônico ou sulfatos, são detectados na bílis dos animais tratados. A atividade farmacológica de TCBZ depende principalmente da ação do metabólito sulfóxido e provavelmente do próprio TCBZ, já que em baixas concentrações pode ser recuperado na bílis e em espécies de F. hepatica recuperadas de animais tratados.

As doses recomendadas de TCBZ em ovinos e caprinos são de 10 mg/kg e 15 mg/kg, respectivamente. A caracterização das vias metabólicas pelas quais o TCBZ é oxidado – tanto no animal hospedeiro (VIRKEL et al., 2006) como no parasita-alvo (MOTTIER et al., 2004) e nos mecanismos envolvidos no influxo e efluxo do TCBZ e seus metabólitos na F. hepatica (ÁLVAREZ et al., 2007) – tem sido bastante pesquisada, por causa de sua ação no desenvolvimento de resistência. De fato, o aumento no metabolismo oxidativo e no efluxo, mediado por transportadores celulares que limitem o acumúlo de TCBZ e seus metabólitos na Fasciola spp., tem sido proposto como mecanismo de resistência ao fármaco, uma desvantagem crescente em muitas regiões do mundo. Adicionalmente, o TCBZ apresenta-se formulado em combinação com outros fármacos anti-helmínticos para uso oral em ovinos, em especial com as avermectinas (ivermectina e abamectina), no intuito de incrementar o espectro antiparasitário do preparado comercial.

Nitroxinil

Dentro do grupo dos nitrofenóis incluem-se fármacos tais como nitroxinil, disofenol e niclofolan, que apresentam atividade fasciolicida e reduzido espectro nematodicida, o qual se limita principalmente ao Haemonchus spp. Nitroxinil é o fármaco do grupo de maior uso em ovinos e caprinos, é efetivo em estádios maturos de F. hepatica (maiores que oito semanas). Adicionalmente, tem atividade contra nematoides hematófagos, como H. contortus, e pode ser uma ferramenta válida para o controle de cepas resistentes desse importante parasita. O Oesophagostomum spp. e Bunostomum spp. são eliminados efetivamente com nitroxinil.

O mecanismo de ação fasciolicida do nitroxinil não tem sido demonstrado com clareza. A semelhança estrutural com compostos como o 2,4-dinitrofenol sugere que, como este, o nitroxinil desativaria a forforilação oxidativa. Contudo, a rápida paralisia espástica que se observa na F. hepatica em contato com o fármaco e os danos derivados da atividade dele não parecem depender de bloqueios de vias energéticas no parasita (ROBERSON; COURTNEY, 1995). O nitroxinil pode ser administrado pela via oral, subcutânea ou intramuscular. A biodisponibilidade alcançada após administração oral é menor do que a observada após a administração parenteral, o que se explica pela redução que o fármaco sofre no rúmen. Por esse motivo, prefere-se a administração parenteral, em especial a subcutânea, por ser de maior praticidade. Igual a outros fasciolicidas, o nitroxinil liga-se em elevada proporção (>98%) a proteínas plasmáticas, o que determina sua baixa taxa metabólica e lenta eliminação, uma vez que ambos os processos dependem das concentrações livres (não ligadas a proteínas) do fármaco. Isso explica a extrema persistência do fármaco no plasma, onde é possível detectar concentrações dele até 80 dias após a administração.

A hidrólise do grupo ciano é a principal via metabólica e de inativação do fármaco. Os metabólitos carecem de atividade farmacológica e são eliminados principalmente pela bílis. Ao contrário, a droga-mãe é eliminada em grande parte pela urina, e uma fração importante pode ser excretada no leite, razão pela qual não é recomendado seu uso em animais lactantes. Os animais tratados com nitroxinil não devem ser destinados ao consumo humano até 60 dias após a administração. Já que o medicamento mancha as fibras de cor amarela de forma acentuada, deve-se ter o cuidado de não derramá-lo sobre a lã dos animais.

Closantel e outras salicilanilidas

As salicilanilidas compreendem um grupo de fármacos entre os quais se encontram closantel, rafoxanida e oxiclosanida. Embora todos estejam aprovados para uso em ovinos, closantel é o fármaco do grupo mais utilizado nessa espécie. O closantel é muito efetivo em Fasciola spp. adultas, maiores de oito semanas, Haemonchus spp., Oesophagostomun spp., Bunostomun sp. e Ostertagia spp. É o único fármaco do grupo com atividade contra alguns parasitas externos, como Oestrus ovis, Dermatobia hominis, Cochliomia hominivorax (miíase), ácaros de sarna, carrapatos e piolhos (sugadores e mastigadores). O mecanismo de ação fasciolicida desses compostos tem como base o bloqueio da fosforilação oxidativa, com o qual se interfere na geração de energia por parte do parasita. Por sua vez, o closantel leva a uma importante diminuição do pH no tegumento e a uma contração muscular associada ao incremento das concentrações de cálcio no subtegumental (paralisia espástica). O efeito contra parasitas externos poderia basear-se na atividade anticolinesterásica, similar à descrita para os organofosforados. O closantel é um ácido fraco halogenado de peso molecular e lipofilicidade elevados.

É formulado para administração oral ou parenteral (subcutânea ou intramuscular). As doses recomendadas de closantel em ovinos dependem da via de aplicação e do parasita-alvo. Se a administração for parenteral, doses de 5 mg/kg a 10 mg/kg são recomendadas para o controle de nematoides gastrintestinais, e de 10 mg/kg para F. hepatica e parasitas externos. Na administração oral, recomendam-se doses de 7,5 mg/kg e 15 mg/kg, respectivamente. A maior dose requerida para o controle de parasitas externos e F. hepatica explica-se pela menor chegada do fármaco a locais distantes da infecção parasitária, como a pele e os canais biliares. É preciso uma dose maior para o tratamento oral em virtude da menor biodisponibilidade sistêmica do fármaco administrado por essa via, como consequência de sua elevada ionização ao pH intestinal e sua elevada associação a material particulado da ingesta (SANCHEZ et al., 1997b).

A redução da ingesta de alimento ou o jejum prévio à administração oral aumentam a biodisponibilidade do fármaco. Em termos gerais, após a administração do closantel (oral ou parenteral) em ovinos, obtêm-se concentrações máximas da droga (47,0 µg/mL) após 24 horas de tratamento. A biodisponibilidade do closantel em cabras é menor do que a observada em ovinos, o que explica o efeito protetor do fármaco contra H. contortus de 10 dias em caprinos, e de 28 dias em ovinos. No plasma, a maior parte do closantel circula ligado a proteínas, o que limita sua distribuição (volume de distribuição = 0,15 L/kg) e prolonga sua vida média no plasma (taxa média de eliminação em ovinos = 14,5 dias).

O closantel apresenta baixo metabolismo hepático (10% das doses), semelhante aos metabólitos monoiodados inativos. Noventa por cento da dose administrada é eliminada pela bílis, como droga-mãe. Como outros fármacos anti-helmínticos, o closantel forma parte de formulações combinadas, com anti-helmínticos BZD, lactonas macrocíclicas ou imidazotiazóis. Ele apresenta estreita margem de segurança, assim deve-se prestar especial atenção no momento de dosificar os animais ou de estimar o seu peso. Os principais sinais clínicos de intoxicação são midríases, anorexia, ranger de dentes, dispneia, diarreia e exoftalmia. O período de carência de 30 dias deve ser respeitado, antes de destinar os animais tratados ao consumo humano.

Rafoxanida é uma molécula halogenada com atividade similar à descrita para o closantel, sem atividade ectoparasiticida. Recomenda-se a administração oral ou intrarruminal em ovinos. Ela apresenta um mecanismo de ação e farmacocinética semelhante ao do closantel. Após administração oral da dose recomendada em ovinos (7,5 mg/kg), não se deve enviar os animais para o abate antes de 28 dias de administração.

A oxiclozanida tem eficácia anti-helmíntica similar à descrita para a rafoxanida, com a particularidade de ser ativa sobre Moniezia spp. Em termos gerais, o mecanismo de ação e as características farmacocinéticas (elevada união a proteínas e escassa distribuição) assemelham-se com os dos demais integrantes do grupo, com a ressalva de que a vida média plasmática desse fármaco (6,4 dias) é menor do que a descrita para o closantel e a rafoxanida. A menor vida média está relacionada ao metabolismo hepático que sofre o medicamento, e posterior eliminação biliar dos metabólitos conjugados. A dose oral recomendada em ovinos é de 15 mg/kg.

Clorsulon

É uma sulfonamida com atividade fasciolicida (> 8 semanas) que apresenta maior eficácia clínica em bovinos do que em ovinos e caprinos. Clorsulon tem apresentação oral para ovinos, em doses de 7,5 mg/kg. Formulações de aplicação subcutânea em combinação com ivermectina estão disponíveis para o uso em bovinos (2 mg/kg). A estrutura química do clorsulon é similar à de 1,3 difosfoglicerato, produto intermediário da glicólise. Por esse motivo, inibe de forma competitiva as enzimas fosfogliceroquinase e fosfogliceromutase.

A ruptura dos processos encarregados de geração de energia na F. hepatica origina alterações associadas ao dano no tegumento e necroses de células da gastroderme, que em última instância determinam a eliminação dos parasitas.

A biodisponibilidade oral do clorsulon é de 60% em ovinos e de 55% em caprinos (ROBERSON; COURTNEY, 1995). Essa limitada disponibilidade sistêmica pode ser explicada pela adsorção do medicamento pelo material particulado presente na ingesta, fenômeno que acontece com outros fármacos fasciolicidas (closantel). As máximas concentrações plasmáticas são atingidas entre 14 e 15 horas após o tratamento. A maior eliminação do clorsulon ocorre pela urina. Como os caprinos eliminam com maior rapidez o medicamento, a eficácia trematodicida nessa espécie é reduzida. A diferença em relação às salicilanilidas é que o clorsulon apresenta maior índice terapêutico e, após a administração de doses de 100 mg/kg em ovinos, não se observa manifestações tóxicas. O período de carência do fármaco é de 3 e 8 dias após administração, em leite e carne, respectivamente.

Diamfenetide

Este fármaco faz parte do grupo dos fenoxialcanos, é a única molécula fasciolicida com atividade limitada nos estádios imaturos (menores que 9 semanas) de F. hepatica. Por isso, o fármaco é útil para o tratamento da fasciolose aguda em ovinos e para a redução da contaminação pelas posturas, ao inibir o desenvolvimento de formas adultas do parasita. Diamfenetide é uma pré-droga que requer a formação de metabólitos ativos no âmbito hepático mediada por um processo de desacetilação. Os metabólitos formados, monoamino-diamfenetide e diamino-diamfenetide, concentram-se no parênquima hepático e atuam sobre o tegumento das fasciolas imaturas, comportando-se como ionóforos de sódio.

A entrada constante de sódio no interior dos trematódeos determina uma alteração iônica, em que estão envolvidos mecanismos compensadores, que leva à paralisia flácida dos parasitas. Após administração oral, o fármaco é absorvido no âmbito intestinal alcançando o fígado por meio da circulação portal. Por esse motivo, elevadas concentrações de diamfenetide são detectadas no fígado e bílis até 3 dias após a administração, o que assegura um eficaz efeito anti-helmíntico. A dose recomendada de diamfenetide em ovinos e caprinos é de 100 mg/kg. Diamfenetide é considerado uma droga segura, e não se observam manifestações tóxicas com doses quatro vezes superiores às recomendadas.

Fármacos cestodicidas

Benzimidazóis

Os anti-helmínticos BZD, em especial os que são do grupo dos metilcarbamatos, são eficazes para o tratamento das teníases dos ovinos e caprinos. Os fármacos mais utilizados para tal fim incluem ABZ, ABZSO, FBZ, OFZ e MBZ. ABZ e FBZ são usados em ovinos na dose de 5 mg/kg, enquanto MBZ requer uma dose de 20 mg/kg. Essas doses atingem um efetivo controle de Moniezia spp. ABZ (7,5 mg/kg) e FBZ (10 mg/kg) são efetivos contra Thysanosoma actinoides. A farmacologia desses compostos foi descrita no tópico Fármacos nematodicidas.

Bunamidina

O hidroxinaftoato de bunamidina é um sal utilizado em ovinos e caprinos no controle de tênias. O efeito tenicida da bunamidina baseia-se nas alterações no âmbito do tegumento, que determinam uma reduzida taxa de passagem de glicose e a morte do parasita. A tênia desprendida do órgão onde se encontra é digerida na luz intestinal, razão pela qual não é possível recuperar os parasitas na matéria fecal após o tratamento anti-helmíntico. O fármaco é administrado por via oral na dose de 25 mg/kg a 50 mg/kg. Nessa dose, bunamidina é considerada um fármaco seguro. A administração de três vezes a dose recomendada pode provocar diarreia, que se manifesta especialmente em animais jovens.

Niclosamida

Niclosamida é uma salicilanilida de excelente atividade tenicida em ovinos e caprinos quando utilizada na dose oral de 100 mg/kg, é considerada a droga específica para o controle de cestódeos em ruminantes. Recomenda-se jejum dos animais por um período de 12 horas prévias ao tratamento. Como a absorção gastrintestinal nessas espécies é muito baixa, o fármaco é muito seguro do ponto de vista de toxicidade. Além disso, as pequenas quantidades do composto absorvidas no âmbito gastrintestinal são metabolizadas no fígado, originando metabólitos sem atividade farmacológica.

O efeito cestodicida da niclosamida está relacionado à inibição da absorção de glicose e ao descompasso da fosforilação oxidativa, pelo qual bloqueiam-se as vias energéticas do parasita. As tênias desprendidas são digeridas na luz intestinal, não sendo possível identificar proglótides ou escólex nas fezes.

Praziquantel

É um fármaco de amplo espectro e de excelente atividade cestodicida, utilizado em ovinos e caprinos na dose de 10 mg/kg a 15 mg/kg. Após sua administração oral, apresenta boa absorção gastrintestinal, atingindo sua máxima concentração plasmática 2 horas após a aplicação. É eliminado principalmente como metabólitos inativos, os quais se originam no âmbito hepático. O praziquantel apresenta um elevado volume de distribuição, por isso, em humanos é recomendado para o tratamento de formas imaturas de cestódeos localizados em tecidos de difícil acesso, como o cérebro. A elevada distribuição possibilita ao fármaco atravessar com facilidade o tegumento das tênias. Após a absorção, o parasita sofre uma contração e vacuolização do tegumento, expondo antígenos subtegumentários que são alvo do sistema imunológico. Ambos os processos, contração e vacuolização, estão relacionados à entrada rápida de cálcio. Depois da contração inicial, o parasita sofre paralisia flácida. O praziquantel tem elevado índice terapêutico.

Fármacos ecto e endoparasiticidas: avermectinas e milbemicinas

O uso de agentes químicos, associado a medidas de manejo animal, representa uma das principais medidas de controle antiparasitário em ovinos e caprinos. O tratamento antiparasitário deverá fazer com que a droga ativa atinja o parasita-alvo para interagir com seus receptores, acionando seu efeito farmacológico. A quantidade do medicamento e o tempo de exposição do parasita a esta dependem das características dos processos farmacocinéticos dos diferentes fármacos. Existe uma direta relação entre o comportamento farmacocinético e a eficácia/persistência da atividade antiparasitária. A ivermectina (IVM) foi a primeira avermectina introduzida como fármaco antiparasitiário em medicina veterinária, em 1981. Posteriormente, foram incorporados outros compostos desse mesmo grupo, como também da família da milbemicina (moxidectina). Os medicamentos de ambas as famílias possuem atividade sobre endo e ectoparasiticida, recebendo a denominação de fármacos endectocidas, que define a combinação de seus efeitos nematodicida, inseticida e acaricida. A elevada potência, a correta dosagem em microgramas por quilo, o amplo espectro e a persistência de sua atividade antiparasitária conquistaram notável sucesso, sendo hoje, os medicamentos mais vendidos na história da terapêutica em medicina veterinária.

Bases farmacoquímicas da atividade endectocida

Os fármacos endectocidas (lactonas macrocíclicas) pertencem a duas grandes famílias, conforme o actinomiceto, de cuja fermentação provêm avermectinas e milbemicinas. A complexa estrutura química desses fármacos corresponde a uma lactona macrocíclica de 16 membros, semelhante à dos antibióticos macrolidos, mas sem efeito antibacteriano, unida a um grupo benzofurano (C2 a C8) e a um anel espiroquetal (C17 a C25). São moléculas grandes, com peso molecular entre 600 kD (milbemicinas) e 800 kD (avermectinas). As avermectinas (AVM) clássicas – abamectina (ABM), ivermectina (IVM), doramectina (DRM) e eprinomectina (EPM) – derivam da fermentação do actinomiceto Streptomyces avermitilis. Na fermentação do fungo para produzir a AVM, foram identificados 8 componentes (4 pares homólogos): 4 componentes recuperados em maior proporção (A1a; A2a; B1a; B2a) e 4 produtos recuperados em menor proporção (A1b; A2b; B1b; B2b). Os produtos A contêm na posição 5 um grupo metoxi e os produtos B, um grupo hidroxilo. De todos os produtos de fermentação produzidos, o B1 apresenta a maior atividade anti-helmíntica.

ABM é o produto natural proveniente da fermentação (AVM B1a) e IVM é um derivado semissintético da AVM B1a, contendo 80% de 22,23-dihidroavermectina B1a e menos de 20% de 22,23 dihidroavermectina B1b (FISHER; MROZIK, 1989). ABM difere de IVM no nível do duplo enlace no anel saturado entre C22-C23. DRM (25-ciclohexilo-avermectina B1) foi obtida por biossíntese mutacional, na qual o precursor (ácido ciclohexanocarboxílico) se incorporou a uma cepa mutante de S. avermitilis, obtendo uma AVM que difere de IVM quanto à estrutura química, em virtude da presença de um núcleo ciclohexilo na posição C25 (GOUDIE et al., 1993). Eprinomectina (EPM) é uma AVM desenvolvida para aplicação tópica, particularmente em gado bovino leiteiro. Ela difere quimicamente de IVM por um grupo acetilamino na posição 4” do grupo dissacarídeo (SHOOP et al., 1996). Moxidectina (MXD) (23-O-metiloxima-nemadectin), fármaco endectocida da família das milbemicinas (MBM), é produzido por uma combinação de fermentações de sínteses químicas. MXD é obtido por modificação química de nemadectin, composto natural obtido como produto de fermentação do actinomiceto Streptomyces cyaneogriseus (TAKIGUCHI et al., 1980). As lactonas macrocíclicas de ambas as famílias são fármacos de elevada lipossolubilidade, solúveis na maioria dos solventes orgânicos, com baixa solubilidade em água e sensíveis à luz ultravioleta. Essas drogas endectocidas apresentam propriedades físico-químicas gerais comuns, mas existem pequenas diferenças na estrutura química entre AVM e MBM ou ainda dentro das AVM, que determinam mudanças no comportamento farmacocinético, causando impacto sobre sua eficácia e persistência antiparasitária. A Figura 7 mostra a estrutura química das principais lactonas macrocíclicas disponíveis no mercado farmacêutico.

Figura 7. Estruturas químicas da ivermectina, doramectina e moxidectina.

Os endectocidas produzem paralisia em artrópodos e nematoides ao aumentar a permeabilidade da membrana celular para os íons cloro (Cl-), com a resultante hiperpolarização e paralisia da musculatura da faringe e do corpo dos parasitas. Os efeitos paralizantes são mediados pelos canais de cloro ligados ao ácido gama-aminobutírico (Gaba) ou ao glutamato. Porém, para os efeitos mediados por Gaba, são necessárias concentrações mais elevadas do que aquelas para abrir os canais de cloro ligados ao glutamato. A elevada afinidade dessas drogas seria dada pela união das subunidades alfa dos canais de cloro (ARENA et al., 1995; CULLY et al., 1994). Dessa maneira, uma paralisia na musculatura faríngea e somática dos parasitas, originada pela abertura dos canais de cloro ligados ao glutamato, é indicada como o principal mecanismo de ação (MARTIN et al., 2002; GEARY 2005). No entanto, efeitos inibidores no trato reprodutivo das fêmeas poderiam explicar a redução na postura de ovos, que é observada após ação desse fármaco em nematoides (FELLOWES et al., 2000).

A informação disponível no momento sugere que as MBM apresentam o mesmo mecanismo de ação das AVM, por existir diferenças farmacodinâmicas leves entre os grupos. MXD tem uma maior potência farmacológica, manifestada na sua ação sobre cepas resistentes a IVM. Essa maior potência seria em razão de maior afinidade de MXD pelas subunidades alfa do receptor de glutamato associado a canais de cloro. Por sua vez, MXD teria uma menor afinidade pelo transportador de membrana, conhecido como glicoproteína-P (Gp-P) (PRICHARD; ROULET 2005). O transportador atua como uma bomba de efluxo, e sua maior expressão em cepas de parasitas resistentes tem sido demonstrada. A menor afinidade de MXD pela Gp-P poderia explicar alguma vantagem em sua eficácia sobre nematoides resistentes a IVM em ovinos. A falta de atividade das AVM e MBM sobre trematódeos e cestódeos deve-se à ausência ou à menor transcendência da transmissão mediada por esses tipos de canais de cloro na coordenação neuromuscular desses parasitas, em comparação com nematoides ou artrópodos.

Propriedades farmacocinéticas

O comportamento fármacocinético destas moléculas difere do resto das drogas antiparasitárias, tendo em conta a prolongada permanência de concentrações detectáveis nos diferentes tecidos do animal tratado. Um elemento a ser considerado é o tipo de preparação farmacotécnica no qual são elaborados os fármacos endectocidas. Existe uma importante diferença de solubilidade aquosa entre IVM (0,006–0,009 mg/mL) e MXD (4 mg/mL), o que influencia na flexibilidade de formulações farmacêuticas. As formulações clássicas, utilizadas em ovinos e caprinos por via subcutânea, consistem numa preparação de base não aquosa. A preparação clássica de IVM tem como base o propilenglicol/glicerol formal 60:40. DRM vem formulada em uma preparação de base oleosa (azeite de sésamo/oleato de etilo 90:10). O tipo de formulação farmacêutica afeta a velocidade de absorção do composto que tenha MXD, IVM e DRM. O depósito de droga que fica no espaço subcutâneo após a administração de DRM retarda o processo de absorção, que acontece lentamente, e mostra, nos valores de vida média de absorção, o tempo preciso para atingir o pico de concentração plasmática (LANUSSE et al., 1997; LIFSCHITZ et al., 1999a).

Uma vez que esses fármacos são absorvidos no espaço subcutâneo e chegam à circulação sistêmica, a lipoespecificidade de cada composto é determinante para a distribuição deles nos diferentes tecidos, inclusive nos locais onde se encontram os parasitas-alvo. IVM, DRM e MXD são fármacos muito lipossolúveis, estando correlacionado à extensa distribuição nos diferentes tecidos do organismo, sendo particularmente elevado no caso de MXD.

As drogas endectocidas atingem elevadas concentrações em tecidos de localização parasitária, como as mucosas abomasal e intestinal, pele e tecido pulmonar, sendo essas concentrações significativamente maiores às obtidas no plasma. Esse aspecto é relevante para sua eficácia e duração antiparasitária (LIFSCHITZ et al., 1999b, 2000). Por sua vez, existe uma importante correlação entre os perfis de concentração da droga atingidos na circulação sistêmica (plasma) e nos diferentes tecidos de localização parasitária. MXD é uma molécula mais lipossolúvel do que IVM e DRM, o que causa notório impacto em seu padrão de distribuição tecidual e na permanência no organismo do animal tratado. A alta afinidade dos endectocidas pelos lipídios facilita seu depósito no tecido adiposo, principalmente no fígado e gorduras, que atuam como reservatórios da droga, sendo importantes para a persistência da atividade antiparasitária do medicamento. A maior permanência de concentrações de MXD, com prolongado período de eliminação, deve-se à presença do fármaco no depósito de gordura. Isso explica os prolongados períodos médios de eliminação descritos para MXD no plasma e nos diferentes tecidos, em relação a IVM e DRM (LIFSCHITZ et al., 1999b, 2000).

Mais de 90% das doses de moléculas endectocidas administradas são excretadas, pela bílis e fezes, como droga-mãe, sem se modificar (CHIU et al., 1990a; AFZAL et al., 1994). Pelas características físico-químicas, esses compostos podem fazer o ciclo entero-hepático, o que contribui para sua prolongada permanência no organismo animal. Após administração intravenosa de DRM em ovinos, 33% das concentrações secretadas na bílis sofrem ciclo entero-hepático (HENNESSY et al. 2000). O metabolismo oxidativo desses fármacos tem sido identificado em diferentes espécies animais, existindo pequenas diferenças nos tipos de metabólitos formados. Os principais produtos metabólicos identificados para IVM são o 24-hidroximetil-dihidroavermectina B1a e 3-O-desmetil-dihidroavermectina B1a. Porém, em bovinos e ovinos, o principal produto do metabolismo hepático de IVM é o metabólito hidroxilado; já, em suínos e caprinos, é o composto 3-O-desmetil-dihidroavermectina B1a.(ALVINERIE et al., 1994; CHIU et al., 1987; 1990b;).

Elevadas concentrações da droga-mãe e de metabólitos polares são recuperadas na gordura. Outros metabólitos menos polares que IVM droga-mãe têm sido detectados em tecido adiposo de bovinos e ovinos, mas não em suínos tratados com o fármaco. Esses metabólitos representam 60% a 70% do resíduo total da droga encontrado após 28 dias de tratamento com IVM em bovinos. A origem desses produtos metabólicos seria a esterificação em gordura dos metabólitos polares hidroxilados provenientes do fígado, os quais são estocados em gordura como ésteres de ácidos graxos (CHIU et al., 1989). Diferentes metabólitos mono e di-hidroxilados têm sido recuperados em variados tecidos tratados com MXD, e os principais produtos metabólicos estão sendo encontrados no fígado e fezes, 14- e 29-mono-hidroximetil-MXD (AFZAL et al., 1994). Comparando a extensão do metabolismo de MXD nas diferentes espécies, foi verificado que os ovinos metabolizam aproximadamente 32% do total da droga-mãe incubada com microssomas hepáticos, os bovinos 20,6%, e os suínos apenas 0,8%. Uma menor taxa metabólica de DRM, baseada na presença do grupo ciclo-hexilo no nível do C25, contribuiria para maior disponibilidade desse fármaco em plasma e tecidos de localização parasitária. Resultados obtidos in vitro confirmam esses dados, mostrando que, após a incubação de DRM com microssomas hepáticos bovinos, o percentual de droga-mãe representa 92,7% do total recuperado. As principais características farmacocinéticas das drogas endectocidas são resumidas na Figura 8.

Figura 8. Representação dos processos farmacocinéticos para fármacos endectocidas em ovinos e caprinos.

As drogas endectocidas têm mostrado ser substratos do transportador proteico Gp-P (DUPUY et al., 2001; POULIOT et al. 1997). Em mamíferos, esse transportador participa dos mecanismos de secreção biliar e intestinal, e também limita a entrada das endectocidas no sistema nervoso central. A importância da secreção intestinal tem sido demonstrada como mecanismo de eliminação de IVM (LAFFONT et al., 2003). O uso de moduladores da Gp-P como verapamilo (MOLENTO et al., 2004), itraconazole (BALLENT et al., 2007) e loperamida (LIFSCHITZ et al., 2002) induz um significativo incremento na disponibilidade de IVM e MXD em ovinos e bovinos. A Figura 9 mostra a relação entre as lactonas macrocíclicas e o transportador celular Gp-P.

Figura 9. Impacto farmacológico do potencial entre os fármacos endectocidas e a Glicoproteína-P no parasita e no animal hospedeiro.

(1) Sistema Nervoso Central.

Outra importante via de excreção das moléculas endectocidas é a glândula mamária, quando administradas a animais em lactação. Cinco e meio por cento das doses de IVM é eliminada pela glândula mamária em bovinos leiteiros (TOUTAIN et al., 1990). IVM e DRM atingem concentrações similares ou maiores no leite, quando comparadas com as obtidas no plasma de ovinos e caprinos. O percentual de doses eliminadas no leite é influenciado pelo seu teor de gordura. Em ovinos leiteiros de alta produção, tratados com IVM e MXD, o elevado teor de gordura no leite (7,8%) determinou a presença de maiores concentrações de moléculas endectocidas no plasma. Considerando a elevada eliminação pela glândula mamária, as AVM e MBM clássicas não são indicadas para uso em animais produtores de leite, apesar de seu uso “extra-label” em muitos países. Eprinomectin (EPM) é uma 4’’-epi-amino-avermectina, formulada para aplicação pour-on, com padrão de distribuição plasma/leite diferente dos compostos clássicos. A relação entre a disponibilidade no leite e no plasma é igual a 1 ou maior do que 1 para IVM, MXD e DRM, em ovinos, caprinos e bovinos leiteiros (IMPERIALE et al. 2004). A relação entre leite e plasma para EPM em bovinos, ovinos e caprinos, após o tratamento pour-on, foi de 0,1 a 0,2 (ALVINERIE et al., 1999a; 1999b, IMPERIALE et al., 2004; SHOOP et al., 1996).

Considerando sua baixa eliminação láctea, com concentrações máximas no leite que não superam os 4 ng/mL em bovinos, sendo o limite máximo de resíduos (LMR) no leite de 20 ng/g; EPM é recomendada para o tratamento de antiparasitário em bovinos leiteiros, sem período de carência para o leite de animais tratados. Ainda que o uso sem controle de EPM em bovinos tenha sido documentado, faz-se necessário obter mais informações para conhecer se seu padrão de absorção, após a administração tópica na dose de 0,5 mg/kg, é suficiente para uma adequada eficácia nos diferentes nematoides que afetam ovinos e caprinos.

Dada as dificuldades para o desenvolvimento de novas moléculas, a estratégia da indústria farmacêutica tem sido a incorporação de novas formulações de uma mesma droga ou de novos sistemas de liberação. Está bem documentado que o tipo de formulação farmacêutica influencia o processo de absorção das drogas endectocidas desde o local de aplicação parenteral. Após a administração de IVM em uma formulação de base oleosa, produz-se uma absorção retardada da droga, assim como uma lentidão na eliminação, quando comparado com o tratamento com a formulação clássica de propilenglicol/glicerol formol (60:40). Essas diferenças resultam em uma maior persistência de concentração de IVM nos sítios de localização parasitária, logo após a administração da formulação oleosa (LIFSCHITZ et al., 1999a).

A utilidade prática desses tipos de formulações de larga ação das endectocidas é a eliminação retardada da droga, que permite obter maiores concentrações no plasma e em tecidos parasitados durante a fase de eliminação pós-administração; o que pode impactar de forma diferente a atividade dos diversos tipos de parasitas internos e externos. Uma formulação injetável de longa ação de MXD para ovinos tem sido recentemente introduzida no mercado farmacêutico veterinário, com períodos prolongados de proteção contra endo e ectoparasitas. Dos ruminantes, os bovinos são os que apresentam a maior biodisponibilidade relativa quando comparados com ovinos e caprinos. Em cabras, após a administração oral de IVM e MXD, foi alcançada uma disponibilidade 6 a 13 vezes menor do que a obtida em bovinos após tratamento subcutâneo.

Diferentes vias de administração das drogas endectocidas têm sido experimentadas. Em ovinos, o tratamento com IVM por via oral resulta numa menor disponibilidade sistêmica da droga em comparação com a via subcutânea. A administração oral da MXD em ovinos resulta numa absorção mais rápida e com menor tempo médio de permanência, ao contrário da administração subcutânea (IMPERIALE et al., 2004). A menor disponibilidade sistêmica de IVM obtida após sua administração oral reduz a sua eficácia sobre parasitas externos, por isso não se recomenda essa via de aplicação para tratamento de sarna. Por sua vez, logo após a administração subcutânea de IVM em ovinos, a persistência da ação antiparasitária sobre nematoides gastrintestinais foi mais prolongada, quando comparada à obtida após o tratamento por via oral (BORGSTEEDE, 1993). A menor disponibilidade de MXD e IVM após a administração oral, em comparação com a administração subcutânea, deve-se ao elevado percentual de união ao material particulado da ingesta que essas drogas possuem. Isso limita a absorção da droga disponível após sua administração pela via oral. A baixa proporção de droga livre no trato gastrintestinal depende da ação do efluxo por parte do transportador celular proteico Gp-P, que limita sua absorção. Dessa forma, após a administração intrarruminal de IVM em ovinos, a biodisponibilidade absoluta é de 22%. Um resumo dos fatores que afetam a disponibilidade dos fármacos endectocidas após administração oral em ovinos (LIFSCHITZ et al., 2005) é apresentado na Figura 10. A comparação dos níveis plasmáticos de IVM e MXD após a administração oral e subcutânea em ovinos é mostrada na Figura 11.

Figura 10. Representação esquemática dos fatores que afetam a disposição gastrintestinal dos fármacos endectocidas após a sua administração oral em ovinos e caprinos.

Fonte: adaptado de Lifschitz et al. (2005).

Figura 11. Concentrações plasmáticas obtidas após a administração oral e subcutânea, em ovinos, de ivermectina (A) e moxidectina (B) a uma taxa de 200 mg/kg.

Fonte: adaptado de Imperiale et al., 2004.

Os ruminantes apresentam notáveis diferenças anatomofisiológicas com os animais monogástricos, especialmente no que diz respeito a seu sistema digestivo. A complexidade e a funcionalidade do trato digestivo dos ruminantes podem afetar notoriamente o comportamento farmacocinético de diversas drogas utilizadas na medicina veterinária. Um fator relevante na modificação do processo de absorção de drogas administradas pela via oral é a motilidade do trato gastrintestinal e taxa de passagem da ingesta. A taxa de passagem é definida como o tempo durante o qual os componentes da ingesta estão expostos aos processos de mistura, digestão e absorção no trato gastrintestinal, sendo uns dos principais fatores que podem alterar o comportamento farmacocinético das drogas antiparasitárias.

Fatores, como manejo (frequência e tipo de alimentação), ambiente (temperatura ambiente) e o próprio animal (idade, estado corporal, etc.), influenciam na taxa de passagem no trato digestivo. Entre os fatores da alimentação, a quantidade de fibra na dieta (tipo de dieta), assim como a quantidade ingerida (o nível de consumo alimentício), afeta a velocidade de passagem do bolo alimentício ao longo do trato gastrintestinal. Está demonstrado que pode haver um incremento na disponibilidade plasmática de IVM administrada por via oral em ovinos com baixo nível alimentar. O menor consumo de alimentos por animais com dieta restrita determinará uma menor taxa de passagem no trato gastrintestinal, retardando a eliminação de IVM na matéria fecal e favorecendo o processo do reciclado entero-hepático. Dessa forma, explica-se a maior disponibilidade plasmática de IVM obtida nos animais com restrição alimentar (ALI; HENNESSY, 1996). A composição corporal é outro fator a se levar em conta no uso dessas drogas tão lipossolúveis, particularmente com relação ao conteúdo do tecido adiposo. As diferenças na composição corporal interferem diretamente na velocidade de absorção, desde o local de aplicação subcutâneo, no processo de distribuição tecidual e fundamentalmente no depósito de gordura desses fármacos. Em estudos de avaliação de resíduos teciduais de MXD em ovinos, foram observadas maiores concentrações teciduais do fármaco (tecido adiposo e fígado) em animais de maior peso corporal, sacrificados aos 49 dias pós-tratamento, em relação aos animais de menor peso corporal sacrificados mais cedo. Como se vê, a composição corporal pode influir no comportamento farmacológico das drogas endectocidas, portanto, na persistência de sua ação antiparasitária.

Os endectocidas são drogas de amplo espectro terapêutico. A elevada potência de ação antiparasitária determina que esses fármacos sejam dosificados em microgramas por quilo de peso, sendo necessárias doses da ordem de miligramas por quilo de peso vivo para gerar alguma manifestação tóxica na maioria das espécies animais. Doses de 4 mg/kg em ovinos e bovinos produzem ataxia. Os sintomas da toxicidade aguda são similares nas diferentes espécies de mamíferos e são atribuídos à intoxicação do sistema nervoso central. Ataxia, tremores, midriasis e depressão seguida de morte são os sintomas clínicos mais comuns após a intoxicação aguda com IVM. A administração de IVM em doses duplas terapêuticas em bovinos, ovinos, equinos e suínos, durante a gestação, não induz efeitos embriotóxicos.

Essas drogas depositam-se no tecido adiposo, notadamente na gordura e fígado, e são eliminadas principalmente no leite. Estudos toxicológicos têm determinado a ingesta diária admitida e o LMR permitido nos diferentes tecidos de animais destinados ao consumo humano. Com base nos dados dos perfis de resíduos teciduais, as autoridades sanitárias têm determinado os períodos de carência para os diferentes fármacos endectocidas disponíveis no mercado, isto é, o tempo que deve passar, após o tratamento, para que a carne e o leite dos animais que receberam esses compostos possam ser consumidos. Existem algumas variações na legislação dos países, que estabelecem que a carne de animais tratados não deve ir para o consumo humano antes de 28 a 35 dias, quando se administra IVM, MXD ou DRM nas formulações clássicas. Os fármacos endectocidas aprovados para uso em ovinos não foram aprovados para utilização em animais leiteiros.

Espectro antiparasitário

As AVM e MBM possuem um amplo espectro de ação sobre parasitas internos (nematoides) e externos (artrópodos) em todas as espécies de animais domésticos; porém, não têm atividade antiparasitária in vivo em cestódeos e trematódeos. As drogas endectocidas diferenciam-se dos fármacos benzimidazóis por não possuírem efeito ovicida. Em ovinos, as drogas endectocidas têm elevada eficácia antiparasitária sobre nematoides gastrintestinais e pulmonares. Nematodirus battus e Cooperia curticei são os gêneros com doses limitantes de 0,2 mg/kg para formulações injetáveis ou orais. Os endectocidas são altamente efetivos contra estágios imaturos e adultos de diferentes nematoides gastrintestinais, tais como Ostertagia spp., Haemonchus spp., Cooperia spp., Nematodirus spp., Trichostrongylus spp., Strongyloides spp., Bunostomum spp., Trichuris spp., Oesophagostomum spp. e Chabertia ovina. Também possuem elevada eficácia sobre nematoides pulmonares (Dictyocaulus spp.). Por isso, o tratamento subcutâneo com drogas endectocidas é eficaz em ectoparasitas do tipo Psoroptes ovis, Sarcoptes scabiei e piolhos sugadores. Esses fármacos possuem menor eficácia em piolhos mastigadores e não são indicados para o controle destes. O tratamento contra larvas de Oestrus ovis pode ser realizado de forma efetiva com algumas das drogas endectocidas, aplicadas em suas formulações injetáveis ou orais. À semelhança dos piolhos mastigadores, a efetividade dessas drogas sobre Melophagus ovinus é menor. Os endectocidas são ativos contra a maioria dos nematoides que afetam caprinos. A baixa disponibilidade sistêmica desses fármacos em cabras (SCOTT et al., 1990; ALVINERIE et al. 1999b) tem motivado sua utilização em doses mais elevadas (0,3 mg/kg a 0,4 mg/kg), para as vias oral e subcutânea.

O objetivo do tratamento antiparasitário é que a droga ativa atinja o parasita-alvo em concentrações adequadas e durante o tempo necessário para gerar seu efeito farmacológico (interação farmacodinâmica), alterando a funcionalidade do parasita. Os diferentes gêneros ou estágios parasitários têm diversas localizações no organismo do animal parasitado e, após o tratamento com um fármaco anti-helmíntico, estarão expostos a concentrações de droga/metabólitos que atingem seus respectivos tecidos/sítios de localização. O tempo de exposição do parasita à droga está determinado pela difusão dela, desde a circulação sistêmica até os diferentes tecidos, ou seja, pelo padrão de distribuição tecidual do fármaco nos sítios onde se localizam os parasitas-alvo. As lactonas endectocidas são drogas de amplo espectro antiparasitário que atuam sobre endo e ectoparasitas. Pela prolongada permanência que esses compostos apresentam no organismo animal, surge com eles o conceito de “tempo de persistência antiparasitária”.

Do ponto de vista farmacológico, a eficácia e a persistência antiparasitária dependem do comportamento farmacocinético dessas drogas e particularmente de sua distribuição tecidual. Cabe esclarecer que a persistência de ação antiparasitária em ovinos acontece após a administração de qualquer droga endectocida por via injetável, e não por via oral. Os fármacos endectocidas possuem características cinéticas muito diferentes das de qualquer outro tipo de droga antiparasitária, o que sustenta essa atividade persistente por duas a cinco semanas após o tratamento em nematoides e artrópodos, segundo a formulação da droga ministrada.

Farmacologia da resistência anti-helmíntica: alternativas futuras

A intensificação dos sistemas de produção animal tem dado lugar a uma dependência quase exclusiva da quimioterapia. O desenvolvimento de resistência de diferentes gêneros parasitários à ação de diferentes grupos de substâncias químicas tem sido apontado em diversos sistemas de produção. A resistência a fármacos define-se como um estado de não susceptibilidade ou susceptibilidade diminuída ao efeito de uma concentração de um fármaco, que, em condições normais, causa inibição do crescimento ou morte celular. As modificações genéticas (mutação, transferência ou amplificação genética) que conferem resistência traduzem-se em diferentes modificações bioquímicas e moleculares, as quais são a base farmacológica da diminuição do efeito de um fármaco na célula ou no organismo resistente. Essas alterações moleculares manifestam-se por: a) mudanças celulares estruturais ou funcionais que modificam a captação de uma droga no sítio de ação, ou incrementam seu metabolismo/inativação ou efluxo celular, afetando a capacidade da droga de acumular-se intracelularmente; b) alteração dos sistemas enzimáticos necessários para que aconteça o efeito farmacológico da droga; c) alteração na estrutura de receptores celulares que afetam a união do fármaco no sítio de ação, fazendo seu efeito farmacológico dar-se pela diminuição no número de receptores ou pela afinidade da molécula com eles; d) variações nos diferentes processos celulares que compensam o efeito induzido pelo fármaco ou resistem a ele.

O desenvolvimento de resistência de diferentes gêneros parasitários à ação de diversos grupos de substâncias químicas é uma séria ameaça aos sistemas de controle. O mecanismo de ação de um fármaco anti-helmíntico determina o efeito sobre o parasita-alvo e o risco de desenvolver resistência. O aparecimento de resistência parasitária tem motivado pesquisas farmacodinâmicas que têm contribuído para a compreensão dos mecanismos de ação dos fármacos anti-helmínticos mais utilizados: benzimidazóis (BZD), imidatiazóis, levamisole (LVM), e avermectinas (AVM) e milbemicinas (MBM). Os BZD atuam ligando-se à tubulina e modificando o padrão de polimerização para a formação dos microtúbulos, o que leva à alteração de diversas funções celulares. A resistência ocorre quando mutações nos genes que codificam a produção de β tubulina causam a perda do receptor de alta afinidade. LVM atua como agonista colinérgico sobre as membranas das células musculares dos nematoides. Os mutantes resistentes ao LVM são deficientes em receptores para acetilcolina. As MBM atuam como agonistas de elevada afinidade sobre um receptor de glutamato associado a canais de cloro (localizados majoritariamente na bomba faríngea e células musculares somáticas), causando a hiperpolarização da neurona do parasita-alvo (nematoides e artrópodos) e bloqueando a transmissão de impulsos nervosos. A resistência a MBM pode estar associada a mutações em duas subunidades do canal de cloro ou à expressão aumentada de Gp-P, o que impediria o fármaco de alcançar concentrações suficientes para ativar o receptor de glutamato no parasita resistente.

A resistência múltipla a drogas (RMD) é uma resistência cruzada inespecífica a drogas hidrofóbicas com diferentes estruturas químicas e mecanismos de ação, as quais penetram nas células por difusão passiva e são eliminadas por mecanismos ativos, com gasto energético. As células que têm o fenótipo RMD expressam elevados níveis de Gp-P. Assim, a resistência deve-se à diminuição do acúmulo da droga no interior da célula, em virtude do aumento no efluxo dessa célula. O grau de sobreprodução de Gp-P está correlacionado com o grau de resistência. Em conclusão, a expressão exagerada de Gp-P e o aumento na capacidade de remover drogas do citosol celular caracterizam o fenótipo RMD e são as bases da resistência cruzada inespecífica, demonstrada amplamente em quimioterapia anticancerígena e investigada como possível mecanismo bioquímico relacionado ao fenômeno de resistência anti-helmíntica.

O desenvolvimento de resistência parece ser uma consequência inevitável do uso contínuo de antiparasitários e leva a implícitas mudanças genéticas que são herdadas de geração a geração. Considerando que não existe droga 100% eficaz contra 100% das espécies parasitárias durante 100% dos tratamentos; cada vez que um antiparasitário é usado, persistem, na população, indivíduos sobreviventes ao tratamento, possuidores da informação genética que dá a resistência a dado tipo de droga. A frequência de tratamentos aumenta a pressão de seleção, permitindo que os indivíduos resistentes e suas progênies aumentem a população de parasitas, detectando-se quando a resistência alcança níveis elevados e o tratamento anti-helmíntico torna-se ineficaz. Existem relatos de casos de resistência a ivermectina, principalmente em nematoides de ovinos e caprinos e recentemente de bovinos. A resistência, em ovinos e caprinos, principalmente a H. contortus tem se estendido a outros gêneros, como Teladorsagia circumcincta e Teladorsagia colubriformis.

O uso intensivo de endectocidas, particularmente de ivermectina, resultou no aumento da pressão de seleção, com consequentes relatos dos primeiros casos de resistência em nematoides de bovinos. Ressalta-se que, em alguns casos, a moxidectina mantém a eficácia contra nematoides resistentes a ivermectina, tendo como base sua maior potência farmacológica. A diminuição da pressão de seleção reduz o número de tratamentos por ano, dentro de um sistema integrado de controle antiparasitário, o qual é necessário para conservar a eficácia terapêutica das drogas endectocidas nos diferentes sistemas de produção.

Apesar dos importantes avanços alcançados na caracterização molecular e genética populacional da resistência de parasitas, o estudo da ação de drogas anti-helmínticas apresenta ainda muitas dificuldades em propor soluções concretas, que visem interromper o desenvolvimento do fenômeno da resistência em condições práticas. Deve-se observar corretamente os distintos aspectos epidemiológicos e as medidas de manejo, uma vez que são também fatores relevantes na prevenção do aparecimento da resistência e na reversão da já existente. Conservar a susceptibilidade anti-helmíntica em algumas populações parasitárias é de fundamental importância, para isso, é essencial admitir algumas perdas na produção, por causa de parasitas, no intuito de manter a susceptibilidade. É necessário desestimular aquelas estratégias que recomendam a redução das populações de parasitas no hospedeiro e na refugia, pela aplicação sistemática de drogas (por exemplo: sistemas supressivos). Quando a resistência está instalada, não tem sentido continuar o tratamento utilizando a mesma droga, inclusive o mesmo grupo químico (salvo a inexistência de compostos alternativos), com uma frequência cada vez maior.

Em geral, a seleção para resistência ocorre com aqueles fármacos que atingem concentrações que matam os parasitas susceptíveis, mas permitem a sobrevivência de parasitas com genes (heterozigotos ou homozigotos) para resistência. As subdoses de antiparasitários (abaixo dos níveis de eficácia), decorrentes do uso de preparações farmacêuticas de baixa qualidade, do cálculo inadequado de peso ou doses e de outros fatores, favorecem a seleção de parasitas resistentes (heterozigotos). O ideal seria a prevalência, dentro da população parasitária, de indivíduos homozigotos susceptíveis e heterozigotos, o que ajudaria a diluir os genes para resistência, retardando o desenvolvimento dela.

Em razão da grande dificuldade no desenvolvimento de novas moléculas, é prioritário otimizar o uso das drogas existentes. Aumentar a biodisponibilidade de droga ativa é uma estratégia farmacológica que ajuda na otimização do tratamento e no retardo do desenvolvimento da resistência. Toda ferramenta farmacológica que permite elevar a biodisponibilidade sistêmica do fármaco anti-helmíntico possibilita que maiores concentrações da droga, com uma duração suficiente, atinjam os sítios de localização parasitária e possam entrar em contato com os helmintos-alvo. Essa maior biodisponibilidade permitirá que menores quantidades de parasitas possuidores de genes para resistência dentro da população possam sobreviver ao tratamento. Isso é aplicável àqueles mecanismos de resistência que dependem da concentração de anti-helmíntico.

Como ferramentas farmacológicas podem ser citadas: interferências farmacológicas para diminuir o efluxo do fármaco do parasita (uso de moduladores da Gp-P), interferência no metabolismo, e eliminação e manejo da alimentação (tipo e quantidade da dieta, jejum pré e pós-tratamento, etc.). O comportamento farmacocinético das drogas pode ser modificado, diminuindo o consumo de alimento temporariamente em ovinos antes do tratamento anti-helmíntico ou fazendo jejum em ovinos e bovinos antes e depois do tratamento. Isso retarda o trânsito gastrintestinal e prolonga a duração da absorção gastrintestinal e os processos de eliminação biliar e reciclagem entero-hepática dos compostos anti-helmínticos (BZD e AVM), resultando em aumento da biodisponibilidade sistêmica deles.

A rotação anual ou combinação de compostos anti-helmínticos com diferentes mecanismos de ação e o uso de poucos tratamentos anuais, conforme seja possível, parecem ser as recomendações práticas mais viáveis, na atualidade, para diminuir o desenvolvimento da resistência. Apesar das tentativas de introduzir um controle antiparasitário integrado, as medidas de controle continuam sendo baseadas, quase exclusivamente, no tratamento químico. Os tratamentos anti-helmínticos supressivos frequentes, as subdoses e a falta de utilização intercalada de drogas de distintas classes são causas primárias do aumento da pressão de seleção, pois favorecem o desenvolvimento e disseminação da resistência antiparasitária. A falta de integração entre medidas de manejo animal e tratamentos é um fator de alto risco no desenvolvimento da resistência.

A disponibilidade futura de novas moléculas com atividade anti-helmíntica está comprometida, por causa do crescente custo requerido para o descobrimento, pesquisa e desenvolvimento de compostos quimicamente diferentes. Além disso, o desenvolvimento dos fármacos endectocidas, por suas características de espectro e potência, tem dificultado o incremento pela indústria farmacêutica, em curto prazo, de alguma molécula “superior”, que justifique o investimento no campo das drogas antiparasitárias. Porém, na última década, têm sido gerados estudos farmacológicos que envolvem novas moléculas com potente atividade antiparasitária: marcfortine e paraherquamide (antagonistas colinérgastrointestinalcos), ciclodepsipéptidos (agonistas gabaérgicos e antagonistas colinérgicos), neuropéptidos (FaRP) (efeitos mio-moduladores em nematoides, trematódeos e artrópodos) e recentemente a identificação dos derivados aminoacetonitrilo (AADs) (com efeito de paralisia espástica, atuando sobre uma subunidade do receptor colinérgico específico dos nematoides). Nesse contexto, as descobertas recentes sobre moléculas com mecanismos de ação diferentes e com atividade sobre nematódeos resistentes aos grupos químicos disponíveis são altamente promissoras. Isso inclui: a) o descobrimento do emodepside (fármaco da família dos ciclodepsipéptidos), que tem sido introduzido para uso em felinos (Bayer Animal Health), porém oferece um enorme potencial para ser desenvolvido para utilização no tratamento de nematoides resistentes a outros grupos químicos em ruminantes (HARDER et al., 2005; JESCHKE et al., 2005) e cujas características farmacológicas são resumidas na Figura 12; b) a recente identificação da atividade anti-helmíntica dos AADs (Novartis Animal Health Inc.) (KAMINSKY et al., 2008), como uma nova classe de moléculas anti-helmínticas que oferece um potencial farmacológico promissor. A estrutura química e as características farmacológicas específicas dos AADs estão resumidas na Figura 13.

Figura 12. Propriedades farmacológicas da família dos ciclooctadepsipéptidos (emodepside).

Figura 13. Propriedades farmacológicas da família dos aminoacetonitrilo (AADs).

Muito trabalho será necessário para que se ofereça comercialmente esses ou outros fármacos anti-helmínticos. Não resta dúvida de que é difícil contar com grupos químicos alternativos para o controle anti-helmíntico em espécies animais de produção. Porém, além da possibilidade futura de contar com novas moléculas com atividade anti-helmíntica, o uso racional de químicos no controle antiparasitário é indispensável para assegurar um desenvolvimento produtivo sustentável. É claro que o trabalho farmacoparasitológico conjunto será crucial para propor soluções, de modo que se retarde o desenvolvimento da resistência aos fármacos disponíveis.

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Notas

Capítulo 1

1 Hipobiose é a interrupção do desenvolvimento dos estádios imaturos dos nematoides nos tecidos do hospedeiro, geralmente no quarto estágio (L4) inicial. As condições climáticas adversas são citadas como causa de hipobiose, mas, provavelmente, a principal causa de indução da hipobiose, em espécies de parasitas que ocorrem no Brasil, é a resposta imunológica do hospedeiro.

Capítulo 15

1 Dados compilados e não publicados

2 Dados compilados e não publicados.

Capítulo 16

1 Refugia: parcela da população de parasitas (adultos, ovos e larvas na pastagem) que permanece com caráter susceptível. Essa população não sofreu o processo de seleção pela ação das drogas e tem papel fundamental na manutenção da eficácia destas. Acredita-se que a refugia contribua significativamente para a diluição dos genes que codificam para resistência, retardando o processo de seleção (VAN WYK, 2001). A alternativa mais eficiente para manter uma população em refugia é o tratamento seletivo dos animais.

2 Resultados de avaliações fornecidos pelo Sr. Fernando Dal Corso.

3 Comunicação pessoal feita por Armando Nari, em 2005.

Capítulo 21

1 http://www.csiro.au/resources/pfb8.html

2 http://www.thearkdb.org/